金黄色葡萄球菌的检验.ppt

致病菌的检验金黄色葡萄球菌的检验,金黄色葡萄球菌的检验,参考:GB 4789.10-2010,目的 1、了解金黄色葡萄球菌的生物学特征级临床症状。2、了解食品中金黄色葡萄菌群在食品卫生检验中的意义。3、学习并掌握金黄色葡萄球菌群的检验方法。,基本原理,肉汤中培养时菌体可生成血浆凝固酶并释放于培养基中，此酶类类似凝血酶原物质，不直接作用到血浆纤维蛋白原上，而是被血浆中的致活剂激活后,变成耐热的凝血酶样物质,此物质可使血浆中的液态纤维蛋白原变成纤维蛋白,血浆因而成凝固状态。,金黄色葡萄球菌可产生多种毒素和酶。在血平板上生成金黄色色素使菌落呈现金黄色；由于产生溶血素使菌落周围形成大而透明的溶血圈，金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些事鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。在B-P平板上生长时，因将亚碲酸钾还原成碲酸钾使菌落呈灰黑色；因产生脂酶使菌落周围有一混浊带，而在其外层饮产生蛋白水解酶有一透明带。,基本原理,金黄色葡萄球菌定性检验,检验程序,样品处理（由准备组完成）,选用液体样品-打开放置两天的牛奶 吸取 25 mL 样品至盛有 225 mL 7.5%氯化钠肉汤或 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。注：本次使用7.5%氯化钠肉汤,增菌和分离培养,将上述样品匀液于 36 1 培养 18 h24 h。金黄色葡萄球菌在 7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生 长，污染严重时在 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。将上述培养物，分别划线接种到 Baird-Parker 平板和血平板，血平板 36 1 培养 18 h24 h。Baird-Parker 平板 36 1 培养 18 h24 h 或 45 h48 h。,金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker 平板上，菌落直径为 2 mm3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为 淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇 到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌 落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固 酶试验。,B-P平板及血平板上金葡菌的生长状况,A 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5m1m。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1）涂片固定。2）草酸铵结晶紫染1分钟。3）用水冲洗。4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。5）水洗，用吸水纸吸去水分。6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。7）蕃红染色液染2分钟后，用水冲洗。干燥，镜检。,鉴定,B 血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到 5 mL BHI（2个B-P平板 2个血平板 1个阳性），36 1 培养 18 h24 h。取兔血浆，加入 BHI 培养物 0.2 mL0.3 mL，振荡摇匀，置 36 1 温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 2次，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝 块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌 株的肉汤培养物作为对照。,鉴定,结果与报告,结果判定：在血平板、B-P平板的菌落特征、镜检结果符合金黄色葡萄球菌的特征，及血浆凝固酶试验阳性的，可判为金黄色葡萄球菌阳性。结果报告：在 25 g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。,