2.团体标准《六堡茶中花青素的测定 高效液相色谱法 三重四极杆液质联用法》编制说明.docx

团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法（征求意见稿）编制说明一、项目来源根据广西标准化协会关于下达2023年第四十五批团体标准制修订项目计划的通知（桂标协（2023）157号）文件精神，由梧州市食品药品检验所提出，广西格州圣源茶业有限公司、广西梧州芙叶茶叶股份有限公司、梧州市天誉茶业有限公司、广西速溶六堡茶工程技术研究中心共同起草的团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法（项目编号：2023-4503）0二、项目背景及目的意义（一）背景为贯彻落实习近平总书记重要指示精神，广西壮族自治区人民政府提出促进广西茶产业高质量发展的战略部署，经自治区政府同意，自治区农业农村厅印发了加快推进广西六堡茶及特色优势茶产业高质量发展实施方案，明确把梧州六堡茶作为核心重点打造，力争到2025年，综合产值突破100O亿元，其中梧州六堡茶综合产值达至U550亿元。2021年12月，梧州市相继出台了梧州市六堡茶文化保护条例梧州六堡茶产业高质量发展三年行动计划（2021-2023年）梧州市支持六堡茶茶园建设政策等政策法规，为六堡茶产业高质量发展提供政策保障，对六堡茶全产业链的各个环节均给予政策、资金支持。梧州市第十四次党代会及“两会”均专门提出要大力发展六堡茶产业，实施六堡茶产业发展行动计划，从茶苗、茶园、茶企、茶师、茶市、茶城六大关键环节着手，系统推进六堡茶产业做大做强，实现六堡茶销全国、卖全球。决心要把梧州六堡茶产业打造成为广西茶产业的“半壁江山”。（一）目的意义花青素是广泛存在于植物中的水溶性天然色素，在植物细胞液泡不同的PH值条件下,花青素使植物呈现五彩缤纷的颜色。已知天然存在的花色素有250多种,存在于27个科、73个属的植物中，常见的花青素有6种,即飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药色素和锦葵色素。花青素主要以花色音的形式存在，通过形成塘音键的方式与1个或多个葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等结合，因此花青素具有较强的抗氧化性，可以增强体内免疫系统功能，使机体耐受力增强，减少体内维生素A氧化，促进视网膜细胞中的视紫质再生，起到保护视力的作用，可以漕加血管弹性从而防止血管硬化保护血管。随着人们自我保健的意识日益增强，绿色健康的保健方式更能得到人们的青睐，因而富含花青素食品市场发展的潜力非常大。通过对六堡茶中花青素含量的测定，为企业提供不同产品的花青素含重数据，对于企业研究开发富含花青素六堡茶产品提供技术支撑，推动六堡茶产业实现由“加工驱动发展''模式转变为“科技驱动发展”的新模式。（三）必要性目前茶叶中花青素的测定方法在检验标准和论文研究中主要有四种:1.高效液相色谱法：HP1.C是一种常用且可靠的分析技术，通过不同组分在色谱柱中的相互作用和分离来测定花青素的含量；2.分光光度法：分光光度法是一种简单、快速的测定方法，适用于花青素的初步测定，通过花青素在最大吸收波长下的吸光度来测定花青素的含量；3.质谱法:通过高效液相色谱-质谱联用法(HP1.C-DAD-MS),测定茶叶中花青素的含量具有高灵敏度高选择性的特点；4.pH示差法:PH示差法是在花青素最大吸收波长下确定两个对花青素吸光度差别最大但是对花青素稳定的PH值，对花青素进行定量分析。花青素是植物体内较为重要的一类次生代谢物，广泛分布于表皮细胞的液泡中。六堡茶中的花青素含量会受原料中花青素的分布情况、六堡茶制作工艺、后发酵储存情况等影响，存在较大的差异。农业部制定的农业行业推荐标准NY/T2640-2014植物源性食品中花青素的测定高效液相色谱法中花青素的提取水解方法，对于提取含量较低的六堡茶中花青素，缺乏考虑其本身的其他色素干扰，会影响花青素的含量测定的准确性。制定六堡茶中花青素的检脸方法标准，能针对该类基质制定针对性的净化方法，对更好的研究六堡茶中花青素含量及其生物利用率提供检验技术支撑。生产企业通过了解六堡茶中花青素含量水平，可以研究如何改进工艺以更好利用花青素，生产出富含花青素的产品，增强六堡茶产品的市场竞争力，推动六堡茶产业的高质量发展。