第3章基因工程章节测试（解析版）.docx

第3章基因工程章节测试一、单选题1 .下列关于生物体细胞内酶的叙述，错误的是（）A.胰蛋白酶是由胰腺分泌的一种消化酶，在发挥作用时它可以破坏肽键8. DNA聚合酶的主要作用是将单个脱氧核甘酸加到引物或产物的3,端，形成磷酸二酯键C.限制酶能识别特定DNA序列，并在特定的位点上断开磷酸二酯键D.酶的催化作用受温度、PH等因素的影响，且酶都在核糖体上合成2 .最新研究发现，抗原提呈细胞可以作为端粒供体细胞，通过细胞外囊泡向T细胞转移端粒。这些端粒被剪切因子TZAP切割，然后转移到EV中形成端粒囊泡，其中还携带了帮助端粒与T细胞染色体末端融合的Rad51重组因子。下列说法母氓的是（）A.TZAP剪切因子可能是一种DNA酶B.可以从血液中获得端粒囊泡，作为药物或疫苗的载体C.该研究发现的新机制，有望在延长人类寿命方面发挥作用D.Rad51重组因子可以延长T细胞的端粒，减缓T细胞的衰老3 .下列关于蛋白质工程的说法正确的是（）A.蛋白质工程无须构建基因表达载体B.蛋白质工程需要限制性内切核酸酶和DNA连接酶C.对蛋白质的改造是通过直接改造相应的mRNA来实现的D.蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的4 .下列关于DNA粗提取与鉴定、DNA片段的扩增及电泳鉴定的原理的叙述正确的是（）A.利用DNA溶于酒精，但蛋白质不溶于酒精的原理，可分离DNA与蛋白质B.将白色丝状物加入二苯胺试剂后沸水浴，待试管冷却后观察颜色变化C.PCR扩增四轮循环后，产物中同时含有两种引物的DNA片段所占比例为7/8D.电泳鉴定DNA利用了DNA在电场中会向着它所带电荷相同的电极移动的原理5 .TaqDNA聚合酶的特点是（）A.耐高温B.不具有专一性C.可连接DNA片段D.催化氢键形成6 .棕色脂肪细胞是一种拥有较小脂肪颗粒和大量线粒体的细胞，其主要功能是通过氧化脂肪来产热、供能，维持体温平衡。已知棕色脂肪细胞的线粒体中可合成血红素（非蛋白质），通过黄体酮受体膜组分2（PGRMC2）运输至细胞核。研究人员发现，脂肪组织特异性PGRMC2敲除小鼠（PATKO）与对照组相比低温耐受性降低，适应性产热能力出现明显缺陷。检测PATKo棕色脂肪细胞中转录因子的稳定性，发现转录因子ReV-Erba的表达水平上调，进而影响了线粒体的功能。下列说法错误的是（）A.血红素的合成体现了基因通过控制酶的合成来控制代谢过程B.线粒体是棕色脂肪细胞氧化脂肪产热的主要结构C. PATKO的变化说明血红素可能抑制Rev-Erba的合成或活性D.敲除PGRMC2基因后小鼠脂肪消耗增加，可用于研究肥胖的形成机制7 .植株在干旱、低温等逆境中，脱水素（具有一定抗干旱胁迫和耐冷冻能力的蛋白质）被诱导表达，脱水素基因编码区共含678个碱基对。科学家利用如图所示PBII21质粒，以及Xbal和SaCl两种限制酶，运用农杆菌转化法，将脱水素基因导入草莓试管苗叶片细胞，再经植物组织培养获得脱水素基因过量表达的转基因草箍植株。A.重组质粒利用SaCl和HindIn切割后能得到150ObP片段，则表明目的基因正确插入质粒B.组织培养过程中，培养基需添加卡那霉素和新霉素以便筛选转基因植株C.可以利用PCR技术鉴定目的基因是否整合到草箍染色体的DNA上D.转基因草莓植株批量生产前需进行抗干旱、耐冷冻实验8 .基因工程需要特定的工具，下列不属于基因工程基本工具的是（）A.限制酶B.DNA连接酶C.质粒D.解旋酶9 .下列相关叙述正确的是（）A.解旋酶和DNA聚合酶的作用部位均为氢键B.染色体是DNA的唯一载体C.真核生物的基因均在染色体上呈线性排列D. RNA是某些病毒的遗传物质10.下表列出了相关实验的原理，其中簿送的是（）选项实验原理A微生物的纯培养用平板划线法或稀释涂布平板法，将单个微生物分散在固体培养基上，培养得到单菌落B制作泡菜乳酸菌在无氧情况下将葡萄糖分解成乳酸CDNA的粗提取DNA在2molL-NaQ溶液中溶解度最低，可用于提取DNADDNA的电泳DNA分子在凝胶中的迁移速率与DNA分子的大小和构象等有关A.AB.BC.CD.D11 .在PCR的实验操作中，下列说法正确的是（）在微量禽心管中添加各种试剂时，只需要一个枪头离心管的盖子一定要盖严用手指轻弹离心管壁离心的目的是使反应液集中在离心管的底部A.B.®C.®D.®12 .