GB_T43809-2024植物提取物类饲料添加剂特征图谱制定技术要求.docx

ICS65.120CCSB46中华人民共和家标准GB/T438092024植物提取物类饲料添加剂特征图谱制定技术要求Technicalrequirementsforestablishingcharacteristicspectraofplantextractsfeedaddditives2024-03-15发布2024-10-01实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定疲。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承扭识别专利的责任。本文件由余国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本文件起草单位：湖南农业大学、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、金国畜牧总站。本文件主要起草人：曾建国、加屏斌、杨子辉、杜伟、王荃、张军民、张会艳、黄鹏、卿志星、林谦、文悴、杨正楠。植物提取物类饲料添加剂特征图谱制定技术要求1范围本文件界定了植物提取物类饲料添加剂特料诺的术语和定义，规定了特征图谱制定的技术要求.本文件适用于用高效液相色谱法和气相色谱法制定植物提取物类间料添加剂特征图谱。2规范性引用文件本文件没有规范性用文件。3术语和定义下列术磨和霍义适用于3.1植物提取物类饲料添加剂plantextracsccdaddities以单一植物的特定部属或全被殊为原料通提取或分离纯感于过程，定向获最和浓集植物中的某一种或经种成分,一般不改本植物及有成算的特值句料,面作,用过程添的少量或者微量物质注1：包接纯化提取物、组分题取物和而理提取梅注2:产品尾态为同态、液态或游状3.2纯化提取物puriffedextracts植物经过提取、分离和纯化等过程得到的单一成分产品。注：植物提取物类饲相添加剂电报指南中规定纯化提取物”单一成分的含量应占提取物的90（以干基计）壮”。3.3特征图谱characteristicspectra植物提取物经过适当的前处理后，采用一定的分析方法得到的能够辨识该产品来源植物共有组分群体特征的图谱。3.4特征成分characteristiccomponent规定基原、部位、采收期和工艺等来源的不同批次的植物提取物中含有的共有物质。3.5有效成分effectiveingredient植物提取物中具有特定的生物活性、能代表其应用效果的单一成分。3.6标示成分indicatoringredient用于表征植物提取物的原料或产品质量的特征成分。3.7参照物referencesubstance特征图谱中用于与试样图谱进行色谱峰保留时间比对的对照品。注：一般选取特征图谱中容易获取的一个或多个主要有效成分、特有成分、次要有效成分或主要标示成分的对照品作为参照物。3.8S峰Speak特征图谱中特征峰相对保留时间计算时作为参照峰的色谱峰。4技术要求4.1 特征图谱的建立4.1.1 总体要求特征图谱的建立应包括米源、测定方法的选择、试样溶液的制备、参照物溶液的制备、色谱条件及系统适用性试验、分析方法的验证、测定、特征图谱及技术参数等要求。4.1.2 来源包括植物原料的基原、使用部位及植物提取物的制备工艺等。制定特征图谱的植物提取物应来源可匏且具有代表性并符合以下要求：a）样品批数不少于15批次：b）以相同原料、相同工艺、连续生产或同一批次生产的同一规格的产品为一批；c）植物提取物原料一般应覆盖来源植物合规品种、产地、采收时问及初加工方式等d）基于特定来源植物原料开发的植物提取物类饲料添加剂，其原料来源应覆盖来源植物特定的品种、产地、采收时问、部位及初加工方式等。4.1.3 测定方法的选择根据植物提取物类饲料添加剂中所含化学成分的理化性质，选择高效液相色谱法或气相色谱法。4.1.4 试样溶液的制备根据试样中所含成分的理化性质建立溶解、提取方法。应对主要影响因素包括溶剂种类和用量、提取方式和温度等进行考察，确定适宜的制备方法，确保将试样中主要成分、特征成分转移至溶液中。必要时，可增加水解、衍生等其他处理方法。4.1.5 弁照物溶液的制备制定特征图谱应设立参照物，般选取容易获取的一个或多个主要有效成分、特有成分、次要有效成分或主要标示成分的对照品作为参照物；必要时，纯化提取物可选择除主要有效成分外的微量组分特征峰的对照品作为参照物。根据植物提取物的成分，选择适宜的对照品作为参照物，写明参照物的名称、CAS号和纯度。准确称取适量对照品，用适宜溶剂配制成一定浓度的溶液。4.1.6 色谱条件及系统适用性试验4.1.6.1 色谱条件的确定在合适的时间范围内，色谱图应获得尽可能多的色谱峰，确保主要成分获得较好的色谱分离，满足有效信息量最大化原则。高效液相色谱法：考察检测器类型及参数、色谱柱填料种类及规格、流动相种类及洗脱方式、数据采集时间、柱温、流速、进样量等气相色谱方法：考察检测器类型及参数、色谱柱填料种类及规格、升温方式（如程序升温）、数据采集时间、进样口温度、分流比、载气流量、进样量等。