新型冠状病毒核酸检测标本接收、核酸提取前处理标准操作规程.docx

新型冠状病毒核酸检测标本接收、核酸提取前处理标准操作规程1.标本接收：1.1 标本运送人员和接收人员对标本进行双签收。标本接收人员按二级防护佩戴防护设备。1.2 接收标本前应检查标本运送箱外包装是否无破损，打开容器前后对标本运送箱用75%酒精喷洒消毒。取出标本密封袋后对密封袋用75%酒精喷洒消毒，并检查是否密封好，立即将标本放入专用冰箱或冷藏箱加冰块冷藏保存。1.3 标本不能及时处理的应置于-80冰箱保存。2标本处理：2.1 标本前处理2.1.1 标本前处理及核酸提取操作的工作人员应按标本采集人员要求进行三级防护。标本前处理应在具有外排功能的生物安全柜中操作。生物安全柜中应配备两个废物桶，桶中装055%含氯消毒液。前一个废物桶用于丢弃标本及与标本接触过的实验耗材，后一个用于装接触过核酸的耗材。2.1.2 取出标本后将标本容器用75%酒精喷洒消毒。2.1.3 咽拭子和鼻咽拭子如果可直接用于核酸提取，当实验室条件不够时可增加病毒灭活步骤。2.1.4 血液标本，300OrPm离心10分钟，打开离心机后取出标本，冰浴3min5min后再进行下一步操作。吸取血浆提取核酸。2.1.5 对痰液、肺泡灌洗液和大便标本应充分振荡混匀后进行病毒灭活。2.1.6 病毒灭活。提前将水浴箱预热至56,将需要灭活的标本从密封袋中取出，放入水浴锅中的试管架上，标本盖上搁置重物防止标本采集管漂浮。每隔Iomin将标本摇匀一次，灭活时间40min.可据提取试剂所采用的温度调整灭活温度，但不能低于56,在提高温度后可适当缩减灭活时间，优化灭活条件最好有预实验支持，保证标本能在有效温度下有足够时间灭活。病毒灭活也可采用56干浴灭活。如果使用含胭盐的采样管，胭盐会对病毒起到灭火作用，可以省去56灭活步骤。2.1.7 痰液或肺泡灌洗液中如果有浓痰无法吸样时，可尝试进行液化处理，在灭活标本中加入4倍体积4%NaOH,室温放置IOminz12000rpm离心5min,去上清后加入生理盐水悬浮，1200OrPm离心5min,去上清后再用生理盐水悬浮，1200OrPm离心5min,去上清后留约200L用于核酸提取。2.2 核酸提取和加样2.2.1 用75%酒精对生物安全柜进行消毒，并紫外照射30mio同时将核酸提取仪用75%酒精处理并照射紫外30mio2.2.2 将灭活标本从水浴锅中或干浴设备中取出，静止15分钟以上再执行下一步操作。223打开标本采集管，吸取200In标本（动作轻柔）加入核酸提取试剂中。为保证人员安全和核酸提取纯度和效率，可采用基于磁珠吸附的自动化核酸提取方法。2.2.4 处理完标本后应对生物安全柜、工作台面、移液器等用品用75%酒精处理。2.2.5 核酸提取完后立即将提取物进行封盖处理。并对核酸提取仪用75%酒精处理并照射紫外30mino在生物安全柜内将提取核酸加至反应管中。2.2.6 完成核酸提取后应用75%酒精在实验室内空气中喷洒，IOmin后开启实验室紫外灯照射30min0紫外照射后，工作人员可着一次性医用帽子、手套、隔离服、鞋套进入实验室，用lmolL的盐酸或者0.2%含氯消毒液处理工作台面和地面，并开启实验室通风装置通风Ih,后用清水清洁台面和地面。2.2.7 标本提取后将标本收集，做好标识放于标本保存冰箱。