下面关于聚合酶链式反应（PCR）的叙述，错误的是（）A. PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合B. PCR过程中DNA聚合酶能够将4种脱氧核甘酸加到引物的5,端C. PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成D. PCR的每次循环一般可以分为变性、复性和延伸三步二、多选题13 .热启动PCR可提高扩增效率，其基本方法是：进行反应之前将TaqDNA聚合酶、dNTP和引物等先不要加入样品管内，而是将样品加热，待温度升到70度以上时，再将上述试剂加入，开始PCR反应，下列叙述正确的有（）A.Taq酶最适催化温度范围为50-60CB.与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物C.两条子链合成一定都是从5'端向3'端延伸D.PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了TaqDNA聚合酶的特异性14.早期胚胎细胞异常凋亡是目前克隆猪成功率低的主要原因。用实时荧光逆转录PCR技术（RT-qPCR）检测细胞凋亡抑制基因Bcl2的表达水平，有助于了解胚胎发育不同时期BCI-2表达水平与细胞凋亡的关系。下列说法正确的是（）卵母细胞重组早期体一白地硅伏细晌1细胞胚胎"子宫良种猪一体细胞/不同发育时期提取细胞裂解物坐L扩增产物A.对重组细胞进行培养时需加入血清等天然成分B.需要用激素对受体进行同期发情处理C.利用RT-qPCR技术检测细胞凋亡抑制基因BCl2的表达水平，需提取细胞或组织中的RNA,并在逆转录酶的作用下逆转录成CDNA,再以CDNA为模板进行PCR扩增D.胚胎在受体子宫发育过程中，其遗传特性不受影响15 .水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂，将其第47位的天冬酰胺变成赖氨酸（LyS）,使其与分子内第4或第5位苏氨酸间形成氢键，来帮助水蛭素N端肽段的正确取向，从而提高抗凝血效率。下列叙述正确的是（）A.利用蛋白质工程对水蛭素进行改造的过程不遵循中心法则B.改造水蛭素的过程中需要用到限制酶和DNA连接酶C.通过基因工程和蛋白质工程生产的水蛭素的氨基酸序列相同D.对水蛭素进行分子设计必须从预期水蛭素的功能特点入手16 .OsGLOKEcCAT.ECGCL和TSR四个基因分别编码四种不同的酶，研究人员将这些基因分别与叶绿体转运肽（引导合成的蛋白质进入叶绿体）基因连接，构建多基因表达载体（载体中部分序列如图所示），利用农杆菌转化法转化棉花，在棉花叶绿体内构建了一条新的代谢途径，提高了棉花的产量。下列叙述错误的是（）EcCAT OsGLOl 豕EcGCL*TSR-T-DNA注：。启动子D终止子密叶绿体转运肽基因序列A.四个基因都在棉花叶绿体内进行转录、翻译B.OsGLOKECCAT基因转录时以DNA的不同单链为模板C.应选用含卡那霉素的培养基筛选被农杆菌转化的棉花细胞D.若转基因棉花的产量提高则可确定四个基因在棉花中成功表达三、非选择题17 .自然界中能够产生生物荧光的酶的统称为荧光素酶。荧光素酶及其合成基因在生物研究中有着广泛的利用。(1)荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因，其作用是将筛选出来。(2)下表为4种限制酶的识别序列和酶切位点，下图为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法(只用一种酶)获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是O限制酶MspIBamHIMbolSmaI酶切位点出CCCf3叫叫3MspIBamllIMboISmaII!II荧光素酶基因(3)利用PCR技术扩增荧光素酶基因是利用的原理，使荧光素酶基因数量呈方式增加。(4)迄今为止，可将上述具有荧光素酶基因的运载体导入动物细胞的技术，应用最多的、最有效的是o经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。(5)囊胚阶段的胚胎进行胚胎分割，可以提高胚胎的利用率，但在进行分割时应注意O18 .在基因工程的操作过程中，有多种方法可检测目的基因是否导入受体菌，回答下列问题。环丝氨酸辅助筛选法四环素能使细菌停止生长但不致死；环丝氨酸能使正常生长的细菌致死，而对停止生长的细菌不致死。