三、项目编制过程(一)成立标准箱制工作姐团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法项目任务下达后，梧州市食品药品检验所等单位成立了标准编制工作组，起草单位制定了起草编写方案与进度安排，明确任务职责，确定工作技术路线，开展标准研制工作。具体标准编制工作由梧州市食品药品检验所、广西梧州圣源茶业有限公司、广西梧州芙叶茶叶股份有限公司、梧州市天誉茶业有限公司、广西速溶六堡茶工程技术研究中心等起草单位组成标准编制工作组，编制工作组下设三个组，分别是资料收集组、草案编写组、标准实施组。资料收集组负责国内外有关六堡茶中花青素的测定，高效液相色谙法和三重四极杆液质联用法的文献资料的查询、收集和整理工作，查阅前人对六堡茶中花青素的测定，高效液相色谱法和三重四极杆液质联用法研究情况和进展。草案编写组负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作，包括后期召开征求意见会、网上征求意见，以及标准的不断修改和完善。标准实施组负责六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法团体标准发布后，组织科研院所、相关企业开展标准宣贯培训会，对标准进行详细解读，让相关人员了解标准，并根据标准对六堡茶中花青素的测定进行规范化操作，保证方法的准确性，并对标准实施情况进行总结分析，不断对团体标准提出修正意见。（二）收集整理文献资料标准编制工作组收集了国内有关花青素检测相关文献资料。主要有：NY/T2640-2014植物源性食品中花青素的测定高效液相色谙法DBS63/0011-2021食品安全地方标准黑果枸杞中花青素含量的测定DB64/T1578-2018黑果枸杞中花青素含量的测定高效液相色谱法DB22/T2529-2016紫穗玉米花青素测定分光光度法T/QAS075-2022黑果枸杞及其制品中花青素（花色甘）的含量测定PH示差法T/NAIA0147-2022翻萄酒中6种花青素的测定液相色槽-质谱/质造法T/JTAIT11-2022鲜蓝莓中花青素的测定液相色谱串联质漕法（三）研讨磷定标港主体内容标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究之后，标准编制工作组召开了标准编制会议，对标准的整体框架结构进行了研究，并对标准的关键性内容进行了初步探讨。经过研究，标准的主体内容确定为方法原理、试剂和材料、仪器和设备、样品制备、分析步骤、结果计算与表示、质量控制。（W）形成草案、征求意见稿2023年1月11月标准编制组经过大量文献调研和基础实验，建立了六堡茶中花青素测定的高效液相色谱法和三重四极杆液质联用法，2024年1月，组织了三家有资质的实验室进行方法验证，于2024年2月收回了全部的险证报告，在此基础上进行了数据的汇总和分析整理工作。2023年11月2024年2月，在前期工作的基础之上，通过理清逻辑脉络，整合已有参考资料中有关检测方法，并结合前期实验的实验结果，按照简化、统一等原则编制完成团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谙法/三重四极杆液质联用法（草案）。2024年2月2024年4月，标准编制工作组对前期的研究和数据进了整理并结合前期技术咨询会、征求意见会、技术审查会的内容针对该检测方法多次讨论、研究，最终形成团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法（征求意见稿）和编制说明。四、标准制定原则1,实用性原则本文件是在充分收集相关资料和文献，分析花青素的检测方法如：分光光度法、PH示差法、高效液相色谱（HP1.C）法、液相色谙-串联质谱法（1.eMS/MS）等，优化六堡茶中花青素的检测方法，在现有国家、行业标准相关花青素的检测方法的基础上，结合六堡茶基质的基质特点和提取方法起草的。符合当前六堡茶质量检测的要求，填补测定六堡茶中花青素方法标准的空白，有利于行业的长远发展，具有较强的实用性和可操作性。2、协调性原则本文件编写过程中注意了高效液相色谱法和三重四极杆液质联用法测定六堡茶中花青素的技术要求与相关法律法规的协调问题，在内容上与现行法律法规、标准协调一致。