QB_T5830-2023口腔清洁护理用品牙膏中α－淀粉酶活力测定.docx

IeS7I.I(XI.4OCCSYWQB中华人民共和国轻工行业标准QB-T5830-2023口腔清洁护理用品牙膏中淀粉酶活力测定Oralcareandcleansingproducts-Quantitativedete11ninationofa-amylaseintoothpastes2023-11-01实施2023-04-21发布中华人民共和国工业和信息化部发布本文件按照GB11.l-202Q£标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起用规则3的规定起草，本文件由中国轻工业联合会提出.本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙杳分技术委员会（SAC/TC492.SC!）归口.本文件起草通位：江苏名豹日化有限公司、送维伯（中国）投资有限公司、福建爱洁丽日化有限公司、苏州清馨健康科技有限公司、柳州两面针股份有限公司、好来化工（中山）有限公司、司庆登康口腔护理用品股份有限公司、黑龙江省轻工科学研究院，本文件主要起草人：徐志良、徐艳双、淡红、陈万金.周悒萍、刘奕形、刘文玉、黄华朱、何琪莹、卢也本文件为苜次发布。口腔清洁护理用品牙青中-淀粉,活力测定1MS本文件描述了口腔清沾护理用品牙膏中-淀粉觎活力的测定方法，包括：煤理、试剂、仪器设招、测定步骤、结果表示。本文件适用干口腔清洁护理用品牙膏中-淀粉物活力的定性判断和定量测定.2加£性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水观格和试验方法GB/T24401-2009淀粉的制剂3*三*本文件没有需要界定的术语和定义。4定1捌定4.1*三-淀粉陆（l,4D-匍聚除的聚柢水解陆）是常用的水解淀检的他,它从多聚帧（淀粉分子）分子内部位巽水解aTZ-前葫糖仔谊，水解的产物为期精、低聚糖或单糖，本方法是以可溶性淀粉为底物配制固体培养基，水解物会在透明的培养基背势下形成白色透明陶观察淀粉是否被降斛以及降解的程度.依此对a淀粉的活性进行鉴定。42WA除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和C8/T6682规定的三级水，室温指的是20C、2534.2.1-淀粉秘英文名称a-AmyIasCCAS号9000-90"2.BR（生化试剂）.的活力40umg60Wm%4.2.2可溶性淀粉.4.2.3琼脂粉：BR（生化试剂）。4.2.4柠株酸96HgO7也。）.4.2.5磷酸氢二钠（Na2HPO42H20）。4.2.6 磷酸缓冲液（PH=6.0）:按GB/T24401-2009中6.2.2.6的规定配制，4.2.7 淀粉琼脂培养基：按琼脂粉2g、Ur溶性淀粉2g、去离子水K)Om1.的比例进行配制。4.3仪AM4.3.1 高速施心机：转速大于1200Orfmin.4&2电子天平：分辨力a001g.4aam温培养箱：允许误差±ic.4.3.4微波炉：功率不小于500Wl4.3.5冰箱：允许误差±I4C.1.3.6微地移液器：200U1.、1000H1.e4.3.7牛津杯：内径6mm.外径8mm.高IomnU4.3.8培养皿：直径90IIMiu43.9离心管:5m1.4.3.10三角烧瓶:250m1.4.3.11 容量瓶：1000m1.。4.3.12 pHif：分辨力不小于0.01。4.3.13 镣子：规格18cm。4.3.14 游标卡尺：分辨力0.1mnu4.4M4.4.14.4.1.1 在培养皿中垂直均匀摆放牛津杯(按需摆放，一般不超过6个).4.4.1.2 将配制好的淀粉琼脂培养茶混合均匀，放入微波炉中，中火加热30s,取出后轻轻拙晃均匀(尽属取少气泡的产生),再次加热30s,依次为1次，唱红23次,直至无固体颗粒,均匀透明无糊化。4.4.1.3 室温下稍冷却5minlmin,荷气泡减少后趁热倒入培养皿中，每皿约30m1.待凝固(0.5h-lh)后，用锻子将牛津杯小心取出,形成直径8mm孔洞备用。4.4.2称取样本牙膏1.(X干5位离心管中，用微量移液器加入磷酸缓冲液SH=6.0)3m1.,4C冰箱放置过夜，期间应辂暧摇凫至完全分散，再以12000rmin.离心10min.