某质粒如图所示(AmPr表示氨茉青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)，Tetr中插入目的基因后失活。用此质粒构建表达载体，转化细菌后，结果有3种：未转化的细菌、含空质粒的细菌、含重组质粒的细菌。(1)用含有的培养基对上述3种细菌进行筛选，只有含空质粒的细菌被淘汰，原因是O(2)在上述筛选的基础上,若要筛选出含重组质粒的细菌，还需使用含有的培养基。荧光定量PCR技术在PCR反应体系中，加入的荧光探针与模板DNA的某条链互补结合，当合成的子链延伸至探针处，探针被酶切降解，荧光监测系统就会接收到荧光信号，具体原理如下图所ZjSo(3)可通过检测判定待测细菌中是否含有模板DNA,且荧光达到某一特定强度所需的循环次数越,初始时模板DNA含量越高。(4)通过上述技术定量检测目的基因，需从设计的多对引物和多种探针中选择特异性最好的组合，为此需进行多组实验，每个实验组需向反应体系中加入o(填字母)a.转基因细菌的DNA模板b.非转基因细菌DNA模板c.定量的待测引物d.定量的待测荧光探针e.耐高温的DNA聚合酶f.解旋酶g.足量的脱氧核甘酸(dNTP)h.扩增缓冲液i.ATP19 .通过对藏红花的研究发现它很可能成为未来理想的抗癌药物之一。由于其产量极低,采收耗时费力，在中国被列为珍稀名贵中药材。利用植物组培技术提高藏红花产量成为研究热点之一。(1)培养藏红花常采用MS合成培养基。除了氨基酸、蔗糖、维生素、水、无机盐等营养物质外，培养基中还必须加入,以促进外植体的过程。对外植体的和培养基的过程是避免杂菌污染的必要条件。下表为不同激素配比及浓度对诱导愈伤组织生成的影响(30天统计)。分组激素及浓度(mgjl)夕体数愈伤组织生长情况愈伤组织诱导率/%16-BA,02,4-D,220颗粒状，黄色，生长缓慢，易褐化8026-BA,0.12.4-0,220礴状，黄褐色，生长缓慢，易褐化9536-BA,0.22,4-D,220颗粒状，黄色，生长较快,少量褐化9546-BA,0.52,4-D,220颗粒状，处，生长较快，移褐化9856-BA,0.5NAA,0.220小硒状，黄褐色，生长缓慢,容易褐化25(2)1、2、3、4组的自变量为c结果表明：6-BA和2,4-D诱导愈伤组织时具有作用。(3)从表中可知，愈伤组织的最佳生长状况应该是。因此,建议在制作MS培养基时应该选用的激素及浓度应该是。(4)若要比较6-BA与NAA联合使用和6-BA与2,4-D联合使用的效果哪种好，需要增加一组对照实验，其设置激素及浓度应该为。20 .巨噬细胞移动抑制因子(macrophagemigrationinhibitoryfactor,MIF)是一种在进化中高度保守的蛋白质，具有重要的生物学功能。研究发现，MIF在哺乳类动物生殖系统各器官和母胎界面均有表达，参与了生殖过程的多个环节，包括胚胎早期发育、胚胎植入、胎盘发育和妊娠维持。为进一步阐明MlF蛋白在哺乳动物早期胚胎发育中的作用提供理论支持，通过现代生物技术对MIF在牛胚胎早期发育中的表达模式和功能进行初探。回答下列问题：(1)根据研究目标，要获得特定的牛胚胎细胞，先采用的方法大量收集牛卵母细胞，牛卵母细胞培养到(填时期)再与解冻并处理的精子结合，完成体外受精。(2)体外受精得到的受精卵需要在中保温培养。所要维持的气体条件中包含5%的CO2,CO2的作用是进行早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种有机盐类、维生素、氨基酸、核昔酸等营养成分外，还要添加和(3)为探究MlF对牛胚胎早期发育率的影响，采用显微注射MIF抗体的方法来干扰MIF蛋白的表达。研究人员采用一技术得到特异性强、纯度高的MlF单克隆抗体。该技术需要一些特殊的诱导因素处理，如_、和电流刺激等。(4)用RT-PCR技术(将RNA的逆转录和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术)探究MlF在胚胎早期发育过程中的表达模式。完善实验思路：I.提取不同发育时期牛胚胎中mRNA,逆转录成CDNA作为PCR扩增的II .在PCR反应体系中加入_、以作为原料，开始扩增。III .PCR扩增后通过仪器观察，初步判断MIF表达量的变化。21.目前新冠病毒的检测方法主要有核酸检测法和抗体检测法。核酸检测阳性为确诊的首要标准。