GB_T 43722.1-2024 皮革 抗菌性能的测定 第1部分：膜接触法.docx

ICS59.140.30CeSY46GB中华人民共和国国家标准®/T43722.12024皮革抗菌性能的测定第1部分：膜接触法1.eatherDeterminationofantimicrobialactivity-partl:Filmcontactmethod2024-03-15发布2024-1（三）I实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会本文件按照GBT112020标掂化工作导则第IfS分I标准化文件的结构和起草规则的规定起草，本文件是GB/T43722皮革抗衡性能的测定的第1郃分.GB/T43722已经发布了以下部分：一一第1能分：膜接触法.请注意本文件的某些内容可能涉及专和。本文件的发布机构不承IU识别专利的责任，本文件由中国轻【：业联合会提出.本文件由全国皮革1：业标准化技术委员会（SAC/TC252）归口.本文件起草单位：通标标准技术服务（Jb海）有限公司、浙江通天星集团股份有限公司、大康控股第团有限公司、深圳市北潢（检测技术有限公司、上海应用技术大学、西南交通大学、广东省科学院微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）、天创时尚股份有限公司'广东新庆成实业投资有限公司、江苏型萃先进纤推材料研究所有限公司、期盛化学（中I中有限公司、博富科技股份有限公司、上海市徐汇区疾病预防控制中心、上海润河纳米材料科技有限公司、中国皮革制鞋研究院牙隈公司、中轻险险认证有限公司、中关村汇智抗靖新材料产业技术创新联盟,本文件主要起草人r蒋红、陈健、胡龄.播晓玲、彭如群、徐祥进、刘志勇、嚓武名、傅洋安、便兼明、梁嘉俊、周家良、张瑜、廖宇涛、陶志清、桑军、任可帅、张迎增、朱方、周业华、钱子场谢小保、0取皮革产品作为皮胶原蛋白胡的加工产品，加工过程中使用的原辅料中含外大W的油脂、糠类等成分，是细前、毒81生长的良好营养源,再加上皮革结构的多孔性和极性结构使儿容易吸湿，从而导致其在保存和使用过程容易受到激生物的侵入,不仅在皮革表面形成白色、蓝色，黄色或里色的雨班或色斑，而且还能向革内发展,使皮革的耐磨、限度和弹性等性使静低，严史影响或外观及使用性能.此外，防者人们对于侬防疾病的就双不断坨强,各类抗菌材料和产乱成为人们关注的对象.明示或宣传的.抗菌性能的皮革制品也逐渐成为决定市场比争力的巫要因索之.皮革产品根据其来源、加工过程等分为不同的类型。如根据表面吸水性的差异，可分为表面不吸水皮革和表面吸水性较削的皮革：根据皮革抗菌剂溶出性的不同,可分为非溶出55抗菌皮革和溶出型抗菌皮革等，皮革抗曲性能的测定可以根据皮革种突采用适合的检测方法.GB/T13722旨在为皮革抗菌性能的测定提供依据，拟由四个部分构成,第1部分：膜接触法H的在于确立适用于表面不吸水皮革抗菌性能测定的定成试验方法，一一第2部分：琼脂平扩散法.目的在J确立皮革抗菌性能测定的定性试蛤和评价方法.第3部分I询液吸收法。目的在于确立适用于表面吸水性很强的皮革抗菌性能测定的定匏试验方法.一一第，1部分：振荡法。H的在于痂立其他膜接触法和俏液吸收法不适用的皮革（尤其适用干使刖了非溶出型抗施剂的皮革）抗茴性能测定的定业试腕方法，皮革抗菌性能的测定第1部分：膜接触法示一本文件读及的微生可作人员应果取一切必要的ItmM,免对人员和环域的危IClt应由住过生学靖调且具育实IMS的业人员在具备处覆微生技术条件的实中进行.1MH本文件描述了眼接触法测定皮革抗两性能的定Jft试验方法.本文件适用于不吸水皮革抗阑性能的测定.2提范住W用文件下列文件中的内容通过文中的现苞性l用而构成木文件必不可少的条款,其中，注H期的引用文件.仅该Il期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件.共最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件.QB/T2707皮革物理和机械试验试样的准备和调节3术语和定义下列术语和定义适用于本文件.11抗性antimkrohialactivity采用化学或物理方法杀灭或妨均细偈和f（i长繁殖,以减少其数址以及活性的能力。