血清麻疹IgM抗体试验(酶免法)作业指导书.docx

血清廓疹IgM抗体试验（酶免法）作业指导书1 .原理利用包被在固相上的抗人IgM-链抗体直接捕获待测血清的IgM,然后在经酶标抗体显色进行特异性抗体检测。2 .标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹。2.2标本种类：血清或血浆。2. 3标本要求：采集病人静脉血2ml,室温放置不超过4小时，分离血清备用。3. 标本储存：最好使用新鲜标本，如需保存，可于2-8°C冷藏48小时或-20C冷冻4周。避免标本反复冻融。4. 标本运输：密封，室温运输。5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6. 试剂6. 1试剂名称：麻疹病毒抗体酶免试剂盒6.2试剂生产厂家：XX生物工程有限公司6. 3包装规格：96TestKit6.4 试剂盒组成：包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A,底物B,终止液，封口膜，密封袋。6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。7. 仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7. 2仪器厂家：Rayto7. 3仪器型号：RT-2100C8操作步骤8. 1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25。C）,微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。8. 2配制洗涤液：1支浓缩洗涤液加380ml（96T）蒸溜水。8.3 标本稀释：待测血清用标本稀释液按1：50（稀释后每孔加样100UI（或每孔加入200ul样本稀释液后再4ul血清样本，充分混合）。8.4 设空白、阳性、阴性各一孔，阴、阳性对照不做稀释直接各加IoOU1。8.5温育（一）：充分混匀，加上封板膜，置37温育30分钟。8.6洗涤（一）：用洗涤液充分洗涤3次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）O8. 7加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体2滴，轻拍混匀。8.8 温育（二）：充分混匀，加上封板膜，置37温育30分钟。8.9 洗涤（二）：用洗涤液充分洗涤3次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。8. 10每孔加显色剂A及显色剂B各1滴，置37温育10分钟。9. 11目测法不终止，比测法每孔加终止液一滴。10. 果判断与分析9 .1目测：在白色背景下观察各孔显色，有明显蓝色者为阳性，无色者为阴性.10 2仪器检测：每孔加终止液1滴（50ul）,轻摇，以空白对照调零，用酶标仪在45Onm波长测定各孔OD值.临界值（C.0.）=阴性对照孔均值N×2.1（阴性对照孔OD值小于0.1时以0.1计）阳性：样本OD值S/C.0.21（SN22.1）阴性：样本OD值SC.O.V1（SNV2.1）在临界值附近的样品，应重复检测，并结合临床症状综合判断。10 .质量控制：每次均应有阴阳对照，其OD值应在要求范围内。11 .参考值范围：阴性12 .临床意义：麻疹病毒是麻疹的病原体。儿童最常见的一种急性传染病，通过呼吸道或接触传染，除引起麻疹外，常并发呼吸道感染，如哮喘，支气管炎，毛细支气管炎等，并可并发巨细胞间质肺炎、妊娠期感染麻疹病毒，可能流产及死产明显增加。麻疹病毒可根据临床表现进行分型诊断，但非典型者需分离病毒或作血清抗体测体，也可用分泌物涂片找多核巨细胞来确诊。13 .操作性能：特异性强，灵敏度高，重复性好。14 .方法局限性15 .注意事项15 .1使用前试剂应置室温平衡，用前摇匀，剩余包被板条应密封保存，以免受潮。15.2 本试剂盒应置28贮存，有效期6个月，不同批号试剂不能混用，标本稀释液及酶结合物不能冻结。15.3 所有样品都应按传染源处理。15.4 使用过程如遇无法解决问题，应与试剂公司或当地经销商联系。16 .当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。17 .参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）。18 .其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。