玉米抗普通锈病鉴定技术规程（征求.docx

ICSDB62甘肃省地方标准DB62T-××-2022玉米抗普通锈病鉴定技术规程（征求意见稿）XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施甘肃省市场监督管理局发布前言II1 .范围12 .规范性引用文件13 .术语与定义14 .自然病圃鉴定25 .诱发病圃鉴定36 .抗性评价37 .鉴定报告4附录A（资料性附录）玉米普通锈病症状与病原形态特征5附录B（资料性附录）玉米抗普通锈病鉴定记载表、评价表6,Z1刖百本文件按GB/TL1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则规定起草。本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。本文件由甘肃省粮油作物栽培标准化技术委员会归口。本文件主要起草单位：河西学院本文件参与起草单位：泉州师范学院、甘肃前进生物科技发展有限公司、临泽县农业技术推广中心、酒泉市通盈种苗有限公司、甘肃德光农业有限公司本文件主要起草人：雷玉明、雷鑫、郑天翔、马金、刘晓刚、王生兰、张琪、杨国振、赵文明、刘晓燕本文件由河西学院负责解释。各单位或个人在执行本文件过程中如发现需要修改和补充之处，请随时将意见和建议反馈至玉米顶腐病检验鉴定技术规程编制组（地址：甘肃省张掖市甘州区北环路846号河西学院，邮政编码：734000,E-mail:Zyymlei,联系电话：13993672655）玉米抗普通锈病鉴定技术规程1 .范围本文件规定了玉米品种普通锈病抗性鉴定技术和抗病性评价标准。本文件适用于玉米普通锈病自然病网鉴定、诱发病网鉴定、田间管理、接种体制备、按种、病情调查、抗性评价及鉴定报告的技术要求及甘肃省种植玉米品种、种质资源抗性鉴定和评价。2 .规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括修改单)适用于本标准。NY/T1209农作物品种试验与信息化技术规程玉米NY/T1276农药安全使用规范总则3 .术语与定义以下术语与定义适用于本文件。1.1 1玉米普通锈病一种由玉米柄锈菌引起气流传播的玉米真菌性叶部病害。1.2玉米柄锈菌属担子菌亚门、冬抱纲、锈菌目、柄锈菌科、柄锈菌属的一种专性寄生真菌。1.3发病率玉米普通锈病发病率为受侵染叶片数占调查总叶片数的百分率表示，用以表示发病的普遍程度。采用公式(1)计算。/(%)=WMXloo(1)式中：/发病率；d发病叶片数；M调查总叶片数。1.4严重度采用分级法表示，以叶片抱子堆的数量和叶片上病斑面积占叶面积的百分比表示发病级别，由轻到重划分为几个级别，每个级别赋予一定代表值，以表示受害玉米叶片的严重程度。1级：代表值0,叶片上无病斑；2级:代表值1,病斑占叶面积5%以下;3级：代表值2,-4级：代表值3,5级：代表值5,-6级：代表值6,7级:代表值7,3.5病情指数病斑占叶面积的5.1%10%以下；病斑占叶面积的10.1%25%；病斑占叶面积的25.1%40%；病斑占叶面积的40.1%65%；病斑占叶面积的65.1%以上，叶片枯死。是以玉米叶片普通锈病的发病率和叶片受侵染的严重程度数值化的综合表示指标,用以衡量玉米群体受普通锈病的危害程度，采用公式(2)计算。DI=(Xi×Si)M×Sm×100(2)式中：DI病情指数；W-为累加符号，从0级病级数开始累加；XL第i病级数的发病叶片数；SL第i病级数的严重度代表值；调查总叶片数；Ss-为最高病级数的代表值。3.6抗性评价根据采用的技术标准判别玉米对普通锈病的反应程度和抵抗水平的描述。4.自然病圃鉴定1. 1自然病圃设计选择地势平坦，土壤肥力均匀、土质疏松，排灌方便，长期种植玉米，普通锈病常年发生严重地块为病圃。4. 