《普通植物病理学》实验指导.docx

普通植物病理学实验指导前后普通植物病理学实验指导主要是配合普通植物病理学的教学内容,帮助学生理解和掌握植物病理学的基础理论,学习基本知识和基本技能的实验指导课。内容包括两大部分,一是植物病害的症状识别和病原生物的形态特征的观察,二是有关病害的侵染、流行和有关实验研究的基本技术。通过实验,培养和提高学生的观察、思考、分析的能力,锻炼学生独立操作的能力。实验内容的安排旨在引导学生逐步进入植物病理学的领域,并为以后深入学习病原生物学、农业植物病理学、植物病害防治学和进一步开展试验研究打下坚实的基础。目录注意事项1 .每次实验前,学生要仔细预习实验指导,明确实验的目的与要求,了解实验内容和应注意的事项。2 .认真昕取老师指导,按要求逐项细心操作,爱护仪器设备,节约材料,损坏物品要及时报告。3 .遵守实验室纪律。实验时,不准在实验室内谈笑喧哗、吸烟与饮食,不要在室内来回走动,共同保持室内的整洁与安静。严禁以酒精灯互相点火,以确保安全。4 .认真记录实验的结果,绘图要精确,比例要适当,按时上交实验报告。5 .实验结束时,仪器用具要擦干净并放回原处,清除垃圾,实验室要打扫干净。6 .需要进一步培养观察的实验材料,应写好标签,注明实验内容、日期和试验人员姓名,以防混沼或丢失。7 .学生应准备绘图纸、报告纸、HB和2H的绘图铅笔、直尺、小刀和橡皮等绘图用具等。实验一：植物病害症状观察一、目的要求认识各类病害对植物造成的为害，了解植物病害的种类及其多样性，初步掌握主要病害的症状表现及其特点，学会植物病害症状的描述,为今后病害的诊断奠定基础。二、材料、试剂与仪器按照植物病害的病状类型（变色、坏死、斑点、腐烂、畸形）和病征类型（粉状物、霉状物、点状物、菌核、溢脓等）的盒装标本、瓶装浸渍标本及新鲜标本。各类症状的挂图、模型、多媒体课件等。拨针、刀片、木板、酒精灯、火柴、裁玻片、盖玻片、纱布、乳盼油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、吸水纸等。三、内容与方法（一）植物病害症状观察植物病害的症状是植物患病后由于异常生理活动而发生在细胞和组织上的病理变化,最后表现为肉眼可见的形态变化。植物病害的症状可区别为两类不同性质的特征:病状和病征。病状是一定的寄主植物和病原在一定外界条件的影响下相互作用结果的外部表现,是以各自的生理机能或特性为基础的。而每种生物的生理机能,都是在质上有特异性,并且是相对稳定的。病变,作为这种相互作用过程的结果,一般说其发展是定向的。病状作为病变过程的表现,其特征也是较稳定的和具有特异性的。这就是利用病状诊断植物病害的基础。病征是由病原微生物的群体或器官着生在寄主表面所构成的。它更直接地暴露了病原物在质上的特点。如真菌子实体在寄主表面形成的霉层、黑点等。由植物病毒、植原体、许多病原细菌、非侵染性植物病害等无病征的表现。病征的出现与否和出现的明显程度,虽受环境条件的影响很大,但一经表现出来却是相当稳定的特征,所以根据病征能够正确地判定病害。病状和病征，尤其是前者,作为诊断病害的依据也有其局限性。首先是许多植物病害常产生相似的病状,因此要从各方面的特点去综合判断；其次,植物常因作物品种的变化或受害器官的不同,而使病状有一定幅度的变化；第三,病害的发生发展是一个过程,有初期和后期，病状也随之而发展变化；第四,环境条件对病状和病征有一定的影响,尤其是湿度对病征的产生有显著地作用,加之发病后期病部往往会长出一些腐生菌的繁殖器官。因此,症状的稳定性和特异性只是相对的,要认识症状的特异性和变化的规律,在观察植物病害时,须认真地从症状的发展变化中去研究和掌握症状的特殊性。观察和采集植物病害标本,仔细地区别病征的那种微小的、似同而异的特征,这样才能正确地诊断病害。1病状的观察（I）斑点观察玉米大斑病、棉花角斑病、大麦条纹病、大葱或大蒜紫斑病、番茄早疫病、十字花科霜霉病等标本。注意不同类型病害所表现病斑的形状、大小、颜色等的异同以及病斑上有无轮纹、花纹伴生,同时注意观察各类病斑上有无病征以及病征的特点。斑点类发生在叶、茎、果等部位,受病组织局部坏死,一般有明显的边缘。斑点中还可以伴生轮纹、花纹等特点。根据病斑的颜色、形状等特点而分为褐斑、黑斑、紫斑、角斑、条斑、大斑、小斑、胡麻斑、轮纹斑、网斑等多种类型。