使用凯氏定氮法测定蜂王浆粗蛋白.docx

使用凯氏定氮法测定蜂王浆粗蛋白一优普通用1 .原理以浓硫酸消化分解蛋白质，其中的氮变成氨，再与硫酸化合生成硫酸铉。生成的硫酸镂与氢氧化钠反应再生成氨，用蒸储法使氨蒸出，用标准浓度的硫酸溶液与其反应，剩余的硫酸再经氢氧化钠标准溶液滴定，从实际消耗的酸量可推算出生成的氨量。2 .仪器与试剂仪器：分析天平(0.0001g)、50ml凯氏烧瓶、凯氏定氮半微量蒸储装置1套、滴定装置1套。试剂：浓硫酸(分析纯，密度1.84)。硫酸铜与硫酸钾混合试剂：称取5水硫酸铜1g、硫酸钾10g,置于研钵中混合均匀，研细备用。混合指示剂：量取0.1%次甲基红乙醇溶液2份和0.1%滨甲酚绿乙醇溶液3份，临用时混合。2%硼酸溶液：称取硼酸2g,量取混合指示剂2m】、乙醇20ml,置于锥形瓶中，加蒸储水溶解并稀释至IOom1,摇匀备用。40%氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠40g,加蒸镭水溶解并稀释至100nI1。稀硫酸：量取浓硫酸5.7ml,加蒸储水稀释至IOom1。0.01mol/L的标准酸溶液3 .测定方法(1)消化：准确称取蜂王浆样品约1g,放入干燥的凯氏烧瓶内，加入2g硫酸铜与硫酸钾混合试剂，再沿瓶壁缓缓加入61ml浓硫酸，在瓶口放小漏斗，使烧瓶成45°斜放，在通风橱内置于电炉上加热消化(先小火缓缓加热，使溶液温度保持在沸点以下，等暴沸停止后，逐步加大火力)。待消化液呈清澈的亮绿色后，再继续加热30min,消化即可完毕(消化时间约为】h),冷却后备用。(2)蒸储：量取2%硼酸溶液IOml置于100ml的锥形瓶中，加入混合指示剂2滴和少量稀硫酸，将冷凝管尖端浸入液面下。然后，将凯氏烧瓶中的消化液经由漏斗移人蒸储器中，用少量蒸偏水淋洗凯氏烧瓶和玻璃漏斗数次。向蒸馈器中加入40%氢氧化钠溶液约25ml之后，再加入5ml蒸储水(一半流入蒸馆器，一半在玻璃杯中作水封)。用调温电炉加热开始蒸储。待锥形瓶内溶液的颜色由酒红色变为蓝绿色时，继续蒸储Ionlin,将冷凝管尖端提出液面，使蒸汽继续冲洗Inlin,用少量蒸储水淋洗尖端，停止蒸饰。(3)滴定：用0.01mol/L的标准酸溶液滴定锥形瓶中吸收的氨量，滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫红色为终点，并作空白试验校正。4 .计算粗蛋白(%)="V2)*NWI00m*D式中:Vl样品消耗标准酸溶液的体积，mL；V2空白消耗标准酸溶液的体积，mL；N标准酸溶液标定的当量浓度，mol/L；0.014IN标准酸溶液ImL相当于氮克数；F蛋白质系数，蛋白制品为6.25；m样品的质量，g；D样品的稀释倍数。平行实验允许误差不超过±2'取平均值确定结果。鉴于手工操作比较繁琐，推荐使用北京优谱通用科技有限公司的1800系列全自动凯氏定氮仪进行测定，全自动操作，力口酸，加碱、蒸储、滴定、结果计算和打印输出全自动完成，无需人工干预！