2024届药学专业本科生毕业论文.docx

后微势技争院本科生毕业论文（设计）题目：白藜芦醇对亚硝酸盐的清除及亚硝胺阻断作用探讨姓名：刘玉锋学院：食品药品学院专业:药力勿制剂班级：09级2班学号：2303090213指导老师：张孝林职称：讲师2024年12月30日安徽科技学院教务处制摘要1关键词1前言11试剂和仪器21.l试剂21.2仪器22原理22.1亚硝酸钠的清除率的测定22.2阻断亚硝胺合成的原理23试验方法31. 1溶液的配制32. 2NaNO2标准液的制备及吸光度的测定33. 3不同浓度白藜芦醇溶液在pH=3时对亚硝酸钠的清除率的测定44. 4不同浓度白藜芦醇溶液在pH=3时对亚硝胺合成的阻断率测定44结果及分析55. 1NaNo2溶液的标准曲线的绘制56. 2不同浓度的白藜芦醇在pH=3时对亚硝酸钠的清除率及对亚硝胺的阻断率55探讨及结论7致谢7参考文献8英文摘要9白藜芦醇对亚硝酸盐的清除及亚硝胺阻断作用探讨药物制剂：刘玉锋指导老师：张孝林摘要：目的：以亚硝酸盐的清除率和亚硝胺合成的阻断率为指标，探讨不同浓度的白藜芦醇在酸性下对亚硝酸盐的清除和对亚硝胺合成的阻断作用。方法：分别配制O.1mgmL.0.2mgmL、0.4mgmL、0.8mgmL、0.16mgmL0.32mgmL和0.64mgmL浓度的白藜芦醇溶液和5ugmL亚硝酸钠溶液,在pH=3模拟胃酸条件下，采纳分光光度法，分别测定不同浓度的白藜芦醇对亚硝酸钠的清除率及亚硝胺生成的阻断率。结果：在酸性条件下，不同浓度的白藜芦醇对亚硝酸钠均有较强清除作用，在浓度小于0.32mg/mL时随着浓度增大而增大，最大达到63.48%O同时对亚硝胺的生成有较强的阻断率，最大达到40.94%O结论：白藜芦醇对亚硝酸盐有很强的清除实力，对亚硝胺的生成有较强的阻断实力。关健词：亚硝酸盐，白藜芦醇，分光光度法，亚硝胺，清除，阻断刖百癌症是当前威逼人类生活的最大杀手，依据世界卫生组织统计，全世界每年约有500万左右的人被癌症夺去生命。在致癌物中，亚硝胺是最令人关注的一类化学致癌物质。亚硝酸盐作为一种发色剂和防腐剂，在肉制品加工中得到了普遍的应用。很多蔬菜中自然含有的硝酸盐，在人体内通过细菌的作用也可被还原为亚硝酸盐。亚硝酸盐是合成亚硝胺的前体之一匕人体内的这些亚硝酸盐在肯定条件下可以与食物中的仲胺、叔胺等形成亚硝胺。N-亚硝基化合物是一种致癌性很强的化合物，己探讨的近300种N-亚硝基化合物中，约90%以上具有动物致癌性，并证明N-亚硝基化合物可在体内外由前体物胺类与硝酸盐或亚硝酸盐形成。在体内代谢过程中，特殊是在胃液中简单形成亚硝胺。因此,降低胃内的亚硝酸盐含量及阻断亚硝胺前提的合成”从而达到防癌抗癌的目的是人类同癌症斗争的有效途径之一，而白藜芦醇在这方面的探讨鲜见报道。白藜芦醵（resveratrol,简称ReS）是非黄酮类的多酚化合物，日本人Tokaoka1940年首次从毛叶藜芦的根部分别得到。1963年Nonomura等提出白藜芦醇是某些草药治疗炎症、脂类代谢紊乱和心脏疾病等的有效成分，是存在于植物中的自然抗氧化剂，如葡萄、虎杖等被列为抗心血管、抗癌最有前景的药物之一。白藜芦醇具有优良的药理活性和保健功能，其市场需求很大且与日剧增。目前，已有大部分国家和地区都开发了白藜芦醇的相关保健品和其他产品。中国已将含白藜芦醇的植物提取物制成降脂美容的自然保健食品，美国也已把白藜芦醇作为膳食补充剂，日本已将从植物提取的白藜芦醇作为食品添加剂。白藜芦醇的药理功能引起了人们的广泛爱好，因为它涉及到与人体健康亲密相关的很多生理疾病，例如，动脉粥样化、老年痴呆症、病毒性肝炎、胃溃疡、炎症与过敏反应等。随着人们对白藜芦醇的深化探讨，已经显示白藜芦醇具有抗癌、抗氧化、抗菌、抗炎以及预防食物过敏等作用，可广泛地应用于医药、保健品、食品、化妆品等领域。所以，对白藜芦醇的探讨及开发,特殊是白藜芦酥对亚硝酸盐的清除及阻断作用具有良好的市场前景及重要的意义。1试剂和仪器1. 