求源：BST650-2019,3.1,有倏改J3.2对照样controlsample未经抗茴处理、用于验证试股微生物生长条件的样品。4*9通过接种定员微生物至不吸水的皮革试样表曲.用贴股的方法使微生物均匀接皱试样表面.经一定时间培养后,测定试样衣面的活胸数，计用抗1«率，以此衣示试样的抗映性能.5仪«务5.1 恒温培养箱，控温林度为±lt.5.2 冷藏箱,淑度能够保持在2C'10C.5.3 ：缎生物安全柜。5.4 生物光学电做镜.5.5 压力蒸汽灭菌器，温度能保持在(121±2)C,压力能保持在(103±5)kPa,5.6培养W,食径为90mm.5.7 紫阳T.5.8 接种环,4an-5.9 天平，制度为±001g.5.10 PH计.精度为±0.2.5 .11模刀，符令PB/T2707的规定，内壁为(5O±2)mm(5Q±2)rrm的矩形，66.1 除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，试骆用水应为然愉水或去离子水"6.2 氮氯化钠(NaOH)溶液，0.1mW1.,6.3 盐酸(HCl)溶液，0.1md'1.r6.-1瓶化钠(NaCT)溶液，0.85%(桢依分数)。6. 5无水微酸以XlWNazHPO4)。6.6 磷酸二氮钾(KWPO,).6.7 乙醉溶液,7慎(体积分数九1.1 8磷酸媛冲液(PBS),将2.83gNa3IIPO4(6.5)和I.36gKH2PO4(6.6)加入至100om1.蒸阳水中.待完全溶解后,MjNaOH溶液(6.2)或HCI溶液(6.3)悯节PH为77.4.分奘后置于力蒸汽灭阳涔中，(12】±2)C条件下灭崩15min。1.9 洗脱液,采用D/E中和肉涉(Dey-EngleyNeutralizingBMh)作为洗脱液。将5.Og股液白膝、2.5g薛母粉、10.0g他筠糖、1.0g硫代乙解酸钠、6.0g能代破酸咕、2.5g亚能酸气钠、0.02g澳甲酚紫、7.0g卵磷脂、5.Og吐温80,加入至100Om1.蒸储水中.巴于椎形瓶中混合并在沸水浴中充分溶解。然后用NaoH溶液(6.2)或HCl溶液(6.3)调节PH为7.07.2,分装后置于压力蒸汽灭曲器中，(12l±2)4C条件下灭陷15min,1.10 覆盖廉，采用聚乙优酉股，尺寸为(40±2)mmx(4O±2)mm,也可与试样尺寸相适应，厚度为0.05三n-0.IOmno用乙肿溶液67)浸泡10min.再用蒸询水冲洗，自然晾干。也可使FH均质袋切下的膜.1.11 对照样，聚乙烯片材质，厚度10mm,尺寸为(5O±2)mmx(5Oi2mm.与试样尺寸一致.也可使用均桢袋切下的腹，7 4HHI7.1 养肉满培养苔(、B)将5.Og牛肉啬、10.Og蛋白麻和5.Og氯化钠与ICloOm1.蒸场水混合，加热溶解，然后用NaOH溶液(6.2)或HCl溶液(6.3)调节PH为7.。7.2,分装后置于压力蒸汽灭倒器中，(121±2)。条件下灭菌15min.7.2 普养"4W、A)将5.Og牛肉力、10.Clg货白豚、5.0g氯化钠和15.Og琼脂与I(X)Om1.蒸慵水混合，加热溶斛，然后用NaoH溶液(6.2)或HCI溶液(6.3)调节PH为7.0-7.2,分装后置于压力蒸汽灭菌器中，(121±2)条件下灭菌15min.将5.Og马玲养浸粉、20.Og衙明、20.Og琼腑和0.Ig慰荐家与100Qm1.然愉水混合，加热煮沸至完全溶解，然后用NaoH溶液(6.2)或HQ溶液(6.3)调节PH为5.86.2,分装后置于压力蒸汽灭菌器中，(121±2)匕条件下灭菌15min.7.4 平板计IBSPeA)将2.5g酵母粉、5.Og胰蛋白陈、1.Og葡荀糖和15.Og琼脂与KXX)m1.-慵水混合,加热溶解，然后用NaoH溶液(6.2)或HcI溶液(6.3)解节PH为107.2,分奘后置于压力蒸汽灭菌器中.(12l±2)C条件下灭菌15min.8 Mumam试验前种通常至少采用3种.如下所示.