（2）腐烂观察甘薯黑斑病病薯、马铃薯环腐病病薯、柑橘溃疡病等病害标本,认识该类病害对植物所造成的为害,同时掌握这类病害的病状特点。腐烂类病状发生在植物的各个部位,由于组织分解的程度不同,有软腐、干腐之分。根据腐烂的部位,有根腐、基腐、茎腐、果腐、花腐等名称,还伴随有各种颜色变化的特点,如褐腐、白腐、黑腐等。（3） .萎藏观察棉花、黄瓜等植物枯萎病、棉花和茄子黄萎病、玉米和茄科植物青枯病、马铃薯环腐病等标本。注意区别枯萎、黄萎、青枯等病状类型,必要时可以剖开病株茎秆观察维管束是否褐变。典型的萎籍病状是植物根、茎的维管束组织受到破坏而发生的叶片或枝条萎垂现象,皮层组织完好,萎猿病害常无外表的病征。植物受萎葛菌侵染后,不一定都能引起萎焉,发病初期有半边叶片、半个枝条萎垂的现象,但更常见的是全株性萎蕉。提示：对于萎蔼类病害病状的观察应以新鲜标本为主,有条件时最好在田间进行,这类病害发生具有一定的地域性,观察时要注意其维管束组织的病变,干标本则失去了原有的特点。（4） .变色变色主要有两种类型。一种表现为黄化，是整个植株或叶片部分地或全部地均匀褪绿、变黄,或呈现其他的颜色。多数伴生有整株或部分的畸形。另一种为花叶，病株叶片色泽浓淡不均,深绿与浅绿部分相间夹杂,一般遍及全株,上部叶片较为显著,无病征表现。比较观察烟草花叶病、苹果花叶病、小麦黄矮病、瓜类、十字花科和茄科植物的病毒病病状，注意每一种病害的病状特点。（5） .畸形畸形类病状由不同组织、器官的病变，如叶片的膨肿、皱缩、小叶、蕨叶；果实的缩果及其他畸形；整个植株的徒长、矮缩；局部器官如花器和种子的退化变形和促进性的变态等。瘤、瘦、疮、丛枝和发根也是常见的畸形病状。观察桃缩叶病、十字花科根肿病、马铃薯癌肿病、果树根癌病、油菜白锈病、枣疯病、泡桐丛枝病、玉米黑粉病、小麦粒线虫病等。2病征的观察（6） 粉状物借助扩大镜或实体解剖镜观察麦类锈病、十字花科白锈病、麦类白粉病、玉米黑粉病和麦类黑粉病等病害标本。注意粉状物的颜色、质地和着生状况等。（7） 霉状物借助扩大镜或实体解剖镜观察黄瓜霜霉病、瓜类软腐病、柑橘青霉病、番茄灰霉病和番茄叶霉病等病害标本或瓶装标本。注意区别霜霉、黑霉、绵霉、青霉和灰霉等不同类型的霉状物。（8） 点状物取小麦白粉病、瓜类炭疽病、棉花茎枯病、芹菜斑枯病、苹果树腐烂病和麦类赤霉病等病害标本,借助扩大镜或实体解剖镜观察。注意点状物是埋生、半埋生还是表生,以及在寄主表面的排列状况、颜色等。（9） 菌核观察油菜菌核病等病害标本。注意菌核的大小、形状、颜色、质地等,并观察菌核萌发状况。（10） 脓溢脓为细菌性病害特有的病征。观察十字花科细菌性软腐病、棉花角斑病和黄瓜角斑病等病害标本。注意溢脓的颜色、出现位置等。用剪刀将植物病组织剪成4mm2的小块,放于载玻片上,加一滴水,盖上盖玻片,在显微镜下观察或直接用载玻片对光观察喷菌现象。四、实验作业与思考题将植物病害症状的观察结果填入下表。寄主名称病害名称发病部位病状类型病症类型五、实验学时：2学时。实验二真菌一般形态观察一、目的要求通过观察，认识病原真菌的营养体及其变态,认识真菌的子实体、有性繁殖、无性繁殖产生的各种类型胞子。二、仪器与用品拨针、刀片、木板、酒精灯、火柴、裁玻片、盖玻片、纱布、乳酚油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、吸水纸等。三、实验材料1 .瓜果腐霉病菌(PytiUmaphanidermatum)2 .立枯丝核菌(RhiZOctOniasolani)3 .镰刀菌(fusarium)4 .小麦白粉病菌(BIUmeriagraminiS)5 .大白菜霜霉病菌(PeronoSPoraparasitica)6 .甘薯软腐病菌(RhizopusStolonifer)7 .小核菌属(SClerOtiUm)8 .苹果或甘薯紫纹羽病菌9 .麦角病菌(Clavicepspurpurea)10 .疫霉菌(Phythophtoraspp.)11 .根霉菌(Rhizopusspp.)12 .毛霉菌(Mucorspp.)13 .犁头霉菌(Absidiaspp.)14 .玉米小斑病(BiPOlariSmaydis)15 .小麦白粉病(无性世代<0idiummonilioides>16 .马铃薯早疫病VAIternariasolani>17 .