1试剂白藜芦醇（纯度99%,购于陕西西慈生物技术有限公司）、蒸储水、二乙胺盐酸盐、二水合柠檬酸三钠、十二水合磷酸氢二钠、二甲胺盐酸盐、磷酸二氢钠（均为AR,购于国药集团化学试剂有限公司）、亚硝酸钠（AR,淮化试剂厂）、无水对氨基苯磺酸（AR,上海山浦化工有限公司）、95%乙醇、氢氧化钠、盐酸（均为AR,合肥工业高校化学试剂厂）1.2 仪器紫外可见分光光度计UV-5500PC型（上海元析仪器有限公司）、电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）、恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）、超净工作台（苏州苏净有限公司）2原理1.3 亚硝酸钠的清除率的测定加亚硝酸钠在弱酸性的条件下，能与氨基苯磺酸重氮化后，再与NT-蔡乙二胺盐酸盐偶合生成红色的化合物，本试验通过测定相同条件下亚硝酸钠含量的改变来反映白藜芦醇对亚硝酸根离子的清除实力，并计算清除率：清除率=（A0-AX）/A0X100%A。一没有加入白藜芦醇的亚硝酸钠溶液空白试验的吸光度值；AX一加入不同浓度白藜芦醇溶液时的反应液的平均吸光度值。温度为37。C在pH=3的条件下，当用相同量的亚硝酸钠溶液同具有肯定浓度梯度的白藜芦酸溶液反应后，再测量吸光度。吸光度越小，溶液中残存的亚硝酸钠含量就越小，表明白藜芦醇对亚硝酸盐的清除率越高；反之，表明白藜芦醇对亚硝酸盐的清除率越低。2. 2阻断亚硝胺合成的原理M二甲胺与亚硝酸钠在37条件下，可相宜地生成二甲基亚硝胺，反应式如下：（CH3）2NH+NaNO2HCI（CH3）2NHNO+NaCl+H2O其实质为：(CH3)2NH+!IONO(CH3)2NHNO+H2O当往白藜芦醇溶液中依次加入二甲胺与亚硝酸钠时，白藜芦醇优先同亚硝酸钠作用，使得二甲胺不能与亚硝酸钠反应，达到阻挡二甲基亚硝胺生成的目的。据此可以比较相同条件下生成二甲基亚硝胺量的多少来反映白藜芦醇阻断实力的强弱，生成二甲基亚硝胺量少，白藜芦醇的阻断实力就强，反之则弱。在紫外光照耀下，二甲基亚硝胺可分解成二甲基仲胺和亚硝酸根，反应式如下：H2O+(CH3)2N-N=O紫外光(ClL)2NH；+NOJ亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与1-蔡胺偶合生成红色化合物。用紫外分光光度计测出该红色化合物的吸光度值可反映出溶液中亚硝酸根离子的含量，亚硝酸根离子的含量可反映出原来溶液中二甲基亚硝胺含量的多少。3方法3.1溶液的配制0.4%对氨基苯磺酸溶液的配制：用分析天平精确称取对氨基苯磺酸0.4g充分溶解后，定容至100mLo3. 1.20.2%盐酸蔡乙二胺溶液的配制：精确称取盐酸蔡乙二胺0.2g充分溶解后，定容至100mLo0.1%蔡胺溶液的配制：精确称取1-蔡胺0Ig充分溶解后，定容至100mLo3.1 .4浓度为ImmoI/L的二甲胺盐酸盐溶液的配制：精确称取二甲胺盐酸盐O.08541g充分溶解后，定容至IoOmL。浓度为ImmOl/L的亚硝酸钠溶液的配制：精确称取亚硝酸钠O.069g充分溶解后，定容至100OmLo不同浓度的白藜芦醇溶液的配制：精确称取64Ing白藜芦醇，置于烧杯中，加适量95%乙醇溶解，用蒸储水定容于100mL容量瓶中，配制成0.64mgmL的白藜芦醇溶液并标记为7号容量瓶，再分别稀释配制成O.01mgmL>O.02mgmL>O.04mgmL、O.08mgmL、0.16mg/mL和0.32mgmL白藜芦醇溶液，分别标记为1,2,3,4,5,6号容量瓶，避光保存，备用。3.2 NaNo2标准液的制备及吸光度的测定.NaN标准液制备:用天平精确称取亚硝酸钠20mg,充分溶解后，定容至IL即得20mg/L的NaNOz溶液。然后精确取20mgL的NaNO2溶液25OmL于一IL的容量瓶中并用蒸储水稀释、定容至刻度，摇匀后得到浓度为5ugmL的NaNO?标准液。NaNO?