3、规范性原则本文件严格按照GB"1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的要求和规定编写本标准的内容，保证标准的编写质量。4,前瞪性原则本文件以的当前花青素检测方法为基础，通过高效液相色谙法和三重四极杆液质联用法测定六堡茶中6种花青素，为六堡茶中花青素检测提供检脸方法，在标准中体现了特色性、前瞻性和先进性，符合提升六堡茶品牌价值的要求，由此衍生的六堡茶新型产品更能成为六堡茶的一项特色增强其品牌市场竞争力。五、标准主要内容及依据来源团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法主要章节内容为原理、试剂和材料、仪器和设备、样品制备、实验步骤、结果计算、精密度、检出限和定量限。(一)原理六堡茶中花青素主要以花色昔的形式存在。试样经乙醉-水-盐酸溶液超声提取花色素甘后，经沸水浴将花色素苗水解成花青素，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量；用液相色谱-三重四极杆质谱仪测定，以保留时间和特征离子峰定性，外标法定量。(二)试剂和材料本标准研究的目标化合物的基本信息如下表1。实验用水为超纯水。试剂为符合国家标准的液相色谱纯化学试剂，在使用前均进行试剂空白实验，满足方法要求才可使用。标准物质等均为购置市售有证标准品O表1目标化合物基本信息化合物英文名林CAS号分子量分子式理化性质飞毒草色素Dc!idin528-53-0338.70cs11O?CfHOMO花青亲分子中专在高度分子共扼体系.含在酸性与说性善团.品溶于水.«».乙好.稀族用洋酸等夜性溶剂中.供外区最大吸收波长在28Onm阳近.可通光区域最大吸或波长江500S50nm范圉内.花青亲美物而的质色困PH值烫化而变化.PH<1呈红色.pH=7-8时呈维色.pH>U时£萱色.矢率阴色京C尸midin5285-5322.70Ci5HiiGa,CrHOHO婕聿牛色今Petunidin142-30-7352.72CeH11a6OHCrh>c-oho天竺英色青PelnryonidinI34.O433067()Ci5HiiCI6“。令夕,CTHO芍为去Petmidin134014)336.72CHCIa.OH力T0gCrH)C-0HO化合的英文名你CAS号分子，分子式结构式理化性质情美色*Malvidin64384-536655CnHiiO6CH>OHmo-05=A110HOCrCM>(=)仪暑和设备花青素的分析方法主要有分光光度法、PH示差法、高效液相色谱法(HP1.C),液相色谱串联质谱法(1.CMSMS)。花青素分子中存在高度分子共扼体系,含有酸性与碱性基团,易溶于水、甲薛、乙醇、稀碱与稀酸等极性溶剂中。分光光度法对区分花青素各个主要成分的含量灵敏度较低，适合于花青素总量的测定；PH示差法虽然方法快捷，但测定结果与高效液相色谱法相比偏低，不适合低浓度的花青素检测：HP1.C是一种常用且可靠的分析技术，通过不同组分在色谙柱中的相互作用和分离来测定花育素的含量；1.e-MS/MS可提供待测物的结构信息，具有较高的灵敏度和选择性。(四)样品制备1、样品制备采用四分法分取样品，取约20Og样品于研磨机中粉碎，过60目筛。制得样品在-18C下保存。2、样品的保存前处理提取水解后的样品应尽快分析，确需保存时，应4C冷藏、避光保存，并在48小时内实验完毕。课题组选择两种加标浓度的样品2()ngm1.20()ngm1.(相当于检出量为O.【mg/kg、lmgkg),在4冷藏、避光放置不同时间后上机(1.aMS-MS)分析，测试的数据如下，结果表明样品在4C冷藏、避光保存条件下，48小时内ng/m1.级别水平的样品浓度无明显变化,且样品浓度的相对标准偏差应RSD5.0%°详细数据见表2。表2粒定性测试蚊据化合知名沙a标水平<ng,m1.)0.0h(n科'm1.)4.0h(ng，Im1.)8.0(ngml.)24.0h<ng.'m1.)36.0h<ng/m1.)48.0h(11gn1.