基于快速响应的红色 ONOO荧光探针及其细胞成像.docx

背景介绍过氧亚硝酸i½(ONOO-)作为一种揖要的生物活性氧(ROS),由体内一氧化缸和超氧化物的扩散控制反应产生。正常浓度范围的ONOO-对细胞功能产生积极影响，如信号转导、氧化还原稳态利免疫反应。截至目前为止，有许多分析方法用于ONOO-检测，如紫外-可见光谱、电子自旋共振、电化学分析、免疫组织化学、和荧光法。相比之卜，荧光法具有非入侵、选择性高、响应快速、超时空成像等优势，被认为是一种非常有效的方法。本文亮点1合成了一种红色ONoo-荧光探针HBSCN.展现出明显的荧光增强信号：2该探针能班在生理PH下快速地检测ONOO-,且对ONOo具有较大的Stokes位移和较高的选择性；3HBSCN能弱用于活细府内ONOcr成像，具有潜在的生物应用价值.内容介绍I实验部分2结果与讨论2.1 光谱表征首先，借助紫外吸收光谱考察HBSCN对ONOO识别能力.如图1所示,在PBS缓冲溶液(V(DMF)：V(HjO)=I：9,1()mmol1.,PH7.4)中，HBSCN自身在425nm处有一个明显的紫外吸收峰。CaMKM、三IOmtl1.<*g.三JO114.图1HBSCN、过仅亚同酸K反应前后的If外光调图KlIAai*M3Cptiontpertn<HBSCMOrrandafterrra<,tinwith(>><)O2.2 反应机理通常，缺电子双键在强氧化剂的作用下容易发生断裂，生成酸或者竣酸化合物.通过上述的实验可以看出，探针HBSCN加入ONOo后，其紫外光谱和荧光光谱均发生了明显的变化，溶液颜色也相应的改变，推测HBSCN中C=C犍在ONOO作用下可能发生了裂解.2.3 PH影响PH值是一个重要的实验参数.为探讨HBSCN是否能够在生物体中实现对ONoo的检测，在不同的PH溶液中，我们测试了HBSCN对ONOo一响应情况.如图5所示，在pH411之间，HBSCN自身的荧光强度几乎不变，说明HBSCN在不同的pH值下具有较好的稳定性.rBW-IOw20三U.PBSPH值对HBSCN检测过仪业硝酸盐的影峋F.5pHr11r<tmitheMrclion</ONOOMinXHBSCN2.4 反应时间考察HBSCN对ONOO的响应时间是另外一个重要的实睑参数.为探讨HBSCN对0、OO-检测的动力学，我们测试了HBSCN在不加和加入ONOO后荧光强度变化与时间的关系，如图6所示，IIBSCN本身的荧光强度不随时间的变化而变化.l*o=IO=20*4l.图6HlZ：N检到过乳胡硝酸盘稳时间的变化关系Hg.6TimrHTrctMOCllhrUrcticticlOMM)UMivIIBSCN3结论基于不饱和C=C双键氧化断裂反应，我们成功构建了一种简单有效的红色ONoo荧光探针HBSCNe在ONOO存在下，探针的荧光显剧增强，其荧光强度与0-20mo1.的ONOO表现出良好的线性关系，溶液颜色由无色变成红色，可实现比色荧光检测.