标准曲线的绘制:分别精确吸取浓度为5ugmL的NaNO2标准液0mL,0.2mL,0.4mL,0.6mL,0.8L,1.OmL,1.5mL,2.0mL置于10矶具塞试管中，并分别编号为0,L2,3,4,5,6,7号试管。然后分别向各试管中加入0.4%对氮基苯磺酸1mL,摇匀，静置35min,再加入0.2%的盐酸蔡乙二胺溶液0.5mL,用水稀释至刻度，摇匀得到浓度分别为0ugmL,0.lugmL,0.2ugmL,0.3ugmL,0.4ugmL,0.5ugmL,0.75ugmL,LOUgmL的NaNO2溶液，将所得到的溶液静置15min后，亚硝酸根离子在538nm下存在最大汲取峰，因此，本试验在538nm下测定其吸光度的值，绘制NaN0?标准曲线。3. 3不同浓度的白藜芦醇溶液在PH=3时对亚硝酸钠的清除率的测定.取8个IomL具塞试管，分别标记为0,1,2,3,4,5,6,7号试管，依次向各试管中加入5ugmL的NaNO2的溶液ImL。然后分别取0,L2,3,4,5,6,7号100mL容量瓶中的白藜芦醇溶液分别依次向0,1,2,3,4,5,6,7号具塞试管中依次加入ImL,并依次向各试管中分别加入InILPH=3.0的柠檬酸钠-盐酸缓冲液1叫之后将8个试管置于37C恒温水浴槽中反应1小时。反应结束后，取出试管后马上分别向8个试管中加入质量分数为0.4%的对氨基苯磺酸溶液各ImL,摇匀静置3至5分钟后，再向各试管加入质量分数为0.2%盐酸蔡乙二胺溶液各InlL,摇匀放置15min后，用分光光度计在538nm处分别测出0,1,2,3,4,5,7号试管反应液吸光度值（八）,其中以加入除白藜芦醇溶液和亚硝酸钠溶液外其他全部等量的其他试剂的溶液作为参比溶液，每个浓度配制3个样品测量吸光度求平均值。依据下列公式求得白藜芦醇对亚硝酸根离子的清除率：清除率=(A0-AX)/A0X100%A°一没有加入白藜芦醇溶液的试管中NaNO?的吸光度值，即0号试管的吸光度值；A*一加入不同浓度白藜芦醇溶液反应后试管中NaNO2的吸光度值。3. 4不同浓度的白藜芦醇溶液在pH=3时对亚硝胺合成的阻断率测定皿取8个IOmL具塞试管，分别标记为0,1,2,3,4,5,6,7号试管。分别取0,L2,3,4,5,6,7号IOomL容量瓶中的白藜芦醇溶液分别依次向0,1,2,3,4,5,6,7号具塞试管中依次加入0.5mL,然后再依次向各试管中分别加入InlLPH=3.0的柠檬酸钠-盐酸缓冲液,然后依次向各试管加入ImmOlmL的NaNo2的溶液ImL,再向各试管加入ImmolmL的二甲胺溶液InIL用蒸馀水将各试管定容刻度为8mL,将各试管置于37°C恒温水浴槽中反应1小时。反应结束后，置于紫外分析仪上照15min,取出后加1%的对氨基苯磺酸溶液InIL,再加0.1%的1-蔡胺InIL,然后摇匀放置15min后，用分光光度计在525nm处测吸光度值（八）,其中以加入除白藜芦醇溶液和亚硝酸钠溶液外其他全部试剂的溶液为参比溶液，每个浓度配制3个样品测量吸光度求平均值。依据下列公式求得白藜芦醇对亚硝胺合成的阻断率：阻断率二(Ao-Ax)/Ao×100%A0-没有加白藜芦醇溶液试管中NaNO2的吸光度值，即0号试管的吸光度值；AX一加入不同浓度的白藜芦醇溶液后试管中NaN的吸光度值。4结果及分析4.1NaNOz溶液的标准曲线的绘制：NaNOz标准液在538nm下测定其吸光度的值如表1所示,标准曲线如图1所示。从标准曲线可NaNOz知在浓度0ITug/mL存在很好的线性关系，随着亚硝酸根离子浓度的增大吸光度增大。