>平均U(ng,m1.)RSD(%)飞燕草色条2019310119.474218.358418.204218.204218.546118.68293.12»197.42(13189.9411186.33()1190.6110180.4877183.1360186.32103.6矢车书色#201023719.4713I8.6WX18.558018.096119.199618.W)722.6200196.4050188.5002184.8667180.1527183.1524185.4086186.4142Il塔拿牛色索2019.310019.259418.744918.127617.949519.3485用79(KI3.42()019.5102I94.3MMI8K5254.4SOo180.5068IS5.0I25IsKo6<>93.9天竺典色京2019350119.295218.821018.525118664318.845518.91681.82»197.9105194.259219().487«1863728185.8836185.6976190.13522.7芍为京2019.180619.431318.915918.995318.850719.651319.1742!.72C0198.6653195.7268l<M.229O191.0717191.2772194.5107l<M.24681.5睇蒸色素2020.377120.355419.205319.164118.655019.51961954613.62()0199.19X4197,根194.1956187.1(3180.5073182.06071维10824.3(五)实验步豪本方法拟采用乙等-水-盐酸溶液超声提取花色素音后，经沸水浴将花色素背水解成花青素，用高效液相色谱法和液相色谙-三重四极杆质谱仪测定六堡茶中6种花青素。方法包括试样制备、样品提取和水解、仪器分析、数据处理和质量管理等方面的内容。1、仪愚分析方法条件优化1.1 液相色谱条件实验考察了乙懵-水、乙脂-不同浓度甲酸水溶液(0.1%,0.5%,1.0%)等流动相对目标化合物保留行为的影响，结果表明当采用纯水作为流动相时，目标化合物峰形较宽并带有拖尾现象，分离度较差；当水相中添加了甲酸后，目标化合物的色谱峰峰形有了极大改善，分高度也有了一定的改善。随着甲酸浓度的提高，对样品的质谱响应抑制也相应增大，最终选择1.0%甲酸水溶液作为液相色情法流动相，0.1%甲酸水溶液作为三重四极杆质谱联用法流动相。同时固定流动相为1%甲陵水考察了30C、40C、50C不同柱温对出峰时间的影响，根据出峰时间和峰型，最终选择40C作为液相色谱柱温。isI乙水、乙腑-不同浓度K酸水溶液及不同柱潺色谱图液相不同柱:s加件液质-乙廉-0.1%乎酸水/0.5%甲酸水定量离子峰看积（红色为0%甲酸水,茹色为0.5%甲陵水）同时我们还对流动相梯度洗脱程序进行了优化，使各组分达到基线分离。1.2 质谱条件优化采用电喷雾电离源（ESl）在正离子模式下对6种花青素化合物的质谙条件进行优化。各组分在正离子模式下均有较好的响应。在ESI+离子模式下，6种花青素化合物的分子离子均为选定为母离子，进行选择性离子扫描（SlM）,以确定源内碎裂电压，再进行二级质谱扫描，以不同的碰撞能量将待测物的分子离子打碎,寻找子离子碎片，图2为二级质谱扫描图。采用MRM模式，以子离子响应最强时的参数来确定碰境能量，表3为目标化合物的多离子反应监测条件。图26种花青崇在ESr模式下的二级质话图表36和花*素美抗生素的多离子反应世测沏件化合物母离F(11z)7,J(rzz)驻宙时间/8碎裂电&/VWtWeV飞播草色素303.I2S7.O30:wo2H229.0*30380ao矢下辆色素287.I108.930：W042137.0*303032矮牵牛色器317.1302.M3038024203.0IW：W0:耐天竺梦色素271.0121.0*30380as65.0303055芍药素：W1.052H6.(K：W025201.0930渤-10的将色或331.2315.13038028242.030380SO.：瞥”囱方定离子.对于不用南*伐量，多数可能存在禺罪，酒定Irt应将所谱多会优化到景住.2、标准曲线2.1高效液相色谱法配制浓度依次为O.Wg/m1.、O.2gm1.O.5gm1.2.0gm1.,10gm1.,20Jgzm1.的花青素标准工作液系列(此为参考浓度序列)。在该浓度范围内各组分的相关系数均大于0.995。