人抗斑疹伤寒抗体antityphusAbELISA试剂盒.docx

人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)Elisa试剂盒实轴原理本试剂盒应用双抗体央心法测定样品指标水平。样品包括血清血浆尿液脑脊液细胞固体组织等,用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入样品.再与HRP标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物.经过彻底洗涤后加底物TMB显色；TMB在HRP峰的傕化下转化成蓝色.并在酸的作用下转化成最终的黄色,，颜色的深浅和样品浓度呈正相关。用彼标仪在45Onm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中浓度，或者与CUToFF值相比较，从而判定标本阴阳性。人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)E1isa试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶2的标试剂6ml×1瓶3酶标包被板12孔x8条4样品稀释液6ml×l瓶5显色剂A液6ml×1瓶6显色剂8液6mlxl瓶7终止液6ml×1瓶8标准品0.5mlX1瓶9标准品稀释液1.5ml×l瓶10封板膜2张样品收集、处理及保存方法1.血清使用不含热原和内击索的试管.操作过程中避免任何细胞剌激.收集血液后.3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速，拉S地分离。2,血浆：EDTA、柠椽酸於或肝素抗凝：3000转禹心30分钟取上清。3 .细胞上清液：3000转离心10分钟去除颍粒和聚合物“4 .组织匀浆：将组织加入适房生理盐水掖碎。3000转亲心10分钟取上消。5 .保存：如果样本收集后不及时检测.请按一次用量分装,冻存于-20C。，避免反复冻融，在空温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。样本要求1 .样本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试脍,可将标本放于-20b保存,但应避免反复冻融2 .不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物旃的(HRP)活性，人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)Elisa试剂盒掾作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照防货说明书中图表在小试管中进行稀释，2 .加祥分别设空白孔(空白对球孔不加样品及焦标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在陶标包被板上标准品准确加样50l,待测样品孔中先加样品稀繇液40l.然后再加待测样品10样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部.尽不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3 .温育用封板膜封板后置37C。温育30分钟：4 .配液：将30倍浓缩洗漆液用蒸谯水30倍稀释后备用5洗涤：，送掉封板膜弃去液体,甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去.如此重复5次.拍干。6 .加奥每孔加入防标试剂50l.空白孔除外。7 .温育：操作同3。8 .洗涤：操作同5。9 .显色：每孔先加入显色剂A50W.再加入显色剂B5Ol.轻轻震荡混匀，37C。避光显色10分钟.10 .终止：每孔加终止液50l.终止反应（此时蓝色立转黄色）。I1.测定：以空白孔调零，45Onnl波长依序测各孔的吸光度（OD伯）。测定应在加终止液后15分钟以内进行.计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度：再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式.将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数.即为样Ia的实际浓度，standardsconcentration(X)人抗斑疹伤寒抗体（anti-typhus-Ab）E1isa试剂盒注意事项1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平街15-30分钟后方可使用.陶标包被板开封后如未用完，板条应袋入密封袋中保存。2.液洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶.洗涤时不影响结果,3各步加样均应使用加样器,并纥常校对其准确性.以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数0多.推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔，如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD伯）请先用样品稀探液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）.5封板稹只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物清避光保存。7严格按服说明书的操作进行，试脸结果列定必须以酶标仪读数为准8所有样品.洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理.9本试剂不同批号组分不得混用。10 .保存2-8C%11 .有效期：6个月