表1NaNO2标准液的吸光度Table1TheabsorbanceofstandardsolutionofNaNO2序号1234567浓度(ugmL)0.10.20.30.40.50.751吸光度A0.0040.0070.0110.0140.0170.0250.034NaNo2标准曲线0.040.0350.030.0250.020.0150.010.005000.20.40.60.811.2NaNO2浓度(ugml)图1NaNO2标准曲线Figure1ThestandardcurveofNaNo24.2不同浓度的白藜芦醇在pH=3时对亚硝酸钠的清除率及对亚硝胺的阻断率从表2和图2可知，白藜芦醇浓度在0.014).32mgmL时，对亚硝酸根离子的清除率随着浓度的增大而增大，对亚硝酸根离子的清除率最大达到63.48%o随后对亚硝酸根离子的清除率并不再接着随着浓度的增大显著增加。表2pH=3时不同浓度白藜芦醇对亚硝酸钠的清除率Table2TherateofresveratrolatdifferentconcentrationsclearingsodiumnitrateunderPH=3序号01234567白菜芦醇浓度00.010.020.040.080.160.320.64（mgmL）清除率（%）0.0018.4428.7234.7539.0143.4363.4863.49- 一 - - - H O Oooooooo 7 6 5 4 3 2 1pH=3时清除率-白藜芦醇浓度关系0.10.20.30.40.50.60.7白藜芦醇浓度（mgml）图2pH=3时不同浓度白藜芦醇对亚硝酸钠的清除率Figure2TheclearingrateofNaNO2onresveratrolwithdifferentconcentrationsatPH-3从表3和图3可知，白藜芦醇浓度在0.0L0.32mgmL时，对亚硝胺的阻断率随着浓度的增大而增大，对亚硝胺的阻断率最大达到40.94%o随后对亚硝胺的阻断率并不再接着随着浓度的增大显著增加。.表3pH=3时不同浓度白藜芦醇对亚硝胺的阻断率Table3TheblockingofnitrosamineonresveratrolwithdifferentconcentrationsatPH=3序号Ol234567白藜芦醇浓度00.010.020.040.080.160.320.64(mgmL)阻断率(%)0.008.3912.7517.1124.1631.2140.9440.96图3pH=3不同浓度白藜芦醇对亚硝胺的阻断率Figure3TherateofresveratrolatdifferentconcentrationsblockingnitrosaminesunderPH=35探讨及结论当溶液环境为酸性条件时相当于胃液环境条件下，随着白藜芦醇浓度的增大，白藜芦醇对亚硝酸盐的清除实力不断增加，当白藜芦醵浓度大约在0.32mgmL时有着63.48%的最大清除率；但是当白藜芦醇浓度增大到肯定程度后，白藜芦醇对亚硝酸钠的清除实力不再随着白藜芦醇浓度的增大而显著增加，而是达到一个稳定的清除率水平。不同浓度的白藜芦醇溶液对亚硝胺的生成有肯定的阻断作用，白藜芦醇浓度约在0.320/小1,时有着40.94%的最大阻断率；但是当白藜芦醇浓度增大到肯定程度后，白藜芦醇对亚硝胺的阻断实力也不再随着白藜芦醇浓度的增大而显著增加，而是达到一个稳定的阻断率水平。结果表明，白藜芦醇对人体中的亚硝酸盐有着良好的清除及阻断作用。人们应充分相识到白藜芦醇在日常生活中的重要作用，进而为有关白藜芦醇的药品、保健食品的开发和推广供应保障。致谢短短的两个月的试验探讨很快就结束了，本次试验的胜利完成离不开试验室老师的悉心指导和真诚帮助！在此，特别感谢张孝林老师的大力支持！张老师为我们供应了优良的试验环境和完备的试验器材、试验试剂，他严谨、博学、仔细以及对科学执着的精神让我特别感动、更让我无比的钦佩！参考文献1王广健.亚硝酸根偶联反应及其应用于光度法测定亚硝酸根离子J.分析化学.1998.26(4:):495-497.2李冬梅.降低肉制品中的亚硝酸盐含量J.肉类加工.1997,(3):16-19.3谭燕,庄松娟.肉制品中亚硝酸盐国标测定方法的探讨.2024,(7):26-28.4曹会兰.亚硝酸盐对人体的危害和预防UL微量元素与健康探讨,2024,(2):78-80.5徐国平.蔬菜、水果对卜亚硝基化合物致癌的预防作用J.