图36种花青素色谚图C=S30nm,浓度：2.0gm1.)保留时何：I-飞条弹色米：4-天竺焚色素：2-矢车粉色素：5-芍药素：3嫉牵牛色素：6锦蓝色米.2.2三重四极杆液质联用法配制浓度依次为1.Ong/m1.、2.0ngm1.5.Ong/m1.20ngm1.1()0ng/m1.和200ngm1.的花青素标准工作液系列(此为参考浓度序列)。在该浓度范围内各组分的相关系数均大于0.995。图46种花青素MRM摄取色谱图(浓度:2()ng.m1.)离子对：锦丞色素-331.”2420315.1：矮牵W色素-317.1)3.(1302.0：飞条单色波-303.1/229.0/257.0：芍的崇-301.05,201.09,1286.05:关车菊色素-287.1/108.9/137.0；天竺奖也索-271.S'65.0N21.O.3、实验室内检出限3.1 高效液相色谱法实跄室内检出限确定根据仪器灵敏度情况，选择0.1gm1.作为检出限的测定浓度，配制7份加标浓度为0.1gm1.的加标样品(样品称样量为5g,稀释倍数为25m1.,飞燕草色素测得值为1.2mgkg,矢车菊色素测得值为1.OmgZkg,稀释2倍后仪器信噪比为3;1,在稀释液中加入其余四种花青素相应浓度)，过滤膜后直接进样分析，数据结果见表4。表4高效液相色谱法也出限计算结果<11=7)化合物JHtOt(g1.>平也值(gf,m1.)相对标术偏是<%)检出停(mM)定量取(mg,kg>I234567飞嘉单色集0.0870.10760.09890.10350.08890.09360.09780.09707.40.514矢车葡色素0.08470.08150.08430.08060.08280.08340.08470.08312.00.51.5靖京牛色京0.09570(1962oo70.0982009530.0998().l(三0.09812.50.513天竺英包京O.OWJO(>.(»8020.0IW9SoKIO0.08760.08160.08640.0S44.40.5IS芍防常0.08270.08010.0S540.0080.07的0.08300.08380.08203.10.50.10170.10160.09620.(MM40.10080.09720.09480.09813.30.5153.2 三重四极杆液质联用法检出限确定根据仪器灵敏度情况，选择1.OngZm1.作为检出限的测定浓度，配制7份加标浓度为1.OngZm1.的加标样品(样品称样量为5g,稀释倍数为25m1.,飞燕草色素测得值为1.2mgkg,矢车菊色素测得值为1.0mgkg,稀释240倍后仪器信噪比为3;1,在稀释液中加入其余四种花青素相应浓度)，过谑膜后直接进样分析，数据结果见表5。表5三曳凶板杆液质联用法检出限计算结果(n=7>化合物Sl定僮IngJm1.)平均值(ng,m1.)相对标准偏紫(%)检出限g<lg)定量眼(g>I234567飞蓑*色0.95910.92170.75860.85400.81290.85440.92600.86958.25.015.0矢车声色0.82530.79540.8004O.8()IO0.80210.83850.82920.81312.25.015.0燃奉牛色0.90050.8615090190.89040.84560.86090.<M440.88653.85.015.0天竺整色0.88380.85110.88370.8627().86230.86270.892707131.85.015.0有其保1.01250.9«6!0.99060.97700.97720.9W<70.97990.98741.35.015.0WI本色索0.98730.99331.02180.99120.99730.96791.00170.99441.75.015.04、方法的精密度4.1 高效液相色谱法方法精密度高效液相色谱法的精密度，分别对三个浓度水平分别为1.0gm1.50pg/m1.、K)gn1.(相当于检出量为5.Omg/kg.25mgkg,5()mgkg)的6种花青素加标样(样品称样量为5g,稀释倍数为25m1.,飞燕草色素测得值为1.2mgkg检出浓度为0.2%gm1.、矢车菊色素测得值为1.Omgzkg检出浓度为020jgm1.,加入扣减样品浓度后相应浓度对照液)进行了精密度测试(见表6到表8),每个浓度水平配制6份平行样品。