4.1.6.2 测定时间的确定采用高效液相色谱法和气相色谱法制定特征图谱，其特征图谱的测定时间通常不超过1h.根据4.1.6.1中确定色谱条件下的测定时间1,测定时间工后继续以最强的洗脱条件持续洗脱，考察测定时间t以后的色谱峰情况，获得一张记录岫而为2倍测定时间（21）的图端以确保试样中所包含的主要成分均在图谱中体现，并满足有效信息量最大化原则4.1.6.3 多张特征图谱的建立对于成分类别相差较大的样品，可根据类别成分的性质，选择多种色谱条件，建力多张特征图谱。4.1.6.4 参照物S峰理论板数的确定测定S对照溶液的色道图，公服中人理大租理理的现通则中高效液相色增法气相色谱法项下规定的尽式温或通过仪题在出色语数据分析数件计算5的理论板数4.1.7 分析方法的验证4.1.7.1 精密度试验取同献样器液，连续进部口改，要家各将细酸与消对保细时时和相硬峰面程的教性，相对保留时间的相对禄准偏差（RSD）不应天于匕相对峰血恐的RSD不应大于6,考察测量仪器的精密度。4.1. 7.2稳定性试验取同一试样溶酸，分则在不同时间检测，考察各特征峰与S峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，相对保留时间的民D不应大于3%,相对峰面积的RSD不应大于5%,号察通库溶液在规定测试时问内的稳定性。1.1.1.3 重复性试验取同一批号的试样6份，按照确定的试样溶液制备方法（见4.1.4）和色谱条件（见4.1.6.1）,对试样进行检测，考察各特征峰与S峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，相对保留时间的RSD不应大于3%,相对峰面积的RSD不应大于5%,考察测试方法的重复性。1.1.1.4 再现性试验应在不少于3家实验室按照确定的分析方法进行方法验证，试验内容应包括重复性试验、考察特征峰数、考察各特征峰与S峰相对保留时间测定值及与规定值的偏差，并出具验证试验报告。4.1.8 测定分别取试样溶液和参照物溶液，注入色谱仪，按照确定的色谱条件（见4.1.6.1）进行测定，记录色谱图。4.1.9 特征图谱及技术参数4.1.9.1 特征峰的选择采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件或其他适当分析软件对15批次及以上样品的色谱图进行叠加，选择各批次样品色谱图中共有的色谱峰，采用阿拉伯数字标定各共有色谱峰。一般选择4个8个共有色谱峰作为特征峰，特征峰应尽可能地分布在色谱图的不同位置，特征峰应包括特有成分、有效成分或标示成分。对于组分少的提取物可根据实际情况确定特征峰数量。必要时，纯化提取物可选择除主要有效成分外的微量组分作为特征峰。所选择的特征峰的信噪比23。4.1.9.2 特征峰的指认特征图谱应尽可能阐明其特征峰的化学结构及化学名称，一般采用对照品进行确认。必要时，对无法获取对照品的未知特征峰，根据实际情况采用液相色谱-质谱联用仪(1.C-MS)或气相色谱-质谱联用仪(GCMS)进行推测说明可能的化合物结构，从而根据确认或推测的特征峰成分确定所建立图谱的专属性。4.1.9.3 S峰的选择按照主要有效成分、特有成分、次要有效成分、大量存在或各批次中含量较稳定的标示成分顺序选择1个参照物的色谱峰为S峰。如果没有合适对照品的参照物，可选择1个稳定、峰面积较大的色谱峰作为S峰。4.1.9.4 特征峰相对保留时间的要求以S峰的保留时间作为1,计算各特征峰与S峰的相对保留时间，以所有样品间各特征峰相对保留时间的平均值为规定值，各批次样品相对保留时间的相对标准偏差RSD不应大于3%。以相对保留时问作为特征图谱的辨识依据。4.1.9.5 特征峰相对峰面积的要求必要时，需规定指定特征峰与S峰或特征峰之间的相对峰面积，根据15批次以上样品的色谱图计算指定特征峰与S峰或特征峰之间的峰面积比值，确定相对稳定的比值范围。4.1.9.6 特征图谱的生成根据15批以上样品的色谱图，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件或其他适当分析软件进行数据处理，对已选定的特征峰进行峰匹配，生成得到特征图谱。当成分类别相差较大、1张图谱难以体现其所有特征成分时，可根据特征成分的性质，根据多种色谱条件下的测定结果建立多张特征图谱。必要时，可选择纯化提取物的微量组分建立特征图谱。特征图谱的应用见附录A。4.1.9.7 特征图谱信息应显示特征谱图中特征峰的数Fh用阿拉伯数宁标示S峰及各特征峰的位置；写明特征图谱中的各特征峰与S峰相对保留时间的规定值，规定测定值与规定值允许的偏差范围；必要时，可规定指定特征峰之问相对峰面积的值在一定范围内。特征图谱“图”应包含以下信息：a) “图”的横坐标为保留时间，单位为分(min);b) “图”的纵坐标为色谱峰响应，单位根据使用的检测器类型确定；c) “图”的图注中应注明化学结构明确特征峰的化学名称，提供建立特征图谱使用的色谱柱类型，必要时可注明所用色谱柱型号及厂家。