3鉴定材料鉴定材料随机排列或顺序排列，鉴定小区行长500Cm600cm,行距60cm,株距25cm,2行区，每行保苗25株30株，每5个材料种植2行感病诱发品种，每50份鉴定材料设1组已知对照品种，不足50份按50份计，3次重复，鉴定小区四周设4行的感病诱发品种作保护行。5. 4田间管理田间农事操作符合NYfrI209-2020规定，整个生育期间来进行病害防治，虫、草防治符合NY/T1276-2007规定。6. 5病情调查在玉米乳熟-蜡熟期进行调查1次，同一批次应在同一天完成。4. 6调查方法鉴定材料每个重复随机调查10株，每株玉米果穗上方和下方各3片叶，按3.4中的要求进行调查，将调查结果记载附表B.1。5. 7病情指数计算依据调查结果，按照3.5中有要求计算病情指数。5.诱发病圃鉴定5.1 诱发病圃设置选择四周相对封闭，距离玉米种植带90mIOonb土壤肥沃，灌溉条件良好，具有一定面积地块作为诱发病圃。5. 2鉴定材料鉴定材料种植同4.3要求。5. 3接种体制备5. 3.1菌株分离鉴定在玉米乳熟灌浆期，按照附录A.1规定采集新鲜的典型普通锈病病叶，用刀片刮取夏狗子堆，置于干净的培养皿中，收集分离物。分离物按照附录A.2规定鉴定确认后，单范纯化，进行致病性测定，获得菌株。将收集的菌株装入9cmX17cm玻璃纸袋，储存在-20冰箱里保存，备用。5.3.2菌悬液配制将保存菌株用无菌水稀释，每500ml无菌水中加入0.5%TWeen吐温）1ml,搅动15min抱子完全悬浮，然后用无菌水稀释至2.5x105抱子/ml菌悬液。5. 4接种6. 4.1接种时间鉴定玉米材料展叶IO12叶期。5. 4.3接种方法用一个带刻度的IOnII注射器吸取抱子悬浮液，从鉴定玉米材料心叶与其下的展开叶叶鞘相接处以下ICm处注射，或者注射到喇叭口，接种量控制56ml株。要求针头宜向下倾斜刺入，不宜刺穿，以心叶处冒出水珠为准。5.5田间管理鉴定接种前后应先进行田间灌溉或雨后进行接种，接种后若持续干旱，应及时进行田间浇灌,其他管理与4.4相同。5. 6病情调查6. 6.1调查时间接种后1416d进行抗性调查。7. 6.2调查方法调查被接种部位的上下各3片叶，调查株数和调查内容与4.6相同，调查结果记载附表B.Io8. 6.3病情指数计算病情指数计算同4.7相同。6抗性评价6.1 有效性判别当感病对照品种的病情级别达到6级时，该批次鉴定有效。9. 2抗性评价标准依据鉴定材料的病情指数确定其抗病水平，采用分级法表示，划分标准见表1。表1玉米对普通锈病的评价分级抗性级别病情指数（DI）抗性评价00免疫I10<DIl()局抗HR310<DI30抗病R530<DI50中抗MR750<DI70感病S9DI>70高感HS6. 3综合评价以3次重复的病情指数平均值为最终鉴定结果，同一鉴定品种两年鉴定抗性类别不同的,则需要做第三次抗性鉴定，对鉴定材料作出综合评价，综合评价表见附表B.2。7鉴定报告6.1 鉴定报告一般以单个品种单独出具。如集中批量送样的，也可以多个品种出一份报告。7. 2鉴定报告要盖鉴定单位公章，要有鉴定人和复核人签字。7.3鉴定报告见附表B.3。附录：附录A（规范性附录）玉米普通锈病症状与病原形态特征A.1症状玉米普通锈病以侵染玉米叶片为主，其次危害叶鞘、苞叶。发病初期叶片主脉两侧产生乳白色至淡黄色针尖状病斑，逐渐扩展形成圆形至长椭圆形、黄褐色隆起病斑，隆起叶片表皮组织破裂散出铁锈状夏抱子。发病后期叶片正面、背面中脉处或近叶鞘处产生椭圆形、黑色冬抱子堆。A.2学名和形态描述A. 2.1学名玉米柄锈菌PucciniaSOrghiSchw.A. 2.2形态特征玉米柄锈菌的夏抱子堆黄褐色，椭圆形至长椭圆形，大小LOmmo夏抱子圆形至卵开多，淡褐色至金黄褐色，大小约为2233mX2028m,细胞壁表面布满短且稠密的细刺，赤道附近有4个发芽孔。