从表中可以看出，不同浓度的空白加标水样，测试的相对标准偏差为07%20%,说明方法的精密度良好。表6添加浓度(1.0gm1.)-低浓度空白茶体加标测定精密度数指化合物测友Ii(4IgJm1.)邛均值(gm1.)标用偏差g<tm1.)用对林术t½<%>I23456飞叁草色米1.1229!.1(W51.13611.15121.B711.I55S1.13541.01.6矢车苗色*1.1641I.KM31.15571.1566l.l91.14491.14411.01.9战中牛色米1.1505l.1411233I12061.11711.1452U3411.01.4天竺英色*1.0616l.1166fl1.07021.06921.05041.06151.06321.00.7芍苜素1.041.03411.01441.04841.01161.03781.03251.01.61.10721.IIOI1.1167I10711.11431.08681.10701.01.0表7添加浓度(5.0gm1.)中浓度空白基体加标测定精密度数指化合物测定值(Ilgin1.)平均值标出除昆(f111.>相片标木»£I23456飞我蕈色米5&7O5.76365.70075.55905.8395S.644X>5.72505.02.0矢车甘色米5.H1I75.72605.60195.69055.59855.64735.67935.01.5康冬牛色米426M4.29814.23R94.29184.4OS44.26634.2954)501.4夭竺英色素5.76625.85325阴395.72225.8O5S5.72055-79195.01.2芍药宗5.78255.68995.72325.58195.75135.66025.69825.01.3住葵色索5.45695.45765662656335.66845.51915.57655.02.0表8添加浓度(IOQigAn1.)高浓度空白基体加标测定精密度数据化合物测定U<gmt)平均值4SS(gin1.)相对标准*(%)I23456飞会单色便11589811.56111.723211.675811.598211.8015II.65S4100.8美车将色索11320111.690511.764111.497911.587411.4608113535IO1.4矮牵牛色便850538.56928.6802».76568312?X.64478.6130IO1.2天”莠色*1MH711.525911.632611326311.551111.614?IM437IO0.7芍巧奉11.579811.615111.471711.616311.479211.632211.5657IO0.7铺集色米10.871711.115811.120611.0472IO.84511.042711.0138IO1.14.2 三重四极杆液质联用法方法精密度三重四板杆液质联用法的精密度是对三个浓度水平分别为IongZm1.50ng/m1.»200ng/m1.(相当于检出量为0.05mg/kg、0.25mgkg,2.0mgkg)6种花青素空白加标样(样品称样量为5g,稀释倍数为25m1.,飞燕草色素测得值为l.2mgkg检出浓度为0.24gmJ矢车菊色素测得值为1.0mgkg检出浓度为0.20gm1.,稀释100倍后，加入扣减样品浓度后相应浓度对照液)进行了精密度测试(见表9到表11),每个浓度水平配制6份平行样品。从表中可以看出，不同浓度的空白加标水样，测试的相对标准偏差为0.7%8.l%,说明方法的精密度良好。表9漆如浓度(IongZmU-低浓度空白基体加标测定精密度数据(n=6)化合物««(fi(ng.m1.)平均值标中偏$<ng,n1.)相对标*屋茎(%>123456飞善草色素8.39638.91827.28378.80547.71678.8264832450.67?8.1美年葡色京8.3397.9218'S-77.90127.87207.92307.96680.1682.1检牵牛色米9.4X67«.756485807*6230g.g(B49.04308.93220.3053.4天竺莫色便9.08098.77238.78368.61708.68608.74578.78090.1591.8芍苗素9.78819.4317939099.51319.40049.58559.51830.1521.6海葵色素8.34818.66248.50328缺238.62()28.