1.团体标准《六堡茶中茶红素、茶褐素的测定 紫外分光光度法》（征求意见稿）.docx

ICS67.050CCSC53T/GXAS团体标准T/GXASXXXXXXXX六堡茶中茶红素、茶褐素的测定紫外分光光度法Determinationofthearubiginandtheabrowninein1.iupaoteaUltaravioletspectrophotometry（征求意见稿）（本草案完成时间：2024年4月30日）在提交反愦意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上.XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施广西标准化协会发布-XX.-a-刖百木文件按照GlvT1.1-2020M标准化工作导则笫1部分；标准化文件的结构和起点规则¥的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由梧州市食品药品检验所提出并宜贯.本文件由广西标准化避会白口.本文件起草单位：梧州市食品药品检蛤所、广西梧州圣源茶业有限公司、广西梧州芙叶茶叶股份有限公司、梧州市天誉茶业有限公司、广西速溶六堡茶工程技术研究中心。本文件主要起草人：蒋德莉、何娜班、陈启钊、钟水桥、文俊萍、罗达龙、陈婵、李君、咫蓝、T华、李夷君、黄琳、卓海琳、黄金福、书燕娟、枝刚、宋好、冯成.六堡茶中茶红素、茶褐素的测定紫外分光光度法警示：实验操作过程使用的三公甲烷具有一定毒性，分析人员在溶液配制和样品预处理过程时应按规定假戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。1葩国本文件描述了六堡茶中茶红素、茶糊素的联外分光光度测定法。本文件适用于六重茶中茶红素、茶树素的测定.本文件规定茶红素的定盘限为02%.茶树索的定量限为0.4%.2规楚性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注口期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件,其G新版本（包括所有的修改单适用于本文件。GB/T6682分析实脸型用水规格和试验方法GB/T8303茶磨碎试样的制备及我干物质含Ift测定3术语和定义木文件没有尚要界定的术语和定义。4原理试样中茶红素和茶褐素经沸水提取后.茶红索分别用乙酸乙而、正丁静和酸化正丁醇进行液液萃取得到测试液,茶栩素用无水乙醇进行液液萃取得到测试液,茶红素于272ml、茶栩素于280n三处测定吸光度，根据标准曲线计算茶红素和茶糊素含麻.5试剂及其配制除非另有说明，所用试剂均为分析纯，实脸用水应符合GB/T6682中二锻水的要求。51试剂和材料5.1.1无水乙解（CHQH）。5.1.2三氯甲烷（CHC1.）5.1.3乙酸乙质（CHJ.5.1.4 正丁醉（QHM）5.1.5 5酸（HC1）.41溶液配制O.I5三oll.盐酸溶液:Ift取13.50«1.盐酸溶液.用水定容至11.6仪器和设备61紫外分光光度计：配制IS石英比色111.6.2天平：精度o.Oing.O.Olg.A1在空冷冻干燥箱，AA数显忸淑水浴祸。A4商心机：4500rmi11.AA一般实验室常用湍皿和设备.7样品制备按GB/T8303的现定进行试样制备和干物顺含域的测定。8分析步臊R1对照品制备8.1.1茶红素对照品：称取试样50g（精确至0.01g）,加入沸水50Om1.浸泡30min,更灾提取13次，合并滤液后过渡得澄清的汤液，取泄液在60C水浴锅上浓缩体积至100mJ转移浓缩液至500m1.分液浦斗中，加入20Om1.三氟甲烷（5.1.2）萃取,弃去三氯甲烷层国余水层加入20Onl1.乙酸乙醋（5.1.3）萃取,收集乙酸乙隙层，蒸干备用；剩余水层加入100m1.