请回答下列问题：(1)新冠病毒是一种单链RNA病毒，核酸检测法是取被检测者的RNA,以RNA作为模板，按照的原则获得CDNA片段，并进行PCR扩增，用荧光标记的新冠病毒核酸探针来检测PCR产物中是否含有新冠病毒的cDNA。PCR中使用的酶是,扩增目的基因的前提是要有,反应中的每次循环可分为变性、复性和延伸三步,其中复性的结果是O(2)研究人员基于病毒表面抗原研发出了病毒灵敏性高的抗体诊断试剂盒,该试剂盒能用于精确诊断的免疫学原理是o感染早期，患者用诊断试剂盒检测会出现能检测出核酸而检测不出抗体的情况；患者康复后，会出现的情况。未感染新冠病毒的正常人和康复患者检查结果相同的原因可能是O参考答案：1. D【分析】1、蛋白酶：作用是催化蛋白质水解为短肽。在动物体内分为胰蛋白酶和胃蛋白酶等。在动物的胰液、胃液，植物组织和微生物中都有分布。2、DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3、DNA聚合酶只能将单个核甘酸加到已有的核甘酸片段的末端，形成磷酸二酯键。4、限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶。【详解】A、胰蛋白酶是由胰腺分泌的一种消化酶，在发挥作用时它可以破坏蛋白质的肽键，A正确；B、DNA聚合酶是在DNA复制过程中使用的酶，它的主要作用是将单个脱氧核甘酸加到引物或产物的3,端，形成磷酸二酯键，B正确；C、限制酶是在基因工程中使用的酶，它能识别双链DNA分子的特定核甘酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开，把DNA切割成不同的片段，C正确；D、绝大多数酶的化学本质是蛋白质，少数是RNA,蛋白质的合成场所是核糖体，而真核生物的RNA主要在细胞核中合成，D错误。故选D。2. A【分析】细胞衰老端粒学说端粒学说认为，端粒DNA序列在每次细胞分裂后会缩短一截。当端粒DNA序列被截短后，端粒内侧的正常基因的DNA会受到损伤。【详解】A、TZAP剪切因子可能是一种限制酶，能将DNA切成片段，A错误；B、EV作为细胞外囊泡，可以游走在血液中，其中含有端粒，因此，可以从血液中获得端粒囊泡，作为药物或疫苗的载体，B错正确；C、该研究发现的新机制表明端粒囊泡中还携带了帮助端粒与T细胞染色体末端融合的Rad5i重组因子，可见有望实现端粒的延长，延缓衰老，据此推测，该研究在延长人类寿命方面发挥作用，C正确；D、题中信息表明Rad51重组因子可以延长T细胞的端粒，减缓T细胞的衰老，进而为延缓衰老提供思路，D正确。故选A。3. B【分析】1、蛋白质工程是通过修改基因或创造合成新基因来改变生物的遗传和表达性状，合成新的蛋白质，蛋白质工程从属于基因工程，蛋白质工程是第二代基因工程。2、蛋白质工程的过程为:预期蛋白质功能一设计预期的蛋白质结构T推测应有氨基酸序列一找到对应的脱氧核甘酸序列（基因）。【详解】A、蛋白质工程是以基因工程为基础的，蛋白质工程需要构建基因表达载体，A错误；B、蛋白质工程需要限制性内切核酸酶（切割目的基因和运载体）和DNA连接酶（连接切割后的目的基因和运载体），B正确：C、对蛋白质的改造是通过直接改造相应的基因来实现的，C错误；D、蛋白质工程是从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核甘酸序列（基因），故蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是不完全相同的，D错误。故选Bo4. C【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCI溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。【详解】A、DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精，可将DNA与蛋白质分离，A错误；B、在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，不能等冷却后观察，B错误；C、PCR扩增四轮循环后，1个DNA合成了16个DNA,其中有2个DNA携带母链而只有一种引物，因此产物中同时含有两种引物的DNA片段所占比例为14/16=7/8,C错误；D、由于同性相斥、异性相吸，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动，电泳鉴定DNA利用了DNA在电场中会向着它所带电荷相反的电极移动的原理，D错误。