取上清液备用，4.4.3 加样用微附移液器按顺时针方向依次在每个孔洞内加入待测样品，每孔100P1.,同时用-淀粉溶溶液(0.001%)作为阳性时照(配制后置于4七冰箱中,可使用7天)，用汁酸缓冲液(pH=60)作为空白对照。注：aT52三溶液，。T邠附麻要质地分散用水配制的滞M4.4.4 恒墙葬将4.4.3加样后的培养皿,水平移入45匕的恒温培养箱中,正置培养(16±0.5)h,不同侦Jft分数的标准-淀粉酸溶液在琼脆平板上的透明眼见图I,用游标卡尺测透明圈的蜕径，3个平行样取巾术平均（ft.板招透明1«的大小判断样本的活力.无透明圈出现,结果显示为室：有透明图显示，测点:依人的直径，透明度直径不大于Mmm,代表无活力：透明圈口径不小干15mm.代表有活力.标引序号说明:0.0“标掂淀粉酸溶液（酸活力500Wg）,透明圈直径约30mm;0.<XH准淀粉前溶液（陆活力50WgX液透明圈宜妆约28mm;0.OoOI岫:准淀将陆溶液（陆活力5u）.透明Ifll直径的24mm:1-0.OOOoIM猴淀粉隈溶液（微活力0.5u）,透明度口径约17mm:空白一段酸缓冲液（pH6»,透明网H径OraUH1不同It量分数的柝濯淀”常液在琼平横上的透明示国5定*N嵬5.1*9利用-淀勃於和-他的能件解能水解底物4,6-亚乙茶（G7）pm葩米基（Gi）a,D麦芽旗船背（亚乙基-G>PNPH形成前而前和黄色对硝基藻酚.生成对硝基藻酎的比率能被全自动生化分析仪检测到.从而反映出反应速率,依此定员计算出的的活力.6.2KM5.2.1 ”-淀粉解(-amylase)标准品-5.2.2 反应底物：*6-亚乙基(G,)p-硝基苯基(Gl)-a,D-麦芽庚感普(亚乙基-G>PNP>5.2.3 <1-M11'I(a-glucsklase)5.2.4 二水台氯化机(CaCl12HQ:CAS号10035Q-8。5.2.5 亚硫酸钠(NSO0:CAS号7757-83-7.5.2.6 三聚惯酸钠(NaSP3Oto)：CAS号7758-29-4.5.2.7聚氨乙烯月桂:保溶液（质量分数30%）:CAS号9002920.5.2.8聚乙醇叔平基笨基域（曲公通X-10:CAS49（K）2-93-15.2.915%（质播分数）聚氯乙烯月桂酸溶液：称取508g聚氧乙烯月桂魄到烧杯中（不易溶解时，可河于35CF5C水浴中加热助洛），加入约300m1.超纯水搅拌,定量转移到1上容收瓶中，用超纯水定容至刻度，搅拌均匀/4C冰箱可存储2个月.1.1.10 0.25%（质址分数骤氯乙烯月桂脏溶液1量取约60Om1.超纯水11优林中,少量多次加入二水合氯化钙（5.24）总计441g搅拌至完全溶解，冷却至室温定房转移到I1.容量瓶中.加入15%（质减分数）蜃基乙烯月桂展溶液165n1.,冷却后用邮纯水定容至刻度，搅拌均匀.VC冰箱可存谛7天。1.1.11 0.05%（质量分数聚乙：到叔辛基苯基镰溶液：称取5g聚乙：静叔辛基苯基Sf（5.2.8）至烧杯中,加入约100m1.去肉干水搅拌.定量转移到10工容量Si中.加入9500m1.去离子水搅悻约10min至完全溶解。称取100g亚陡酸钠45.2.5）和50g三聚磷酸钠5.2.6）,加到上述容员瓶中摸拌至完全溶解.用去离子水定容午刻慢.室区下可存储3天1.1.12 样品燧冲液：房取0.25%（质疑分数）聚氯乙烯月桂醍溶液Im1.至I1.容Q机中.用0.05%（质盘分数）聚乙二醉叔辛基苯、好溶液定容，搅拌均匀,空温下可存储24h,5.3 仪”备5.3.1 全自动生化分析仪：配备进样/搅拌系统、潮度控制系统和检测系统.其中检测系统应能在405n三下检测吸光度的变化率.5.3.2 分析天平：分辨力0.1mtt.5.3.3 PH计：分辨力OOl5.3.4 粗力搅拌落：功率不小于500W。5.3.5 天平:分辨力0.01g.5.3.6 离心机：转速大于12000rmin,5.4 焉定步5.4.1 *«曲线的震定称取a-淀粉聊标准品0.4937g至250m1.容瓶中，用样品暧冲液定容至刻度，摸样15in30min,室温下可存储24h.进行实脸时Uilm1.上述溶液至25Om1.容量瓶中.用样品缓冲液定容至刻度,得到标准储符液.现用现配。将反应底物（亚乙达-GW）、q-筋计利以及标准储需液，各门咕移个:样品杯，按照顺序置于全自动生化分析仪中，进行测试。标准曲级为5个点的标准曲城，唧活力最高点和最低点的比值为6,如表1所示。表1标准曲或的测定标准点硫科倍数标准储&液"1.祐Ff援冲液Jn1.16025147522560IMO315100MOo-11212513755101501350