国外医学:卫生学分册,1989,(2):93-94.6许后效.环境中的N-亚硝基化合物M.北京:科学出版社，1988:59-65.7褚衍信,冯华进.亚硝酸根清除剂体外探讨的新方法及其应用J.癌症，1994,13(5):470-471.8李延华,王伟君.白藜芦醉的探讨现状及应用前景J.中国酿造,2024.7:10-12.9高年发,姜丽等.葡萄酒发酵过程中白藜芦醇含量改变的探讨J.酿酒科技,2024(12):33-36.10赵二劳，王晓妮，张海容等.山楂清除亚硝酸盐及阻断亚硝胺合成的探讨J.食品与发酵工业,2024,32(10):29-31.11黄高凌,翁聪泽,倪辉等.培溪蜜柚果皮提取物抑制亚硝化反应的探讨UL食品科学,2024(12):36-39.12张平,叶文慧,石志华.姜汁对亚硝酸盐清除作用的探讨J.黑龙江八一农垦高校学报,2024,17(4):73-75.13王威.4种辛辣蔬菜抗氧活性的探讨.食品与发酵工业.2024,(5):123-126.14勃拉特AH.有机合成(其次集)(中译本)IxI.北京科学出版社,1964,321.ThestudyofresveratrosabilityonclearingsodiumnitrateandblockingnitrosamineYufengLiu,XiaolinZhangSchoolofFoodandDrug,AnhuiScienceandTechnologyUniversity,Fengyang233100,Anhui,ChinaAbstractjObjectiveiItistheindicatortostudythedifferentconcentrationsofresveratrolintheacidicenvironmentandalkalineenvironment,clearingnitriteandblockingnitrosamine,whichincludestheclearingrateofnitriteandtheblockingrateofnitrosamine.MethodsiPreparingconcentrationsofresveratolsolutiondifferently,whichisatO.Img/mL,0.2mgmL,0.4mgmL,0.8mgmL,0.16mgmL,0.32mgmLand0.64mgmLandtheconcentrationofsodiumnitratesolution,whichisat5ugmL,simulatinggastricconditionsunderPH=3,differentconcentrationsofresveratrol,sclearingrateofnitriteandblockingrateUbfnirosaminearemeasuredbyspectrophotometryrespectively.ResultsjUnderacidicconditions,differentconcentrationsofresveratrolallhavestrongscavengingeffectonsodiumnitrateatconcentrationslessthan0.32mgmL,whichisincreasedastheconcentrationincreases,andupto63.48%,Meanwhile,therateofblockingtheformationofnitrosamineishigh,andupto4.94%.Conclusion:Resveratrolhaveastrongabilitytoclearsodiumnitrateandblocktheformationofnitrosamine.Keywords:nitrite,resveratrol,spectrophotometry,nitrosamines,clear,blocking