棉花枯萎病菌(FUSariilmo×ysporium)18 .桃缩叶病菌(Aphrinadeformans)19 .小麦赤霉病菌VGibereIIazeae>20 .小麦腥黑穗病菌(Tilletiacaries>四、内容与方法病原真菌的营养体即真菌营养生长阶段的结构统称为真菌的营养体。真菌典型的营养体是丝状体,少数为单细胞。单根丝状的营养体称为菌丝,许多菌丝在一起就称为菌丝体。用挑针挑取在培养皿内的瓜果腐霉病菌(PytiUmaphanidermatum)>立枯丝核菌(RhiZoCtoniaSOlani)、镰刀菌(fusarium)的菌丝体,用蒸谭水或乳酚油作浮载剂,制临时玻片镜检,观察菌丝隔膜的有无、菌丝体直径变化是否明显以及颜色有无差别等。(")真菌营养体的变态病原真菌营养体在一定条件下可发生变态而形成特殊的结构,这些变态是真菌适应性的表现,其作用是抵抗不良的环境条件,有利于传播、固着吸收和繁殖。主要的变态有吸器、假根、菌核、子座以及根状菌索等。1吸器：吸器的形态有圆球状、棒状、裂片状、掌状、根状等。在示范镜下观察小麦白粉病菌(BIUmeriagraminiS)和大白菜霜霉病菌(PerOnOSPoraParaSitiCa)的吸器形态,也可用小镒子撕取病叶的表皮,制临时玻片放在显微镜下观察,注意吸器的形状和在细胞内的位置。2假根：是由菌丝分化的根状分枝。从培养皿内的培养基上挑取甘薯软腐病菌(RhizopusStolonifer)制片,镜检,观察在范囊梗基部的假根。3菌核：是菌丝纠结而成的坚固的颗粒状休眠体。观察小核菌属(ScIerotium)的菌核切片及标本,以及水稻和油菜上菌核的标本。比较两种菌核的大小、形状和色泽有何不同？4根状菌索：许多菌丝体平行生长并纠结成绳索状,称为根状菌索。在示范镜下观察苹果或甘薯紫纹羽病菌的根状菌索。5子座：由菌丝体或由菌丝体和寄主组织共同组成的着生子实体的垫状物。在子座上形成无性或有性抱子。在显微镜下观察麦角病菌(Clavicepspurpurea)头状子座的切片，注意其内部结构与菌核的区别。(二)病原真菌的繁殖体一一子实体真菌产生抱子的机构称为子实体。病原真菌抱子的形态特征是鉴定和分类学上重要的依据。真菌的泡子可分为无性电子和有性胞子两类：1无性抱子指真菌无性繁殖过程中产生的各种抱子。这类抱子在形成过程中没有经过任何性结合的过程。(1)游动狗子囊和游动狗子：鞭毛菌亚门真菌的无性繁殖器官是抱子囊。大多数鞭毛菌抱子囊可释放出具鞭毛、在水中能游动的抱子,即游动抱子,故其狗子囊又称为游动抱子囊。镜检疫霉菌(PhythOPhtOraspp.)在水中的培养物,注意观察菌丝有无分隔、抱子囊的形态、游动狗子的形成以及释放过程,游动抱子休止后的形态,注意狗囊梗与菌丝有无区别。(2)抱子囊和抱囊抱子：接合菌亚门真菌的无性繁殖器官是抱囊抱子。镜检根霉菌(Rhizopusspp.)、毛霉菌(Mucorspp.)>犁头霉菌(Absidiaspp.)的抱子囊结构、抱囊狗子、抱囊梗、假根及匍匐丝。(3)分生泡子：半知菌亚门真菌和子囊菌的无性世代繁殖时都可产生分生施子。分生胞子的色泽、形态变化较大,从无色至深色、单抱到多抱,并具多种形态。分生抱子着生在分生抱子梗上,分生电子梗有色或无色、散生或聚生,或着生在分生把子盘或分生泡子器内。采用挑、刮或切片的方法,观察玉米小斑病（BiPOlariSmaydiS）、小麦白粉病无性世代0idiummonilioides、马铃薯早疫病（Alternariasolani）病害标本,注意观察其分生狗子的颜色,有隔或无隔,隔膜的类型及其形态，分生碘子梗的形态,是否分枝及分枝的类型、颜色、着生位置等,若着生在分生抱子盘或分生狗子器内,注意观察分生抱子盘或器的形态。（4）厚壁硝子：又称厚垣抱子。由菌丝中个别细胞膨大、细胞壁加厚而形成的一种厚壁施子。对不良环境的抵抗能力较强。挑取棉花枯萎病菌（FUSarilImOXySPOriUm）的培养物制片、镜检,观察厚垣抱子的形状、颜色和壁的厚度。2有性抱子真菌有性生殖产生的抱子是由两个有亲和力的性细胞结合后发育形成的,包括卵布子、接合抱子、子囊胞子和担把子。（1）卵抱子：是鞭毛菌亚门真菌产生的有性抱子,常由形态、大小不同的雌、雄性器官交配形成。卵抱子通常形成于藏卵器内,每个藏卵器内可包含1至多个卵抱子,其数目因真菌种类不同而异。