LC-MS方法分析皮肤表面鞘脂的组成.docx

背景介绍鞘脂(SPhingOliPidS)以鞘氮醇骨架为基本结构，是表皮中功能最丰雷的一类脂质，在表皮解障的形成和结构中起基础性作用.其中,神经酰胺是皮肤屏障的重要组成成分，约占角质层脂质含量的50%(质量分数)，能防止表皮失水和环境中有名物质的渗透.因此，对皮肤表面鞘脂进行全面分析对丁评估皮肤状态和屏障功能具有重要意义。目前，已经建立了皮肤表面神经酰胺等特定鞘脂类物质的高通砥分析方法，但对皮肤鞘脂的全面分析尚未见报道.文章亮点采用UP1.CQTOFMS技术建立女性皮肤表面轴脂全面分析的新方法，并应用于吉、中年女性皮肤鞘脂的相对含量比较：探究鞘脂在皮肤衰老过程中的可能生理机制：为皮肤鞘脂的全面分析提供新方怯，也对皮肤衰老机制的探索及相关抗衰老护肤品的研发提供理论依据.内容介绍样品前处理方法的优化实聆参考文献中曲处理方法对皮肤样品中的鞘脂酋处理方法进行优化-考察了不同提取溶剂体根（取文献方法提取溶剂体根的1心、1/2、1、2、4倍）以及不同取样次数（2、3、4,5次）的影响.皮肤表面鞘脂成分的鉴定根据稻脂的结构特征，通过一级分子式匹配和:级旗港结构解析，在女性前臂皮肤上一共鉴定得允IoM、鞘脂.其中包括16个鞘氮醉'Sa：.IX个双氢鞘笈醉（So）.65个神经械胺（Cer）、8个I-瞬酸神I经酰胺（CerP）和1个除饿物脂（PN-Cer）t对不同表皮层数的脂质进行检测时发现.鞘靖腑和葡葡世神经酸胺在皮肤表面的含量极低、甚至为零,而本实验在皮肤表面脂的签定时，也未发现这两类物侦.初静碱的鉴定以Sa（d25Q）为例（图1a>,其M+Hf通过依次丢失H2O得到m/z382.4038和m/z364.3934两个特征碎片,在此基础上丢失HCHO产生的M352.3943碎片离子也可辅助证明该新蜕肿结构中含有两个羟基.神经渔胺的鉴定主要基于其鞘城醇竹架产生的特征碎片，以CCrOI7:526:0）为例（图lb）.kh>,卜j",a0"4<qwx*<ni<>4rMMaHl>>国I代表性皮肤表HhffiSI的MSNS图谓FiZlMS'MSspectra“rcrcVnuilixr<ki11surtacc*phing<)lipkh元变量统计分析在青、中年组女性前臂鞘脂的比较研究中,通过OP1.S.DA分析（图2a）得到各个特征离子的VlPtfi,再由Studenfs的/检验计兑各特征离子丰度在两组间的显著性差异。筛选VIP值1、且P值VOOl的特征离子作为差异性代谢物，并绘制了差异性鞘脂在两组中相时含量的热图.由图3可知，者、中年组之间共找出了43种差异性鞘脂.与青年组相比,中年组中So、Cer.CerP和部分Sa的含量升高，而部分Sa含量呈下降趋势“陆后，采用PCA方法来验证所筛选的差异性鞘脂对两组区分的效果.图2b中每个点代表一个样本.可发现所有样本均处于置信区域内，青、中年组之间显示出明显的分离情形，PCl和PC2的贡献率分别占79.1%和80%,对于组间分尚具有较面的贡献率.2多元变址统计分析结果F2ResultsofmultivariateXUtiMicaIUnaIy亦0/240)lM=CKOH)K25：0/26。<>K<2Ol3O-l)EHBa34：0(0H)OKU8324：6OW<h324Z叫)Ot«22："27：6maaOfOfNH9：06：6OefWlJMaOdMl6<v2SOrWHBQh0»CwIMItc/24qOrM20(V24：sH3百年炮(Y)与中年期(M的整异性粘照相对含联络图F'3Hcutmupbasedonthenormalizedruwabundanceofdifferentialsphingolipidsofy<Hg(Y)andmiddle-agedgroup(M)4结论本文建立了一种基于UP1.C-Q-TOF-MS的鞘脂全面分析方法，对不同年龄女性Ilff咫皮肤表面的108个鞘脂进行了结构签定，并对不同种类代表性鞘相的碎裂机理进行了细致讨论.符该方法应用于育.中年组女性皮肤崂脂的检测，结合多元变统it分析，发现两组鞘脂变化呈明显分趾趋势,并筛选掰到43个差异性鞘脂，上述研究为皮肤鞘淅的全面分析提供了新的技术手段，由于本次实验人数有限，后续招招募更多志图者、设计更完善的队列进行相关深入研究。