玉米柄锈菌的冬加子堆黑色，椭圆形或矩形，大小1.02.0m明冬他子长椭圆形或棍棒形，栗褐色，双细胞，隔膜处略溢缩，冬他子表面光滑，大小为1623mX2954m,冬抱子若生在冬袍子柄顶端或歪生，具长柄，黄褐色或淡黄色，柄长80100m0附录B（规范性附录）玉米抗It通锈病鉴定记载表、评价表B. 1玉米抗普通锈病田间调查记载表玉米抗普通锈病田间调查记载表见表B.1表BJ玉米抗普通锈病田间记载记载表鉴定方式：生育期：播种时间：年月日纬度：海拔：m鉴定地点：接种时间：接种部位：调查时间：年月日品种编号重复品种名称品种来源调查总叶片数各级病情级别数最高病情级别O1234567IIIIII鉴定人：年月日复核人：年月日8. 2玉米抗普通锈病综合评价表玉米抗普通锈病综合评价表见表B.2表B.2玉米抗普通锈病综合评价表品种编号品种名称病情指数平均病情指数综合抗性级别综合抗性评价IIIIIIB. 3玉米抗普通锈病鉴定报告玉米抗普通锈病鉴定报告表见表B.3表B.3玉米抗普通锈病鉴定报告表作物种类品种（系）名称鉴定项目：鉴定结果：鉴定结论：鉴定单位（盖章）年月日鉴定人（签字）：年月日复核人（签字）：年月日玉米抗普通锈病鉴定技术规程地方标准编制说明一、工作简况（一）任务来源2019年12月25日，由河西学院申请制定地方标准的立项,根据甘肃省粮食与栽培作物标准委员会推荐的地方标准制订，甘肃省市场监督管理局批准第4批甘肃省地方标准制定计划要求，制订编号：2019-T-100,制订名称：玉米抗普通锈病鉴定技术规程。（二）起草单位及参与人员主要起草单位：河西学院参与起草单位：泉州师范学院、甘肃前进生物科技发展有限公司、临泽县农业技术推广中心、酒泉通盈种苗有限公司、甘肃德光农业有限公司主要起草人：雷玉明、雷鑫、郑天翔、马金、刘晓刚、王生兰、张琪、杨国振、赵文明、刘晓燕二、制定标准的必要性和意义（一）玉米普通锈病的发生现状玉米普通锈病是由玉米柄锈菌PucciniasorghiSchw引起,分布于全世界各玉米主产区，国外1896年首次报道，中国则是19371939年戴芳澜、王云章等在陕西、贵州、西康等地首次报道了该病。1960年以前中国陕西、贵州、四川、广西、云南、台湾、甘肃、江苏、山东、河北等报道玉米锈病发生记载。到上世纪90年代，吉林省报道发生面积达13.4万h湖北省邮县发生面积2000hm2,山东泰安大流行病叶率一般90%以上，大部分品种病叶率达100%,一般田块造成减产1020%,有的自交系近乎绝产，严重影响玉米后期子粒灌浆而减产。但是近些年来，由于耕作制度的改革、品种更换、气候因素变化等原因，加上甘肃河西走廊成为全国最大玉米制种基地，大量玉米亲本组合北种南繁，普通锈病和南方锈病混合发生，河西走廊玉米锈病的发生变的较为复杂，且危害越来越重,成为制种玉米田主要病害。据报道，甘肃省玉米普通锈病普遍严重发生，病株率达81.6%。张掖市甘州区玉米制种田普通锈病平均病株率达97.4%,直接造成玉米质量下降、产量降低，已对玉米生产构成严重的威胁，成为目前制种玉米重要病害。目前，国内对玉米锈病的为害程度、病原菌生物学、病害流行规律、抗病机制及抗病品种改良等方面进行了研究。明确了玉米全生育期均能感病，但同一玉米品种不同生育期对玉米锈病的抵抗能力不同，玉米植株在生育后期对病菌的侵染抵抗能力要明显强于前期，一般老叶抗病性强于新叶。在接种条件下玉米苗期和孕穗期感病最重，苗期到乳熟期接种发病率可达98%100%;在自然发病条件下，玉米锈病病菌侵染期发生在灌浆期之前，以孕穗期为主，孕穗末期和齐穗期是2个比较突出的病情发展高峰。表明不同玉米品种对锈病的抗性有明显差异。中国在抗锈病鉴定研究方面已做了较多的工作，主要通过玉米品种进行田间自然诱发感病鉴定，目前推广种植的品种中抗性材料相对较少。因此，抗锈病自交系材料的鉴定与收集将为培育抗锈病玉米杂交种和进行遗传研究重要途径。