镜检谷子白发病菌卵泡子玻片标本。观察藏卵器的形态、色泽、壁光滑或有饰纹,雄器形态及其位置,卵抱子形态,每个藏卵器内卵也子的数目、卵胞子是否充满藏卵器。（2）接合胞子：接合菌亚门真菌产生的有性抱子,由两个形状和大小相似的雌、雄配子囊结合而成。观察毛霉（Mucorsp.）或梨头霉（Absidiasp.接合胞子的形状、表面的饰纹、色泽、配囊柄的形状,有无丝状附属物。（3）子囊胞子：子囊菌亚门真菌的有性抱子,产生在子囊内。子囊死子有色或无色、单施或多抱,具多种形状。子囊通常棍棒状,有的近球状,散生或着生在一定形态的子囊果内。观察桃缩叶病菌(Aphrinadeformans)子囊抱子的形状、单细胞或多细胞、有色或无色。小麦全蚀病菌(Gaeomanomicesgraminis)子囊的形状,是否具双层子囊壁,子囊有无固定孔口，子囊果的类型,有闭囊壳、子囊壳、子囊盘或子囊腔。(4)担抱子：担子菌亚门真菌产生的有性狗子。担抱子产生在担子上。观察小麦腥黑穗病菌(Tilletiacaries冬抱子萌发形成的担子及担硝子的形态。五、实验作业绘制有隔菌丝、无隔菌丝、各类无性电子和有性抱子的形态图。六、实验学时：2学时。实验三鞭毛菌亚门真菌形态及其所致病害症状观察鞭毛菌亚门真菌是一类低等真菌，其中不少是水生的。它们的共同特征是无性繁殖时产生有鞭毛的游动抱子。根据菌体的形态和游动抱子鞭毛的特征分为根肿菌纲、壶菌纲、丝壶菌纲和卵菌纲。其中与植物病害关系较为密切的有根肿菌纲、壶菌纲、卵菌纲。一、目的要求了解鞭毛菌亚门中根肿菌纲、壶菌纲和卵菌纲真菌的主要形态特征,掌握与植物病害有关的重要属的形态特征、分类依据及所致病害的症状特点。同时,学习使用检索表来鉴定病菌,为分类鉴定打下初步基础。二、仪器与用品显微镜、幻灯机、技影仪、计算机及多媒体教学设备；载玻片、浮载剂(蒸储水或乳酚油)、吸水纸、解剖刀、拨针、镜子、纱布、酒精灯、无菌水等。三、实验材料1 .芸整根肿菌(PIaSmOdiOPhorabrassicae)o2 .玉蜀黍节壶菌(PhySodennamaydis)o3 .瓜果腐霉(PythiUmaphanidermatum)o4 .致病疫霉(PhytOPhthOrainfenstans)o5 .禾生指梗霉(SderOSPOragraminis)。6 .葡萄霜霉病菌(PlaSmOParaVitiCOla)。7 .寄生霜霉(PeronoSPOraparasitica)。8 .瓜类霜霉病菌(PSeUdoPerOnOSPoracubensis)(>9 .离苣盘梗霉(Bremialactucae)o10 .十字花科白锈病菌(AlbUgOcandida)o以上病害标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片,多媒体教学课件(包括幻灯片、录像带、光盘等影像资料)以及水霉、腐霉和疫霉游动抱子形成与释放的录相带等。四、观察内容和方法(一)根肿菌纲芸蔓根肿菌(PhySOdermamaydis)取甘蓝根肿菌切片,镜检切片中的病原菌。有的寄主细胞内可见到许多堆集在一-起的鱼籽状颗粒,是病菌的休眠孩子。休眠抱子近球形。(二)壶菌纲玉蜀黍节壶菌(PhySOdermamaydis)观察由玉蜀泰节壶菌引起的玉米褐斑病标本。用拨针挑取受害病组织内呈黄色粉末状物制成临时玻片,或对病组织作徒手切片,镜检可见到许多金黄色扁球状的休眠抱子。休眠他子椭圆形,一面扁平有盖。(三)卵菌纲1腐霉属(PythiUm)观察瓜果的腐烂病病果上的白色菌丝体,将生长旺盛的小块菌丝体移至清水中培养2448h,菌丝顶端即形成大量游动泡子囊,用针挑取在清水中培养过的菌丝,观察腐霉菌的游动抱子囊。游动抱子囊丝状、姜瓣状或球状等,顶生或间生,无特殊分化的抱囊梗。抱子囊不脱落,萌发时在其顶端产生一管状物,原生质经管状物排出而形成泡囊。游动抱子产生在泡囊内。2疫霉属(PhytOPhthOra)取马铃薯或番茄晚疫病标本制片观察。抱囊梗23支成丛,自气孔伸出,假轴状分枝,小梗基部膨大,多次产生抱子囊,使抱子囊梗上部呈节状；抱子囊近球状、卵形或梨形等,具乳突。3霜霉属(PerOnoSPOra)取十字花科植物(油菜、白菜等)的霜霉病标本从叶背面刮取霉层观察。狗囊梗二叉状锐角分枝,末端尖锐。