故选C。5. A【分析】PCR技术：（1）概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。（2）原理：DNA复制。（3）前提条件：要有一段已知目的基因的核甘酸序以便合成一对引物。（4）条件：模板DNA、四种脱氯核甘酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）（5）过程：高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；中温延伸：合成子链。【详解】A、根据已知的核甘酸序列合成引物，当引物与DNA母链通过碱基互补配对方式结合，该过程需要TaqDNA聚合酶催化，在PCR过程中，需要用高温使得DNA双链解开，因此TaqDNA聚合酶的特点是耐高温，A正确；B、酶具有专一性，B错误；C、TaqDNA聚合酶不能连接DNA片段，DNA连接酶才能连接DNA片段，C错误；D、TaqDNA聚合酶催化磷酸二酯键的形成，D错误。故选A。6. D【分析】基因控制性状的两条途径：1.基因通过控制酶的合成来控制代谢过程，进而控制生物体性状。2.基因通过指导蛋白质的合成，控制蛋白质结构进而直接控制生物体的性状。【详解】A、血红素不是蛋白质，基因通过影响血红素的合成影响线粒体的功能，体现了基因通过控制酶的合成来控制代谢过程，A正确；B、线粒体是细胞呼吸的主要场所，故是棕色脂肪细胞氧化脂肪产热的主要结构，B正确；C、PATKo中血红素进入细胞核的量减少，而ReV-Erba的表达水平上调，说明血红素可能抑制转录因子ReV-Erba的合成或活性，C正确；D、敲除PGRMC2基因后小鼠适应性产热能力下降，说明脂肪消耗减少，D错误。故选D。7. B【解析】分析图示可知，该质粒上含有三个限制酶切点，科学家利用如图所示PBH2I质粒，以及Xbal和SaCl两种限制酶，运用农杆菌转化法，将脱水素基因导入草毒试管苗叶片细胞,说明目的基因插入的位置为1900bp所在位置,即用脱水素基因片段替代了质粒中1900bp片段。若用SaCl和HindIn切割重组质粒后，会得到822+678=150ObP的新片段。【详解】A、根据分析可知，由于重组质粒上移除190ObP而补充了脱水素基因的678个碱基对,加上未移除的822bp,所以用SacI和Hindln切割重组质粒后，可得到822+678=1500bp的新片段，据此可确定目的基因正确插入了质粒，A正确；B、题中提供的限制酶切割位点对卡那霉素抗性基因没有影响，所以无论是否插入了目的基因，卡那霉素抗性基因都可以表达，起不到筛选转基因植株的作用，B错误；C、PCR技术是进行DNA扩增的技术，需要一段引物来进行扩增，依照脱水素基因的核酸序列设计一段引物，若能进行扩增，说明转入目的基因成功，C正确；D、植株批量生产前，需要在个体水平上进行抗干旱、耐冷冻实验，以确保转基因植物中的脱水素基因表达出了蛋白质并发挥了作用，使植物表现为抗干旱、耐冷冻，D正确。故选Bo8. D【分析】基因工程的工具：（I）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核甘酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核甘酸之间的磷酸二酯键断裂。（2）DNA连接酶：连接的是两个核昔酸之间的磷酸二酯键。（3）运载体：常用的运载体有质粒、噬菌体、动植物病毒。【详解】ABC、基因工程的基本工具有限制酶（识别特定的核甘酸序列并切割相应位点）、DNA连接酶（连接切割后的目的基因和运载体）和质粒（用作运载体），ABC不符合题意；D、解旋酶是在DNA分子复制时起催化作用的酶，可打开DNA双链结构，D符合题意。故选D。9. D【分析】DNA聚合酶的作用部位是磷酸二酯键，连接DNA片段。染色体是DNA的主要载体，在线粒体和叶绿体中也有少量的DNA分子。【详解】A、DNA聚合酶的作用部位是磷酸二酯键，A错误；B、染色体是DNA的主要载体，在线粒体和叶绿体中也有少量的DNA分子，B错误；C、线粒体和叶绿体中的基因不在染色体上，C错误；D、RNA是RNA病毒的遗传物质，D正确。故选D。10. C【分析】微生物常见的接种的方法：平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养基表面，经培养后可形成单个菌落。