然而，由于玉米品种、环境条件的差异，各地玉米抗锈表现存在差异，给玉米育种工作者、科研部门、制种企业、植物保护部门带来抗锈材料鉴定因难，面对目前全国最大的玉米制种基地和复杂的玉米亲本材料，在玉米抗锈鉴定中缺少统一鉴定技术标准，为解决此问题特制定该标准。（二）标准制定的目的L提供统一抗性鉴定技术标准河西走廊作为全国最大的玉米制种基地，每年都有近千份玉米组合在此繁育种子，亲本材料丰富，但是玉米锈病的发病率呈逐年上升，个别亲本组合发病率100%,导致杂交种发病严重。因此，选择抗锈材料是提高抗病性的最有效途径，但由于抗玉米普通锈病材料选择方法以自然选择为主，各地标准不统一，获得的抗锈种质资源相对较少，为了充分发挥种子生产基地亲本材料丰富优势，需要在统一方法、标准前提下开展抗锈研究工作，特制定适宜本地的抗锈病鉴定技术规程。2 .提供玉米品种资源对锈病抗性的准确评价通过对玉米品种资源抗锈病组份测定和抗性评价，目的在，于掌握玉米品种资源对锈菌的抗侵染能力、抗病菌产泡能力、抗锈抱子堆扩展能力对锈菌的各生长阶段有进一步的了解，为抗锈病的玉米种质资源提供科学的理论依据。3 .丰富抗玉米锈病种质资源，选育抗锈病的杂交种抗病材料筛选是玉米抗病育种的重要基础，从大量的材料中鉴定收集抗锈性种质资源，有助于加快抗锈病玉米新品种选育。种植抗病品种是玉米锈病防治最经济有效的方法。（三）标准制定的意义1 .为种子管理执法部门对种质资源管理、种子质量管理提供规范性文件在种子管理部门对玉米种质存在抗锈病的真实性判断、种子携带玉米锈病菌检测、玉米种子繁育过程中因锈病发生导致各种矛盾纠纷等提供规范依据。2 .为植保部门、种子生产企业对玉米锈病预测预报及防控提供规范要求玉米亲本材料的抗锈鉴定标准作为植保部门进行种子检疫、田间检疫、重要病害预测预报情报的重要依据,标准增强种子生产企业预测玉米锈病能力和提高了企业对玉米锈病防治能力，对玉米制种子生产具大的社会、经济、生态效益。3 .为政府编制玉米种子生产基地发展规划，评估玉米种子基地及种子质量和检验玉米种子、玉米制种的种植规划提供重要依据。三、编制的原则和依据(一)原则本标准的编制依据中华人民共和国标准法和地方标准管理办法的规定，按照GB“Ll-2020标准的结构进行编写。(二)依据L制订依据玉米普通锈病症状特征、病原特性、田间发生规律进行编写。4 .制订检验、鉴定玉米普通锈病技术参照植病研究法执行。5 .该标准是本项目组结合承担的2013年甘肃省财政厅、甘肃省农牧厅下达甘肃省农业科技创新项目(GNCX-2013-10)“制种玉米病害综合治理技术集成与示范推广”的研究成果，承担甘肃省产业支撑计划项目(2021CYZC-53)“丝路寒旱区青贮玉米'河农1号'新品种产业化关键技术研究与示范推广“，同时参考国内对玉米普通锈病的相关研究进展，制定的甘肃省玉米抗普通锈病鉴定技术规程。6 .建议将本标准作为推荐性地方标准批准发布，用于指导和规范我省玉米普通锈病检验检疫、抗病育种及其鉴定。四、主要起草过程(一)调查研究任务下达后，起草单位组织主要起草人员，对河西走廊玉米普通锈病原菌检验、田间鉴定参考依据进行了调查研究，对种子管理部门、植物保护部门对玉米普通锈病及其检验检疫科学依据咨询，对种子生产企业、农户在对玉米普通锈病的诊断中存在问题、遇到困难进行实地调查。起草人员收集参考相关玉米病虫害标准文本4个。目前相关玉米病虫鉴定技术规程仅见几种行业标准，如玉米抗病虫性鉴定技术规范，第1部分：玉米抗大斑病鉴定技术规范(NY/T1248.1-2006),第2部分：玉米抗小斑病鉴定技术规程(NY/T1248.2-2006),第3部分：玉米抗丝黑穗病鉴定技术规程(NY/T1248.3-2006),第4部分：玉米抗矮花叶病鉴定技术规程(NY/T1248.4-2006)o参考文献5篇，1部著作。经整理资料，编制标准草稿，起草小组讨论后形成征求意见稿，向20家单位、企业发出征求意见，收到20份反馈意见报告。