流感血常规特点及实验室诊断技术要点.docx

流感血常规特点及实验室诊断技术要点流行性感冒（简称流感）是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，甲型和乙型流感病毒每年呈季节性流行。流感病毒抗原性易变,传播迅速，容易在学校、托幼机构和养老院等人群聚集的场所暴发疫情，孕妇、婴幼儿、老年人和慢性病患者等高危人群感染流感后往往病情更重。流感的诊断性检查主要包括病毒分离培养、血清学检测、免疫学检测和分子生物学检测，血常规对流感的诊断有所帮助。流感主要实验室诊断病毒分离培养传统的病毒分离培养法是流感实验室诊断的金标准，检测人员在胚胎鸡蛋或哺乳动物细胞中培养病毒，然后通过更具特异性的检测手段来检验血凝素（HA）测定阳性样品中的流感病毒。这种方法灵敏性高，并可进一步分析病毒亚型，但费时费力，无法在短时间内评估大量样本。一般需要2-14天，平均3-5天。在流感流行季，对重症或有重症流感高危因素的流感样病例应进行病原学检测，但应尽早给予抗流感病毒药物治疗，不必等病原学结果。血清学检测若血清学检测提示恢复期抗体滴度比急性期上升4倍或以上，即可诊断为流感。急性期血清需在发病3天内采集，恢复期血清则在2-4周采集。这项检查周期长，结果滞后，因此常用作回顾性研究及流感流行趋势监测。免疫学检测1）免疫荧光法。主要包括直接免疫荧光试验（DFA）和间接免疫荧光试验（IFA）,有研究认为在分子检测法出现之前，DFA是继病毒培养之外最好的流感病毒检测方法之一，具有灵敏度高，操作相对便捷的优点。2）免疫胶体金检测法。主要包括胶体金快速免疫层析法（GICA）和快速斑点免疫金渗滤法（DIGFA）,1030分钟可得出结果，适合在门诊和重症监护病房，有助于医生对病人及时开展诊治措施。分子生物学检测技术1）逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）RT-PCR对于RNA病毒来说是最普遍使用的分子扩增法，有助于对病毒亚型进一步分析，但价格昂贵，对检测人员有较高要求。2）多重RT-PCR法可在一个反应中同时检测多个呼吸道病毒和病毒分型，灵敏度fO3）实时荧光定量PCR法与传统PCR法相比，灵敏度和特异度大大提高。4）反转录环介导等温扩增技术（RT-LAMP）检测反应需在65恒温下l2h,灵敏度和特异度与RT-PCR相当。5）依赖核酸序列的扩增法（NASBA）可在不同来源序列中检测核酸的特定区域，较适用于扩增RNA,灵敏度高。6）焦磷酸测序法实现基因水平上进行病毒鉴定、亚型判断以及致病性分析，可以在6h内完成一个样本的检测。7）基因芯片技术流感病毒检测灵敏度86%,特异度299%o8）质谱技术是一种物理检测方法，4h内科检测出92种不同的流感病毒毒株，但质谱仪价格昂贵，不适合推广使用。血常规淋巴细胞（LYM）计数降低。在1-6岁儿童中，感染A型和B型流感相比流感检测阴性的儿童LYM计数明显降低，且A型和B型流感间没有明显差异。在>6岁的儿童中，感染甲型流感的儿童LYM计数显著降低，而乙流感染者和流感病毒检测阴性者之间的LYM计数没有明显差异。单核细胞（MON）计数升高MON计数增高可作为大流行时的替代标记物，用来诊断甲型流感（HlNl）o淋巴细胞/单核细胞比值（LMR）1.MR<2可被用作大流行期间，诊断住院成人中甲型流感H3N2以及HlNl替代检测标准。对于儿童，LMR的诊断价值在>6岁儿童中比<6岁更大，对<1岁的儿童来说LMR对甲型流感的预测价值大于乙型流感。敏感性为89.27%,特异性为89.61%o血小板（PLT）计数降低在1-6岁儿童中，甲型流感阳性的PLT计数明显低于流感阴性者，但乙型流感感染者的PLT技术没有明显改变。中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）NLR是禽流感（AIV-H7N9）患者死亡的独立危险因素，相对于NLR<19.94的患者，NLR19.94组的死亡率显着增加（P<0.05）,特异性为100%,灵敏度为28.4%,NLR可能是评估感染H7N9的患者的预后生物标志物。