按照寄生霜霉的观察方法,选取禾生指梗霉、葡萄霜霉病菌、瓜类霜霉病菌、葛苣盘梗霉等材料,对照下列检索表,制片观察各种霜霉病的病原菌或观察病菌永久玻片标本,掌握霜霉科几个常见属的主要形态特征。霜霉科主要属的检索表1 .他囊梗粗壮,上部为重复23次的不规则二叉分枝指梗霉属(SderOSPora)抱囊梗较细22 .狗囊梗单轴分校,小轴与主轴成直角,分枝末端平钝单轴霉属(PlaSmOPara)抱囊梗呈现锐角二叉分枝33 .分枝两侧不对称,顶端尖锐假霜霉属(PSeUdoPeronOSPOra)分枝两侧对称44 .分枝顶端尖细霜霉属(PerOnoSPOra)分枝顶部膨大,呈盘状,具34个指状周生小梗盘梗霉属(Bremia)4白锈菌属(AIbUgO)镜检十字花科白锈病菌组织切片,或取以上病叶徒手切片制成临时玻片镜检。抱囊梗平行排列在寄主表皮下,短棍棒形,抱子囊串生。白锈菌为害症状是在寄主表面产生乳白色或粉状的病斑,这是病菌在寄主表皮下形成的抱子囊堆,白色粉状物是成熟的胞子囊。五、实验作业与思考题1 .鞭毛菌亚门真菌的共同特征和分类依据是什么？2 .以营养体、无性繁殖、有性生殖来比较鞭毛菌亚门三个纲的区别。3 .观察十字花科蔬菜根肿病菌、玉米褐斑病菌、水霉菌或绵霉菌,绘休眠抱子囊或游动抱子囊图。4 .绘瓜果腐霉病菌、马铃薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白锈病菌抱囊梗、抱子囊、卵孩子图。5 .绘瓜类霜霉病菌、黄苣霜霉病菌、葡萄霜霉病菌狗囊梗、抱子囊图。6 .详绘大白菜霜霉病和粟白发病的病原形态图（包括无性繁殖和有性生殖）7 .卵菌纲真菌有哪些特点?结合它们的生物学特性、说明本纲真菌进化的情况。六、实验学时：3学时。实验四接合菌亚门真菌形态及其所致病害症状观察接合菌亚门真菌的共同特征是有性生殖产生接合抱子。大多数是腐生的,少数可以引起农产品的腐烂。接合菌营养体为发达的无隔菌丝体,无性繁殖产生具细胞壁的抱囊抱子,有性生殖产生接合徇子。抱子囊的形态、抱囊泡子释放以及寄生性等是重要的分类依据。一目的要求通过实验掌握接合菌的一般形态及其所致病害的症状类型。二仪器与用品显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备；灭菌培养皿、载玻片、盖玻片、浮载剂（蒸储水或乳酚油）、吸水纸、解剖刀、拨针、镜子等。三、观察内容和方法（一）甘薯软腐病（RhizopusStolonifer）症状观察受害甘薯变软腐烂,有时散发出酒味,病薯表面长出白色、灰色至黑色毛状物。仔细观察,能见到白色菌丝体中有许多小黑点。小黑点是病菌的胞子囊。用针挑取霉层制片、镜检,观察抱子囊、抱囊抱子、范囊梗及囊轴、假根的形态。(二)笛枝根霉(RhiZOPUSStOIOnifer)培养物的镜检观察用拨针仔细地从培养的匍枝根霉菌中挑取少许连有培养基的培养物,制成临时玻片,在低倍镜下检查,或者用实体解剖镜直接观察培养皿上的菌体。观察菌丝的形态和具有分枝的泡囊梗及其基部的假根,抱囊梗之间有匍枝状的菌丝相连,在泡囊梗基部有深入寄主细胞或基质中分枝状的假根。在每一个胞囊梗的顶端产生一个圆球状的胞子囊。用高倍镜观察抱子囊内部的构造,在未成熟的孩子囊内,往往只有大量的小颗粒体,接近成熟的或成熟的他子囊内则充满了许多褐色圆形的抱囊胞子。泡子囊壁破裂后,抱子散出,露出锣锤形的囊轴。(三)接合抱子观察取根霉属(RhiZOPUs)、毛霉属(MUCor)和犁头霉属(AbSidia)接合抱子玻片标本观察,并注意原配子囊、配囊柄及配子囊的发育特点。成熟的接合抱子深褐色,表面粗糙。犁头霉菌的接合胞子在配子囊柄的着生处有附属丝。注意观察配囊柄的形状及大小。四、实验作业和思考题1.接合菌亚门真菌的主要特点是什么?与鞭毛菌亚门有何区别？2.绘匍枝根霉菌抱子囊、抱囊梗、抱囊抱子、假根、胡匐菌丝和接合他子形态图。五、实验学时：1学时。实验五：子囊菌亚门真菌形态及其所致病害症状观察子囊菌是一类高等真菌。菌丝体一般都很发达,有隔膜,具分枝,有的菌丝体可以形成菌核、子座等机构。子囊菌的共同特点是有性生殖产生子囊和子囊抱子。子囊菌所致病害的种类很多,其中许多是重要的经济作物病害。子囊菌亚门分纲的主要依据是子囊果及子实层的有无、子囊果的类型、子囊的特征等。据此分6个纲：半子囊菌纲、不整囊菌纲、核菌纲、腔菌纲、盘菌纲和虫囊菌纲。