起草小组对征求意见认真进行讨论，对征求意见稿进行修改，形成送审稿。(二)制订主要技术内容1 .范围主要规定了本标准的适用区域。2 .规范性引用文件目前尚未查阅到相关普通锈病行业标准和地方标准，有关田间管理引用文件NY/T1209-2020农作物品种试验与信息化技术规程玉米，NY/T1276-2007农药安全使用规范总则。3 .术语与定义规定了以下术语与定义适用于本标准，如玉米普通锈病、玉米柄锈菌、发病率、严重度、病情指数、抗性评价等。4 .自然病圃鉴定主要涉及自然病圃设计、鉴定材料、田间管理、病情调查、病情指数计算等。5 .诱发病圃鉴定主要规定了诱发病圃设置、鉴定材料，接种体制备、接种、田间管理、病情调查、病情指数计算等。6 .抗性评价规定了玉米普通锈病病的有效性判定、抗性评价分级、综合评价等内容要求。7 .病情调查主要规定了调查时间、调查方法、病情分级、普遍率计算、病情指数计算等内容。8 .鉴定报告规定了抗性评价出具的具体要求。9 .附录主要涉及附录A为玉米普通锈病症状与病原形态特征，附录B玉米抗普通锈病鉴定记载表、评价表。五、试验验证内容与过程一是玉米普通锈病与南方锈病田间症状观察与描述。由于近几年来，甘肃省玉米制种田普通锈病与南方锈病混合发生，给玉米抗性鉴定带来了一定干拢。通过两种病害危害情况、发生时期、叶面夏抱子及冬泡子堆的大小、颜色变化、病斑形状大小、表皮破裂程度等方面进行比较，寻找普通锈病与南方锈病在田间症状区别，为自然条件下抗性鉴定奠定基础。二是玉米普通锈病病原鉴定，为人工接种抗性鉴定提供准确的菌种。通过对酒泉、张掖、武威等玉米制种田锈病进行大面积的田间调查，在夏季，从玉米病叶采集夏泡子堆带回实验室，通过显微镜检验观察，观察夏泡子形态、颜色、大小；秋季，定点的从玉米病叶采集冬泡子，观察冬抱子形态、颜色、大小。通过测量抱子堆大小、泡子大小，结合田间症状确定玉米普通锈菌，收集普通锈菌夏泡子，并进行接种试验，获取发病株，观察症状与田间症状是否一致，病原形态是否与接种前一致，确定后获取玉米普通锈菌的菌种并保存，为人工接种做好充分准备。三是玉米普通锈菌生物学特性测定，为人工接种抗性鉴定提供环境控制条件指标。通过不同温度、湿度、pH、碳源、氮源、光照夏抱子萌发率，测定适宜环境条件，用于人工接种后温湿度、光照、营养物质管理，为提高人工接种效率奠定基础。四是自然病圃抗性鉴定方法验证。选择常年发生严重地块或区域为病圃，鉴定材料随机排列或顺序排列，鉴定小区行长500600cm,行距60cm,株距25cm,2行区，每行保苗2530株，每5个材料种植2行感病诱发品种，每50份鉴定材料设1组已知对照品种，田间管理按照NY/T1209-2020.NY/T1276-2007规定进行操作，以叶片调查为主，计算病叶率、病株率、病情指数等指标，作为抗性评价的关键依据，田间验证准确性高。五是人工诱发抗性鉴定方法的验证。选择四周相对封闭地块作为诱发病圃，按照自然条件下抗性鉴定小区设计及管理种植，采用注射器吸取泡子悬浮液人工接种，在鉴定玉米材料展叶1012叶期接种，调查株数和调查内容、计算病叶率、病株率、病情指数与自然条件下相同。通过使用，方法晚于操作,抗性鉴定验证准确。六是玉米普通锈病的抗性评价及鉴定报告。通过实际应用，鉴定材料的病情指数分6级法确定其抗病水平，以3次重复的病情指数平均值为最终鉴定结果，鉴定综合评价指标准确，鉴定结果与实际情况相符。六、重大意见分歧的处理结果先后向22家事业单位、企业发出征求意见，收到21份反馈意见报告。其中，种子生产企业5家，行业主管部门8家，事业单位8家。共计征求意见28条，并按照共性意见进行了意见汇总（见意见汇总表），起草小组一一进行讨论，对其中的28意见，起草小组均采纳，并对其中的28条意见进行修改。玉米抗普通锈病鉴定技术规程起草小组二O二二年五月十八日