【详解】A、平板划线法和稀释涂布平板法都是常用的接种方法，用平板划线法或稀释涂布平板法，将单个微生物分散在固体培养基上，培养得到单菌落，A正确；B、乳酸菌是厌氧生物，在无氧条件下可进行无氧呼吸产生乳酸，可用于制作泡菜，B正确；C、DNA在2molLNaCl溶液中溶解度最高，可用于溶解DNA,C错误；D、DNA分子在凝胶中的迁移速率与凝胶琼脂糖的浓度、DNA分子的大小、构象等有关，可用于DNA电泳，D正确。故选C。11. C【分析】PCR技术：1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。2、原理：DNA半保留复制。3、前提条件：要有一段已知目的基因的核音酸序列以便合成一对引物。4、条件：模板DNA、四种脱氯核甘酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶。5、过程：高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；中温延伸：合成子链。【详解】在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的吸液枪头都必须更换，错误；离心管的盖子一定要盖严，防止液体外溢，正确；用手轻弹离心管壁的目的是使反应液充分混合，正确；熟心的目的是使反应液集中在离心管的底部，提高反应效果，正确。综上分析，C正确，ABD错误。故选C。12. B【分析】PCR是利用DNA在体外摄氏95°C高温时变性会变成单链，低温（经常是60左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖（5,3）的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。【详解】A、PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合，A正确；B、PCR过程中DNA聚合酶能够将4种脱氧核甘酸加到引物的3,端，B错误；C、PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成，C正确；D、PCR的循环过程分为高温变性（DNA双链解聚）、复性（模板链与引物结合）和延伸（合成子链）三步，D正确。故选Bo13. BC【分析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术；原理是DNA复制；条件：模板DNA、四种脱氧核甘酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。【详解】A、Taq酶最适催化温度范围为6070,即延伸时的温度，A错误；B、分析题意可知，热启动PCR进行反应之前将TaqDNA聚合酶、dNTP和引物等先不要加入样品管内，故可减少反应起始时引物错配形成的产物，B正确；C、DNA分子两条链反向平行，PCR扩增时引物加到3,端，复制时子链只能是从夕端向到3'端延伸，C正确；D、PCR产物DNA碱基序列的特异性是碱基互补配对的结果，不能体现TaqDNA聚合酶的特异性，D错误。故选BCo14. ABCD【分析】1、动物细胞核移植：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。2、胚胎移植的生理基础：（1）供体与受体相同的生理变化，为供体的胚胎植入受体提供了相同的生理环境；（2）胚胎在早期母体中处于游离状态，这就为胚胎的收集提供了可能；（3）子宫不对外来胚胎发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能；（4）胚胎遗传性状不受受体任何影响。【详解】A、对重组细胞进行培养时，其培养基的成分包括糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，通常需加入血清、血浆等天然成分，A正确；B、胚胎移植成功的基础是供体和受体具有相同的生理状况，需要用激素对受体进行同期发情处理，B正确；C、用实时荧光逆转录PCR技术（RT-qPCR）检测细胞凋亡抑制基因Bcl-2的表达水平，逆转录是以RNA为模板，在逆转录酶的作用下逆转录形成CDNA,再用CDNA进行扩增，C正确；D、胚胎在受体子宫发育过程中，受体为供体的胚胎提供发育的条件，其遗传特性不受影响，D正确。