正丁静（5.1.4）萃取,收集正J静层，蒸干符用：剌余水层加入0.15mo"1.盐酸溶液（5.2.1）50ml.酸化，冉加入15Om1.正丁醉（5.1.4）萃取.收集酸化正丁醇层，蒸干先用.合并乙酸乙屋层、正丁醇层和酸化正丁醉层固体，冷冰干燥得茶红索对照品.8.1.2茶褐素对照品：称取试样50g（精确至0.01g）,加入沸水50。ml浸泡30min,造复提取3次，合并灌液后过滤得澄清的汤液，取谑液在60C水浴锅上浓缩体积后,转移浓缩液至50CIm1.分液漏斗中.加入无水乙酹（5.1.1）至占溶液总量90%,混合均匀.放置到4C冰箱静置8h以上,黑心取沉淀，冷冻干块野茶褐素对照R5姥制标注曲线8.2.1林取茶红素对照品10.00mg于10ml.容量瓶中.用水溶解并定容至刻度,避光4C保存,临用新配.配制6个浓度点,浓度分别为0.00g/ml.,0.5以矶、2R/ml.、5以ml.、20g/m1.和50g三1.将配制好的标准系列样品混匀，在波长272nm处，使用ICm石英比色加，以水为参比，测定吸光度,以茶红素浓度（UgZm1.）为横坐标，以相应的吸光度值为双坐标，建立标准曲战。8.2.2林取茶褐素对照品10.0011于10m1.容量腌中,用水溶解并定容至刻度,避光48保存.临用新配1配制6个浓度点,浓度分别为0.00gm1.2Ugm1.5Ugml.20Ugm1.50Ugml.和100g三1.将配制好的标准系列样品混匀,在波长28Onll处.使用ICm石英比色曲.以水为参比,测定吸光度.以茶楣素浓度（g三O为横坐标,以相应的吸光度值为纵坐标，建立标准曲线.注：可根据实标情况选样或调整合班的标HI：系列浓慢.R?样品测定8.3.1茶红素的测定：称取试样5g（精确至0.00Ig）于100mI.惟形瓶中.加入50»）.沸水后，置于沸水浴中提取30min,期间不时搅拌以保证料液充分接触，梢加冷却后过谑，取池液在6。C水浴锅上浓缩体枳，转移浓缩液至100m1.分液漏斗中,加入三氯甲烷（体枳比：1:2）萃取，弃去三场甲烷层。剩余水层加入乙酸乙曲（体积比：1:2）萃取.收集乙酸乙酯层.蒸干招用：耙氽水层加入正丁醉（体积比：1:1）萃取.收集正丁肿层,蒸干备用：剜余水层加入015mol1.盐酸溶液50m1.酸化,加入正丁碑体枳比：1:1）萃取.收集酸化正丁醉层，蒸干备用.将以上蒸干待测样分别用水溶解.并转移至50Ml.容於精定容，再取0.5ml至20Om1.容旗腋定容，为茶红素待测液。8.3.2茶褐素的测定：称取试样5g（他确至0.001g）于100m1.锥形感中,加入50B1.沸水后，W沸水浴中提取30min,期间不时搅井以保证料液充分接触，梢加冷却后过渡，取沙液在60C水浴羽上浓缩体枳.转移浓海液至100m1.分液漏斗中,加入无水乙肝至占溶液总盘的90E,混合均匀,放置到IC冰箱静跣Hvh以上，在4C下9000rin下齿心I5min,犯到沉淀物，将沉淀物用水溶解，并转移至50ml.容依瓶定容，再取Im1.至20Om1.容m瓶定容，为茶褐素得测液，84空白试验按照试样的溯定8,3相同步骤进行空白试样的测定。9结果计算试样中茶红素和茶褐素的含麻按照公式（D计算：IC-Q)XVm×0>×100OO式中:X-一茶红素/茶褐素的含印，单位为百分号（%）；C由标准曲畿计算得到的目标化合物的浓度,单位为（TgZn1.）；c¾空白试样的浓度，单位为（um1.）；XP一一试样的质量.单位为克（g：»一一稀择体枳,单位为亳升（ml.）：3干物质含SU质J分数），弟位为百分号R）.测定结果以两次测定的算术平均值表示,测定结果保剧小数点后一位.10精密度在重红件条件下获褥的2次独立的测试结果的绝对差值不大于这2个测定值的算术平均值的15%.在再现性条件下获知的2次独立的测试结果的绝对差值不大于这2个测定值的算术平均值的26.11注意事项本方法茶红素和茶褐索的线性含城施国分别为0.2%-20.0%和0.4-20.0当含量超出范用,则可的情犍少称样量或加大提取液定容体根。