sarscov spike蛋白受体结合结构域在哺乳动物细胞中的表达 纯化及功能研究.docx

sarscovspike蛋白受体结合结构域在哺乳动物细胞中的表达纯化及功能探讨北京协和医学院中国医学科学院博士论文图表书目图1将TEV筋切位点克隆到Peakl3CD51.humanIgG后酶切鉴定37图2将TEV醇切位点插入Peakl3CDS1.hmanIgG后测序的结果37图3SAf1.s.CoVS1190重组质粒的酶切鉴定38图4WesternBlotting检测重组质粒瞬时表达并用TEV酶切验39图5Westernblotting检测SI190-TEV-Fc恒定表达细胞株柏图6E1.ISA检测比较恒定表达细胞株中重组蛋白的表达量41图7S1190.TEV-Fc融合蛋白的纯化42图8SI190-TEV-Fc蛋白提纯后经TEV前切检测43图9S1190能够介导受体ACE2内吞图10RBD密码子优化前后的编码序列及氨基酸序列55图11RBD的PCR结果56图12RBD的双附切检测57图13Westernblotting检测重组RBD-Fc在细胞中的表达弱图14RBD.Fc恒定表达细胞株的检测58图15用E1.lSA检测比较各恒定表达细胞株上清中重组RBD.Fc蛋白的产量59图16RBD.Fc蛋白的纯化碑图17RBD.Fc与hACE2在细胞内结合的口试验结果61图18RBD.Fc/Fc流式细胞结合试验62图19流式细胞术检测细胞内吞试验图20荧光显微镜视察RBD引发的受体内吞65图21激光共聚焦扫描显微镜视察RBD.Fe与CE2.GFP分子共定位硒图22受体ACE2的内吞是KBD依靠的67图23KBD转位到EEAI阳性的早胞内体.碣图24RBD.Fc蛋白在HEK293细胞中被糖基化69图25去糖基化的RBD.Fc和糖基化的RBD.Fc一样能够诱导CE2内吞70图26RBD.Fc去啾基化不能消退ACE2内吞71图27.WesternBlotting检测恒定表达细胞株上清中Myostatin.Fc的表达船表1.统计学分析RBD.Fc或Fc处理细胞后的改变的差异66表2.统计学分析RBD-Fc,RBD-FC+PNGaseF或dg-RBD-Fe处理细胞后受体改变的差异715北京协和医学院中国医学科学院博I：论文英文略语表缩略语英文名中文名AmpAmpici11in氮,节青霉素EDTAEthyencdiamineTetraceticAcidg_,一胺四乙酸FACSFluorescenceActivatedCellSorter荧光激活细胞分选仪FBSFetalBovineSerum胎牛血清bpBasePair碱基对BSBovineSerumAlbumin牛血清白蛋白CIAPCalfIntestinalAlkalinePhosphatase牛小肠碱性磷酸酶DMEMDulbeccoSModifiedEagleMediumDMEM培育基DMSODimethylSulfoxide二甲基亚飒dNTPDcoxy曲OnUCIeOSidCTriphosphate脱氧核昔三磷酸DTTDithio.