一目的要求通过实验,了解子囊菌亚门各个纲病原菌的主要形态特征,掌握子囊菌中与植物病害有关的重要属的形态特征、分类依据及所致主要病害的症状特点。二仪器与用晶显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备；载玻片、盖玻片、浮载剂(蒸储水或乳酚油)、吸水纸、解剖刀、拨针、镣子、纱布、刀片、擦镜纸、无菌水等。三、实验材料1 桃缩叶病(TaPhrinadeformans)(>2 散囊菌(EUrotiUmsp.)。3 禾白粉病菌(BlUmeriagraminis)o4 向日葵白粉病菌(ErySiPheCiChOraCeanJm)O5 瓜白粉病菌(SPhaerOtheCafuliginea)o6 桃白粉病菌(PodOSPhaeratridactyla)。7 洋槐白粉病菌(MiCroPhaerasp.)8 桑里白粉病菌(PhyllaCtiniacorylea)9 葡萄白粉病菌(UnCinUlanecator)<,10 甘薯黑斑病菌(CeQtOCyStiSfimbriata)o11 玉蜀黍赤霉菌(GibberHlazeae)(,12苹果树腐烂病菌(VaISamali)o13 小麦全蚀病菌(GaeUmannOmyCeSgraminis)o14 黑麦麦角菌(ClaViCePSpurpurea)o15 竹多腔菌(MyriangiUmharaeanum)a16 葱叶枯病菌(MyCrOSPhaerellasp.)o17 核盘菌(SderotiniaSderOtiorUm)O以上病害标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片、多媒体教学课件(包括幻灯片、录像带、光盘等影像资料)。四、观察内容和方法(一)半子囊菌纲外囊菌属(TaPhrina)。取桃缩叶病材料作临时玻片,在显微镜下检查。可看见子囊在寄主叶片的表皮下排列成栅栏状,形成无包被的子囊层,子囊下有足胞,常含抱子48个。子囊圆筒形,近球形或椭圆形。(二)不整囊菌纲散囊菌属(EUrotiUm)。观察示范镜下散囊菌的闭囊壳、子囊或散在闭囊壳内的子囊抱子。闭囊壳壁薄,只有23层细胞构成。子囊抱子单胞、近圆形。(三)核菌纲1 .白粉菌目是专性寄生菌。白粉菌侵染植物可引起多种植物的白粉病。白粉菌菌丝表生，在寄主体表扩展蔓延。-一般在叶部引起褪绿或黄色斑,以后叶面出现白色或灰白色的粉状物,即白粉菌的无性繁殖形成的分生抱子。生长后期,在病部形成许多黑色小颗粒。这些小黑点是白粉菌的闭囊壳。闭囊壳有附属丝,附属丝呈丝状,其形态因种而异。闭囊壳内子囊数目也不一样,一至多个。附属丝的形状和子囊数目的多少是分属的依据。选取小麦白粉病、向日葵白粉病、瓜白粉病、桃白粉病、洋槐白粉病、桑里白粉病、葡萄白粉病等不同材料。在实体解剖镜下观察闭囊壳及附属丝的轮廓及形态。挑取闭囊壳作临时玻片，在显微镜下检查；注意闭囊壳的形状、有无孔口、闭囊壳表面附属丝的形状和着生部位。然后轻轻挤压盖玻片,使闭囊壳破裂。观察闭囊壳内的子囊,数数是单子囊还是多子囊。对照下列检索表,观察各种白粉病的病原菌永久玻片或标本,掌握白粉菌科几个常见属的主要形态特征及所致病害症状。白粉菌主要属检索表：1.闭囊壳内单个子囊2闭囊壳内多个子囊32 .附属丝菌丝状单囊壳属(SPhaerotheCa)附属丝刚直,较粗,顶端二叉状重复分枝,分校末端螺旋状卷曲叉丝单囊壳属(Podosphaera)3 .附属丝菌丝状4附属丝非菌丝状54 .附属丝发育不良,较短-布氏白粉菌属(BIUmeria)附属丝较长白粉菌属(ErySiPhe)5 .附属丝刚直,基部膨大,顶端尖锐球针壳属(PhyllaCtinia)附属丝基部不膨大66 .附属丝粗,刚直,顶端二叉状重复分枝,分枝末端卷曲叉丝壳属(MiCrOPhaera)附属丝不分枝,顶端卷曲钩丝壳属(UnCinUla)7 .球壳菌目(1)长嗦壳属(CeratoCyStiS)观察甘薯黑斑病菌培养物,挑取病菌灰白色物中间深褐色或黑色毛刺状小点,观察病菌的子囊壳。子囊壳深色、球形,有长颈,开口处有须状物,称口须。轻压盖玻片将子囊壳压破,成熟的子囊抱子头盔状,子囊壁早期胶化消解。(2)赤霉属(Gibberella)取培养在麦粒上的玉蜀泰赤霉菌子囊壳,制成临时玻片在显微镜下观察。子囊壳蓝色或紫色,散生或聚生。