0002改良抗酸染色(sop).docx

改良抗酸染色操作程序1目的改良传统抗酸染色方法，以增加抗酸杆菌检出的阳性率。2原理由于抗酸杆菌含有分枝菌酸，可与石碳酸复红坚固结合。因其不允许被石碳酸复红染上色的类脂质外溢，所以抗酸杆菌虽经盐酸酒精脱色，但仍能保持红色。而非抗酸杆菌则被染为蓝色。改良抗酸染色法在标本制备及染色方面的改进，极大地提高了细胞内外抗酸杆菌检出的阳性率。尤其是细胞内抗酸杆菌的检出，有助于临床判定现症或潜藏感染。3仪器3.1器材FMU-6型细胞涂片离心仪FMU-6型细胞涂片沉淀器3.1.3显微镜。3.1.4载玻片3.2试剂0.3%TritonX-100萋纳石碳酸复红溶液碱性复红乙醇饱和溶液IOml5%石碳酸溶液90mlTritonX-1000.3ml脱色剂浓盐酸20ml95%乙醇80ml复染液（吕弗勒美篮液）美篮乙醇饱和溶液30ml10%氢氧化钾0.1ml蒸播水100ml0.3%TritonX-100（曲拉通）溶液TtritonX-1003ml蒸馅水1000mlAPES（3氨丙基3乙氧基甲硅烷）工作溶液现用现配，用丙酮1:50稀释。固定液(pH6.6)丙酮45ml甲醛25ml磷酸氢二钠20mg磷酸二氢钾1OOmg蒸镭水30ml0.1M磷酸盐缓冲液(PH7.4)Na2HPO4-12H2O26.46gNaH2PO42H2O2.664gNaCl40gKCl1.8g蒸馅水900ml4操作步骤4.1 载玻片处理将酸碱处理后的载玻片浸泡于APES工作溶液30秒，取出冲洗，晾干，备用。4.2 标本收集将载玻片和滤纸插入FMU-6型细胞涂片沉淀器中，滤纸上的孔必需与FMU-6型细胞涂片沉淀器上的孔对准，并旋紧FMU-6型细胞涂片沉淀器。在FMU-6型细胞涂片沉淀器的沉淀管中加入0.5ml脑脊液（若脑脊液呈浑浊或血性，应先依据状况稀释后再加入）。将FMU-6细胞涂片沉淀器放入FMU-6细胞涂片离心仪的挂钩上，盖上离心仪的盖子，离心35分钟。待脑脊液中的有形成分完全沉淀到玻片上后，取下涂片固定。4.3 固定将涂片浸泡于固定液中30秒，水洗，晾干。4.4 染色步骤固定后的涂片浸泡于0.3%TritonX-100溶液30分钟，0.1M磷酸盐缓冲液洗3次，晾干。初染涂片加0.3%TriIOnX-100萋纳石碳酸复红溶液，染5分钟，水洗。脱色脱色剂脱色约1分钟，轻轻摇动玻片，无红色脱落为止，水洗，晾干。复染复染液复染0.51分钟，水洗。自然干燥后镜检。5结果推断抗酸杆菌呈红色，非抗酸杆菌呈蓝色。6质控6.1 质控菌株及质控频率利用铜绿假单胞菌ArCC27853、结核杆菌ATCCH37RV做阴阳性质控比照，每日及更换染液批号时质控。6.2 质控方法参照麦氏比浊仪或麦氏比浊管，将标准菌株配制菌液3MCF浓度单位，高压灭菌后储存冰箱备用。或将高压后的菌液制成匀称的图片，放置室温备用。7留意事项7.1 凡需进行抗酸染色的标本，每份标本只允许单独涂在一张载玻片上，不得将两份或两份以上的标本涂在同一张载玻片上，以免染色过程中因冲洗菌体脱落，致阴阳性结果混淆。7.2 抗酸染色切勿运用染色缸，以免着色的抗酸菌可能自涂膜上脱落而浮游于染色液或脱液缸中，连续运用造成假阳性的出现。染色后印干用的滤纸，不得重复运用。7.3 脱色时间需依据涂片薄厚而定，厚涂片可适当延长，以几乎无红色为度。8临床意义针对结核病、麻风病的细菌检查，初步诊断。奴卡菌可呈弱抗酸性，有利于鉴定细菌。9平安防护措施9.1 为了防止交叉感染，标本应先高压灭菌后再涂片染色，气管刷片标本，应在紫外线灯下照耀30分钟进行染色镜检。9.2 镜检后的玻片均浸泡在含有有效氯100Omg/1.的消毒液。10参考文献10.1 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.其次版.上海.上海科学技术出版社，200710.2 叶应妩，王毓三，中子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京.东南高校出版社，200610.3 张秀珍，朱德妹主编.临床微生物检验问与答.北京.人民卫生出版社，2008年7月.11支持文件微生物室室内质量限制管理程序12记录表格抗酸染液质控记录表