4.2特征图谱报告编制要求特征图谱报告编制要求应包括标题、来源、测定方法、试样溶液的制备、参照物溶液的制备、色谱条件及系统适用性试验、测定、特征图谱信息，特征图谱报告示例见附录BoA.1图谱轮屏判别附录A（资料性）特征图谱的应用试样图谱应与特征图谱从特征峰的数量及轮廓进行目测比较，并将特征峰与对应参照物的对照品色谱峰保留时间进行比对。A.2相对保留时间判别以4.1.9.4中各特州峰与S峰相对保留时间的规定值作为州定依据，高测试样图谱中各特征峰与S峰相对保留时间侧定值与规定值的偏差应在±10%之内，待测试样图谱中各特征峰与S峰相对保留时间测定值与规定值的偏差X,以百分数（）计，按公式（AJ）计算。RRTi-RRTX=式中RR(A.1)RRo式样图谱中形定时征峰与多昨相对保留两间的测定特征图谱中据定恶征章与S概相对保照对间的规走强A.3相对峰面积判别有相对面积比值房的通1.5能是后定量经与S的线填行解表间的的而积上值范围作为评判依据，按舰定范围判定附录B（资料性）特征图谱报告示例甘草提取物特征图谱8.1 来源为豆科植物甘草（GIyeyrrhiZauralensisFisch.）>胀果H草（GlyeylThiSclinflataBa1.）或光果H草（Glycyrrhizaglabra1.1.）的干燥根和根茎经70%乙醇提取加工制成的干粉。8.2 测定方法按照中华人民共和国兽药典高效液相色谱法（通则0512）测定。8.3 试样溶液的制备称取H草提取物约0.2g,置具塞锥形瓶中，准确加人70%乙醇溶液25m1.,超声处理（功率250W,频率40kHz）10min,放冷，再称定质量，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，静置.，取上清液滤过0.45有机膜，取滤液作为试样溶液。8.4 分照物溶液的制备分别称取5mg（精确至0.01mg）芹搪甘草甘（CAS号：74639-14-8,纯度不低于98.0豹、H草昔（CAS号：551-15-5,纯度不低于98.0%）、甘草酸（CAS号：1405-86-3,纯度不低于98.0阶，置于25m1.棕色容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容至刻度，制成每Im1.含0.2mg对照品的参照物储备液。8.5 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5Um）;以乙脖为流动相A,以0.05%磷酸溶液为流动相B,按表B.1中的规定进行梯度洗脱；流速为1.0m1./min;柱温为30;检测波长为276nm。理论板数按甘草昔峰计算应不低于50000。衰B.1高效液相色谱梯度洗脱程序表时间min流动相A/%流动相B%0-1510-2590-7515-3525-5075-50356050-9050106065909010-108.6 浦定分别精密吸取试样溶液、参照物溶液各10P1.注入液相色谱仪，测定，即得。H草提取物试样图谱中应呈现8个特征峰，并与甘草提取物的特征图谱（见图B.1）中的8个特征峰相对应，试样图谱中峰2、峰3、峰5应分别与芹糖甘草甘、H草背、甘草酸对照品色谱峰的保留时间相一致，其中，与甘草昔对照品色谱峰相对应的峰标定为S峰（峰3）,计算峰1、2、4、5、6、7、8与S峰的相对保留时间,相对保留时间应在规定值的±10%以内。规定值为0.596（峰1）、0.976（峰2）、1.533（峰4）、2.109（峰5）、2.622（峰6）、2.882（峰7）和3.179（峰8）°80706050403020looo)80706050403020looAG/中四46,10121416182022242628303234363840424446485051566264666870标引序号说明1 -未描人:2 芹陋甘W3(三)草昔;4 卷指认;5 普草酸:6 暴指认;7 表指认;8 未指认。色谱C1s(46文献1GB/T19424-2018天然植物饲料原料通用要求2植物提取物类饲料添加剂申报指南（农办牧（2023）2号）3国家药品标准工作手册（第四版）4中华人民共和国兽药典（2020年版）5中华人民共和国药典（2020年版）6中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）中华人民共和国国家标准植物提取物类饲料添加剂特征图谱制定技术要求GB/T438092024黄中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100o29)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室：(Olo)68533533发行中心：(010)51780238读者服务部：(OlO)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销开本880X12301/16印张1字数15千字2024年3月第一版2024年3月第一次印刷书号：1550661-75421定价31.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话：(OlO)68510107