&网58.570S0.1261，表10添加浓度(SOngfm1.)中浓度空白基体如标测定精密度数据(n=6)化合绮平均值(Hgm1.)标戊偏空<ng,m1.)相对标出M(%)123456飞索单色素41.232646.055039.819645.035039.4365443X6942.66092X516.7矢率着色素48.971049358649.73%48.410349.085248.682749.04120.4741.0媛孕牛也素46.824746.438746.520046.188445.946145.877546.29920.3630.8天竺美色未49.205049.267949.996249.303349.932547.177249.14701.0262.1巧其案48.092248.724748.242548.907948.692746.958948.269«0.71315Wl泰色未44.989146.016346.606646.008245.715243.784845.52001.0002,2表Il添加浓度(200ng/m1.务该度空白基体机标测定精定度数据(n=6>化合物测定值(ng'iti1.)平均值(IIam1.)标准制SgIlm1.)用对标准偏基<%>I23456飞燕单色米163.9233182.72061664116181.63371633205I83.OQ8I173.50309.8715.7矢车箱包案182.1576179.4()95180.3933176.1459179.6S9I177.7729179.261410881.2博奉牛色素179.3060182.00281$6.0815178.168717923331773717I80.073.2111.8天竺葵色素187.7246I86.4*M6186.4310I86.5M7187.3807182.4679186.18061.8941.0芍药京192.4473189.3514192.3149191.82961%2733IS9.699I191.31931.4()90.7弊箕色素179.7343181.2221»).2026I77.87QIKO£113178.7655179.78001.2780.75、方法的准确度5.1 高效液相色谱法方法准确度高效液相色情法的准确度是对三个浓度水平分别为l()gm1.5.0gm1.,10gm1.(相当于检出量为5.0mgkg,25mgkg450mgkg)的6种花青素加标样(样品称样量为5g,稀释倍数为25m1.,飞燕草色素测得值为1.2mgkg检出浓度为0.24gm1.、矢车菊色素测得值为1.OmgZkg检出浓度为020gm1.,加入扣减样品浓度后相应浓度对照液)进行了准确度测试(见表12到表14),每个浓度水平配制6份平行样品。从表中可以看出，不同浓度的空白加标水样，测试的加标回收率为96()%1079%,说明方法的准确度良好。表12添加浓度(1.0am1.>-低浓度空白爹体加标测定准确度数据化合物测定慎<g.,m1.)平均值标准值,n1.)Bft*(%)I23456飞热蕈色京1.O72X1.10791.0991.Q7I31.05271.06X01.381.0107.9矢奉簪色素1.09181.08231.07901.065?1.06711.05961.07421.0107.5接奉牛色隹1.O9W41.09791.06571.07661.06471.(1672IMK51.0107.9天竺英色素1.01620.95960.96860.97990.99610.96080.98021.098.0芍苗便1.0<M>50.99951.01231.01501.01270.9996l.<X661.0100I伸身色米3131.8761.07101.0977I.CM611.07531.0107.6表13第加浓度(5O0m1.)-中浓度空白基体加标测定准编度数据化合物测定值(gm1.)平均值(g1,ml.)标准值回收率(%)I23456飞抵单色素4.98265.05375.27425.22265.42795.51505.24605.0