anxa10对人原发性肝癌细胞株hepg2中的vegfa akt3 pik3ca基因表达影响的研究.docx

anxal对人原发性肝癌细胞株heg2中的vegfaakt3pik3ca基因表达影响的探讨摘要目的：1、构建携带增加绿色荧光蛋白(EGP)的人膜联蛋白AlO基因(ANXAlO)过表达慢病毒，然后转染人肝癌细胞株HePG2。2、采纳转录组测序的方法检测AXA10过表达慢病毒对HepG2基因表达谱所产生的影响，初步阐明ANXAIo对HepG2生物学行为的影响、11J能涉及的基因及相关的信号通路，为原发性肝癌形成中的NX10作用的深化探讨奠定基础。方法：构建携带增加绿色荧光蛋白(EGFP)的人膜联蛋白AlO基因(ANXAlO)过表达慢病毒1.V-ANXAlO,体外培育的HepG2分为三组：试验组、空载体对照组和空白比照组，各组分别转染1.V-ANKAIO、慢病毒空载体以及等量的Polybrene(病毒及空载体以MOI=IO浓度转染),转染72小时后运用荧光倒置显微镜视察增加绿色荧光蛋白(EGFP)的表达状况，从而来确定ANXAlO的转染效率，转染后96小时和120小时分别提取三组细胞的RNA行转录组测序比较三组细胞相同时间点及同组细胞不同时间点基因表达谱的差异，并采纳qPCR验证部分差异表达基因。结果：KANXAlO过衣达慢病毒能影响HepG2的基因表达谱。通过对转录组信息的分析，发觉在转染后96小时的空白比照组与试验组比较发生显著转录差异的基因有69个，其中26个基因上调，43个基因下调；空载体比照组与试验组相比发生显著转录差异的基因有53个，其中25个基因上调，28个基因下调；空载体比照组与空白比照组比较发生显著转录差异的基因有12个，其中8个基因上调，4个基因下调。而在转染后120小时的空白比照组与试验组的比较中发生显著转录差异的基因有742个，其中110个基因上调，632个基因下调：空载体比照组与试验组的比较中发生显著转录差异的基因有313个，其中168个基因上调，145个基因下调：空载体比照组与空白比照组比较发生显著转录差异的基因有36个，其中24个基因上调，12个基因下调。进一步探讨发觉在转染96小时及120小时，试验组与空载体比照组及空白比照组比较VEGFA、AKT3、IIPIK3CA的表达均是下调的，而空载体比照组与空白比照组比较无上述改变。2、采纳荧光定量PCR技术验证，其结果表明，两个时间点的试验组与空载体比照组及空白比照组三组比较，试验组中VEGR.KT3.PIK3CAmRN表达明显下调,差异有统计学意义(Plt;0.05),但空载体比照组与空白比照组相比较无明显差异(Pg3005),与转录组测序的分析结果吻合，从而证明VEGF.AKT3、PIK3CA在转染过表达慢病毒ANX10的HepG2细胞和转染空载慢病毒的HepG2细胞及HcpG2细胞的表达的差异性。结论:1、ANXAiO过表达对HepG2基因表达谱有影响。2、NX10.