子囊抱子多个细胞,梭形。(3)黑腐皮壳属(VaISa)取苹果树腐烂病菌切片镜检,子囊壳埋生在子座内,有长颈伸出子座。子囊胞子单细胞,香蕉形。(4)顶囊壳属(GaeUmannOmyCeS)观察小麦全蚀病害标本,注意病株基部根系生长不良,茎基部叶鞘枯腐,叶鞘内有黑色小颗粒状物,即病菌的子囊壳。取含有子囊壳叶鞘做切片,置显微镜下观察子囊壳形态,子囊壳顶端有短喙,子囊抱子细线状,多细胞。(5)麦角菌属(QaViCePS)取黑麦麦角菌切片,置显微镜下观察。头状子座内壁周围有瓶状子囊壳,子囊壳开口向外。子囊壳内有子囊和子囊抱子。子囊细长,子囊抱子线形。(四)腔菌纲1 .多腔菌属(MyriangiUm)取竹多腔菌切片置显微镜下观察,可见到很发达的子囊座组织。子囊球形,单生,子囊抱子有纵横隔膜,砖格状。2 .球腔菌属(MyCOSPhaerella)取葱叶枯病菌切片,置显微镜下观察。单腔多子囊，子囊圆柱形至棍棒形,有双层壁。子囊初期束生,后平行排列；子囊他子椭圆形,双胞。3 .格抱腔菌属(PIeOSPora)取首宿轮纹病病菌切片,置显微镜下观察。子囊胞子长圆形或卵圆形,砖格状(多细胞,有纵横分隔)。(五)盘菌纲核盘菌属(Sderotinia)取油菜菌核病菌子囊盘切片,置显微镜下观察。子囊盘具长柄,子囊死子椭圆形或纺锤形。观察油莱菌核病症状及菌核萌发标本。菌核球形至豆瓣形,鼠粪状,一般生子囊盘45个。菌核上形成的子是盘具长柄。五、实验作业与思考题1 .子囊菌亚门各纲的主要特征是什么？2 .绘外囊菌属和散囊菌属的形态图。3 .白粉属和单丝壳属、叉丝壳属和叉丝单囊壳属的主要区别是什么4 .绘白粉属、叉丝单囊壳属、球针壳属、钩丝壳属的形态图。5 .绘赤霉属、多腔菌属、核盘菌属形态图。6 .子囊菌有性繁殖体的病征类型和特点是什么？六、实验学时：4学时。实验六担子菌亚真菌形态及其所致病害症状观察担子菌亚门真菌一般称作担子菌,是真菌中最高等的。其共同特征是有性生殖产生担子和担电子。担子菌亚门的分纲依据是担子果的有无。担子果的发育类型可分为三个纲：冬抱菌纲、层菌纲、腹菌纲。与植物病害关系密切的是冬泡菌纲。根据担子的来源及特征,担抱子的数目及位置,冬抱菌纲分为锈菌目和黑粉菌目。锈菌的分类主要依据冬抱子的形态、排列和萌发的方式。而黑粉菌主要依据冬胞子的萌发方式、抱子的分隔、排列及其大小、形状及是否有不孕细胞等进行分类。一、目的要求通过实验了解担子菌亚门冬抱菌纲主要病原菌的形态特征,掌握锈菌目和黑粉菌目中与植物病害有关的重要属的形态特征、分类依据及所致主要病害的症状特点。二、仪器与用品显微镜、幻灯机、技影仪、计算机及多媒体教学设备；灭菌培养皿、载玻片、盖玻片、浮载剂(蒸储水或乳酚油)、吸水纸、解剖刀、挑针、镶子、纱布、蒸馆水滴瓶、刀片、擦镜纸、酒精灯、无菌水、PDA培养基等。三、实验材料1 .锈菌目(1)菜豆锈菌(UrOmyCeS叩PendiCUlatUs)。(2)禾柄锈菌(PUCCiniagraminisf.sp.tritici)(3)小麦叶锈菌(PUCCiniarecondita)o(4)小麦条锈菌(PUCCiniaStriifOrmis)。(5)梨胶锈菌(GymnoSPOragiiImharaeanum)o(6)蔷薇多胞锈菌(Phragmidiilmrosaemultiflorae)亚麻锈菌(MelamPSOraIini)o(8)花椒鞘锈菌(COIeoSPOriUm×antho×yli)松木历锈菌(CrOnartiUmquercum)(10)枣层锈菌(PhakoPSOraziziyphi-vulgaria)2 .黑粉菌目(1)小麦散黑粉菌(UStilagOtritici)(2)玉蜀黍黑粉菌(U.maydis)。(3)丝抱堆黑粉菌(SPOriSOriUmreilianum)o(4)高粱坚抱堆黑粉菌(SPoriSOriUmsorghi)高粱散抱堆黑粉菌(SPoriSoriUmCrtentum)(6)小麦网腥黑穗菌(Tilletiacaries)o(7)小麦光腥黑穗菌(TilIetiatritici)o(8)稻尾范黑粉菌(NeoVOSSiahorrida)(9)稻叶黑粉菌(EntyIomaoryzae)o(10)小麦条黑粉菌(UroCyStiStritici)o以上病菌引起的病害标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片和病菌的PDA培养物;多媒体教学课件（包括幻灯片、录像带、光盘等影像资料）。