故选ABCDo15. BD【分析】蛋白质工程的基本思路：从预期的蛋白质功能出发一设计预期的蛋白质结构一推测应有的氨基酸序列T找到并改变相对应的脱氧核昔酸序列（基因）或合成新的基因T获得所需要的蛋白质。【详解】A、蛋白质工程的基本思路是根据蛋白质的功能和结构反推基因序列，再通过基因表达合成蛋白质，该过程是中心法则的逆运用，遵循中心法则，A错误；B、蛋白质工程必须通过改造或合成基因来完成，是第二代基因工程，实施过程需用到限制酶和DNA连接酶构建基因表达载体，B正确；C、基因工程生产的蛋白质是自然界已有的蛋白质，而蛋白质工程能生产出自然界中不存在的新型蛋白质分子，两者的氨基酸序列不同，C错误；D、对蛋白质进行分子设计应从预期的蛋白质功能出发，对蛋白质的结构进行设计一,D正确。故选BDo16. AC【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等，标记基因可便于目的基因的鉴定和筛选。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。【详解】A、四个基因在叶绿体外合成蛋白质，由叶绿体转运肽引导合成的蛋白质进入叶绿体，即这四个基因的转录和翻译过程都在叶绿体外完成，A错误；B、启动子位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA,图中OsGLo1、ECCAT基因启动子的位置不同，因而，转录时以DNA的不同单链为模板，B正确；C、卡那霉素抗性基因不在T-DNA上，没有转移到宿主细胞的染色体DNA上，因此应用潮霉素培养基筛选被农杆菌转化的水稻细胞，C错误；D、通过导入四个基因，在棉花叶绿体内构建了一条新的代谢途径，提高了棉花的产量，据此推测，若转基因棉花的产量提高则可确定四个基因在棉花中成功表达，D正确。故选ACo17. (1)含有目的基因的细胞MSPlDNA双链复制指数(4)显微注射技术输卵管将内细胞团均等分割【分析】I、PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氯核甘酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3,端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5,端自3,端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程，DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3,端延伸DNA链。2、分析题图：含有目的基因的外源DNA分子中含有限制酶BamHI、SmaI.MbOl和MspI的识别序列和切割位点，其中BamHI的酶切位点在目的基因的中间，MboI的酶切位点只有一个，Smal的识别序列中含有MSPl的识别序列，因此要获得目的基因可用限制酶MSPl切割。(1)荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因，标记基因的作用是将含有目的基因的细胞筛选出来。要获得目的基因必须在目的基因的两侧相应的酶切位点进行切割，图示中可以看出，BamHI的酶切位点在目的基因的中间，故不可取；MboI的酶切位点只有一个，故不可取；根据表格可以看出，Smal的识别序列中含有MSPl的识别序列，因此要获得目的基因可用限制酶MspI切割。(3)PCR技术为体外扩增DNA分子，其原理是DNA双链复制；故利用PCR技术扩增荧光素酶基因是利用DNA双链复制的原理，使荧光素酶基因数量呈指数方式增加。(4)将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法。经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的输卵管或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。(5)对囊胚阶段的胚胎进行胚胎分割时，应注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和发育。【点睛】本题结合图表，考查了基因工程的工具和步骤等知识，要求考生识记基因工程的概念、原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节较多，再结合图中信息准确答题。18.(1)四环素和环丝氨酸含空质粒的细菌有TetL四环素不能抑制其生长，因此环丝氨酸使其致死。而未转化的细菌和含重组质粒的细菌都不含Tet"被四环素抑制生长导致环丝氨酸不能致死(2)氨节青霉素荧光少(4)a>c、d、e>g、h【分析】L基因工程育种原理：DNA重组技术(属于基因重组范畴)方法：按照人们的意愿，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。操作步骤包括：提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与表达等。举例：能分泌人类胰岛素的大肠杆菌菌株的获得,抗虫棉，转基因动物等。2.PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。条件：模板DNA、四种脱氧核昔酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)【详解】(1)据题意分析可知，“四环素能使细菌停止生长但不致死；环丝氨酸能使正常生长的细菌致死，而对停止生长的细菌不致死”，所以用含有四环素和环丝氨酸的培养基对上述3种细菌进行筛选，只有含空质粒的细菌被淘汰，而未转化的细菌和含有重组质粒的细菌停止生长，因为含空质粒的细菌有TeR四环素对其不起作用，而环丝氨酸使其致死。(2)在上述筛选的基础上，若要筛选出含重组质粒的细菌，还需使用含有氨羊青霉素的培养基，因为重组质粒上存在AmPr氨节青霉素抗性基因，则在该培养基上含有重组质粒的细菌能正常生长，而未转化的细菌被淘汰。(3)据题意分析可知，“加入的荧光探针与模板DNA的某条链互补结合，当合成的子链延伸至探针处，探针被酶切降解，荧光监测系统就会接收到荧光信号“，推测可通过检测荧光探针判定待测植物中是否含有模板DNA,且荧光达到某一特定强度所需的循环次数越少，则初始时模板DNA含量越高。（4）通过上述技术定量检测目的基因，需从设计的多对引物和多种探针中选择特异性最好的组合，为此需进行多组实验，该实验运用了体外扩增DNA技术，因此需要耐高温的DNA聚合酶、引物、模板和原料，为了达到上述目的还需要加入基因探针，因此每个实验组需向反应体系中加入a.转基因细菌的DNA模板，c.定量的待测引物，d.定量的待测荧光探针，e.耐高温的DNA聚合酶，g.足量的脱氧核甘酸（dNTP）,h.扩增缓冲液即a、c、d、e、g、ho【点睛】熟知基因工程的原理和操作步骤是解答本题的关键，本题重点考查目的基因检测和鉴定的方法和相应的原理，能根据题目信息进行合理的分析并结合所学准确答题是解答本题的必备能力。19. 植物激素脱分化消毒灭菌6-BA的浓度协同颗粒状,黄色,生长较快,不易褐化6-BA浓度为05mg,2,4-D浓度为2mgL6-BA浓度为05mgUlNAA浓度为2mgl【分析】1、植物组织培养：在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。2、已分化的细胞经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的过程叫脱分化。再分化是愈伤组织继续进行培养，重新分化出根或芽等器官。3、植物组织培养时培养基的成分有矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素、有机添加物，与动物细胞培养相比需要蔗糖、植物激素，不需要动物血清。4、植物组织培养技术的用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。5、对照实验设计的基本原则：单一变量原则，等量原则，对照原则，科学合理原则。【详解】（1）植物组织培养过程中，除了为植物提供氨基酸、蔗糖、维生素、水、无机盐等营养物质外，培养基中还必须加入植物激素，用来诱导外植体的脱分化过程。植物组织培养过程中需要严格的无菌操作环境，对外植体的消毒和培养基的灭菌可以有效避免杂菌的污染。（2）分析表中数据，1、2、3、4组的不同是6-BA的浓度，这是人为控制改变的量，属于自变量。实验数据显示，6-BA和2,4-D共同使用时诱导愈伤组织的效果高于单独使用，所以二者具有协同作用。（3）从表中可知，愈伤组织诱导率最高为98%,此时愈伤组织的生长状况最佳表现为颗粒状，黄色，生长较快，不易褐化。因此，在制作MS培养基时应该选用的激素及浓度应最好为6-BA浓度为0.5mgL