四、观察内容和方法一冬抱子萌发试验冬胞菌纲不同类型冬胞子萌发方法各不相同，几种常见的冬电子的萌发方法如下：1 .小麦网脾黑穰菌和光腥黑穰菌将冬抱子撒在保湿器内用1%硝酸钙液润湿的滤纸上,在1722C下培养,每天于日光灯下照射4h,3d后检查萌发情况。2 .小麦条锈病菌取带冬孩子病叶在0.5%l%柠檬酸中浸15min,再放于两层潮湿的滤纸之间,于一5下冷冻5d后,挑取冬抱子置于水滴内,在冰箱内(4)保存48h即可萌发。(二)锈菌目1 .单胞锈菌属(UrOmyCeS)观察菜豆锈病标本,挑取冬抱子制成玻片观察。冬抱子具柄,单细胞。2 .柄锈菌属(PilCCinia)观察小麦轩锈病、小麦叶锈病或小麦条锈病标本,冬抱子堆黑色。将有冬抱子堆的寄主叶片组织切下,制切片于显微镜下观察。冬狗子有一隔膜,分隔处稍缝缩,柄不胶化。3 .胶锈菌属(GymnoSPOragiilm)从用水浸泡过的胶锈菌冬抱子角上用挑针挑取冬泡子制片观察。冬碘子双胞,分隔处不缝缩或稍缝缩。柄丝状,很长,含胶质。4 .多胞锈属(PhragmidiUm)挑取攻瑰锈病组织上的冬抱子,制片观察。冬狗子多细胞,通常下部膨大易胶化。5 .栅锈菌属(MelamPSOra)取亚麻锈菌病组织制作徒手切片观察。冬抱子无柄,集成壳状或垫状,冬抱子仅侧面结合成一层,埋生于寄主表皮下。6 .鞘锈菌属(Cole。SPoriUm)取花椒锈病组织制作切片观察。冬抱子堆生于叶背或排列成环状,圆形黄褐色。冬抱子无柄,集成壳状或垫状的抱子粒,集生于寄主表皮层下。7 .柱锈菌属(CronartiUm)取马尾松锈病标本制片观察。冬花子堆生于叶背,毛状,冬泡子梭形。8 .层锈菌属(PhakoPSora)取枣锈病组织制作切片观察。冬胞子堆呈黑色,冬抱子排成24层,长椭圆形或多角形。(三)黑粉菌目1 .黑粉菌属(UStilago)抱子堆外露,很少由寄主组织长期包裹。担子分隔,担抱子生在担子每一细胞的侧面。挑取小麦散黑粉(穗)病组织上的冬抱子制成玻片观察。冬狗子球形或近球形。另取冬胞子萌发切片观察。冬范子萌发产生4个细胞的担子,从担子的不同细胞分别生出丝状分枝,不产生担抱子。挑取玉米瘤黑粉病组织上的冬胞子制片观察,冬抱子球形至卵形。另取冬施子萌发切片观察。冬抱子萌发时产生有隔担子,担子顶端或分隔处侧生梭形的担抱子。2 .狗堆黑粉菌属(SPOiSOriUm)冬抱子堆周围有膜(不孕菌丝),中央有寄主组织,担子分隔,担抱子生在担子每一细胞的侧面。挑取高粱丝黑穗病组织上的冬抱子制片观察。冬被子卵圆形或球形,暗褐色,有时混生有不孕细胞。不孕细胞无色透明。取高粱坚粒黑穗病标本观察。徇子堆生于子房中。冬抱子多圆形或近圆形,不孕细胞长圆形至近圆形。取高粱散粒黑穰病标本观察。冬抱子堆有由菌丝体组成的灰白色被膜。冬抱子球形,分散。3 .腥黑粉菌属(TilIet取小麦网腥黑穗病或小麦光腥黑穗病标本观察。冬抱子单生,范子堆成熟时呈粉末状,冬抱子较小。抱子堆生于子房内,外包果皮,内部充满黑紫色粉状子包子,有腥味。4 .尾抱黑粉菌属(NeOVOSSia)取水稻粒黑穗病标本挑片观察。把子堆寄生于子房内产生黑粉。挑取黑粉制片,显微镜下可见,胞子球形,常有一部分未成熟的透明抱子。5 .叶黑粉菌属(EntylOma)取水稻叶黑粉病标本,切片观察。泡子堆生于叶的两面,圆形至长条形。袍子多角形，结合紧密。取萌发的担抱予玻片观察,担抱子顶生于担子上,纺锤形。6 .条黑粉菌属(UrOCyStiS)取小麦秤黑粉病标本,制片观察。一至多个厚垣泡子集结成牢固的他子球,抱子球外有淡色而小的不孕细胞包围。五、实验作业1 .绘黑粉菌属、腥黑粉菌属和条黑粉菌属冬抱子形态图。2 .绘腥黑粉菌属冬狗子萌发图。3 .绘柄锈菌属、单胞锈菌属、栅锈菌属和胶锈菌属冬抱子形态图。实验七半知菌亚门真菌形态及其所致病害症状观察半知菌亚门真菌的种类很多,其中不少是植物病害的重要病原菌。半知菌的分类主要是根据无性阶段的形态特征,包括分生抱子的形态、载抱体的类型、产抱方式等。半知菌亚门分3个纲。芽抱纲：营养体为单细胞或发育程度不同的菌丝体或假菌丝,通过产生芽抱子繁殖；丝泡纲：营养体是发达的菌丝体,分生抱予不产生在分生抱