革兰氏阳性M：金黄色简与球倒(细笛，ATCC6538或CGMCC1.2465),革兰氏阴性菌：大肠杆菌(细衡，ATCC8739CGMCC1.2463).白色金珠储(真做，ATCC10231或CGMCC2.2086),也可根据客户要求选FH其他曲种，应至少包括细赭和口曲，其中细扁种类至少含有I种革丝氏阳性和1种革兰氏阴性菌种，并在报告中注明试脸曲种及编号.所有曲种均应由国家相应曲神保藏管理中心提供.选用其他菜种时，培养基成分、培养温度和培养方法可根据需要调整。&2对于金黄色徇Q理曲和大肠杆笛，将常种接种于NA(72)斜面上，在(37±D*C下培养18h24h;对于白色念珠身，将曲种接种于PDA(73)斜面上，在(28±1)C下培养24h-48h,然后置于5'CIClC下保存(不应超过I个月)，作为斜面保存苗.9 ma三MM*9.1 瞭液的备用Naa溶液(6.力稀择NB培养基,用于金黄色葡而球菌培养的NB质限分数为1%用于大肠杆苗培养的NB质量分数为0.2%,白色念珠由采用磷酸缓冲液(PBS)配制。用NaOH溶液(6.2)或HCl溶液(6.3)调节PH为7.07.2,分装后置于压力蒸汽灭常港中.(121±2)1C条件下灭曲15min。为便于菌种分散可加入少Iit表面活性剂(如吐温-80等).9.2 mK1t时于金黄色面箱球笛和大肠杆南，将斜面保存倒转接至NA(7.2)平板上，在37±1)C下培养18h-24h,再连续转接I次后(在5代以内)的新鲜曲种培养物(24h内培养物)用于阳悬液的制得：对于白色念珠菌,将料面保存衡转接到马性嘱培养基(PDA)平板上，在(28±1)P下培笄24h48h,再连续转接1次后(在5代以内)的新鲜曲种培养物(18h内培养物)用于倒悬液的制备，9.3 MftMM用接种环8)从9.2的新肝菌种培养物上取I环2环新鲜苗种，加入到20ml.接种液(9.1)中，用显微镜观察法或其他合适的方法估计活函数目，10倍悌度稀糅并选择的液浓度为2.5X105CFVXm1.v10.OX10sCFln1.的稀择液作为试验曲液，该试验菌液冰冷3C'4C保存,在4h内使用.10试祥的准备10.1 试样和对Ml祥的祥试样：用模刀从粒面切取6块尺寸为(5O±2)mm(5Oi2mm的试样，试样厚度不应大于5mm,3片用于“0”接触测试，3片用于现定时间的接触测试.若试样尺寸无法满足切取条件,可切取6块尺寸不小于(20±l)mmx(20±l)mm的试样，同时覆i膜凝乙循薄眼也相应减小。对照样(6.11):6片，3片用于“0”接触测试,3片用于规定时间的接触测试。W.2试样和财Im的灭通常采用紫外灯处理灭雨.将试告和对照样的正反面在紫外灯下分别照射灭菌.也可选用其他适宜的灭曲方法试样的灭雨处理应以不影响试样的抗菌性能为喉则.如采用其他灭菌方法陶在试收报告中注明,1111.1将试样和对照样分别放入火前培养皿中，保持待测面向上,用移液管分别移取54ml.偏悬液(9.3),慢滴加到每个试样和对照样的待测面上，然后将聚乙胡薄膜(6.10)«施于曲液上，调节使曲液分改到整个架乙烯薄胶,注意避免的液从薄膜边续溢出，荒上培养皿的上诙，每处试样做3个平行试恐若试样尺寸较小，可移取0.1m1.-0.4ml.前悬液,使贴膜后试样表面的1«液中含苗数Ift达到1.0×IO5OTJ/片4.OXIOsCFU/片.有些试样表面很难防止茵液溢出，可通过增加情性淄糖剂(如质H分数为0.序0.3%的琼脂等)以增加的液的粘度，防止溢出，并在试验报告中注明.如果因样品表面的花纹很难防止落液溢出,可以通过“倒贴腴”的方法进行测试，试样尺寸调整为(4O±2)mm×(4O±2)mm.聚乙烯薄眼(6.10)尺寸为(50±2)mmx(50±2)mm.菌悬液(9.3中增加性性增稠剂以增加曲液的意度，用移液论移取04ml.第慈液，缓慢滴加到标个聚乙烯薄膜(6.10)衣IfiJ.将试样侍测而朝下，置施于菌液上.调节使雨液分散到整个试样,注意温免菌液从试样边缘溢出,如采用该方法，应在试验报告中注明.11.2 制对于金狗色他电球菌和大隔杆菌，将接种后的试样和对照样在(37±I)C、相对湿度£90%的条件下培养2lh：对于白色念珠菌.将接种后的试样和对照样在(28±l)匕、相对湿度N90%的条件下培养48h。11.3 Wtt11.11 V分别量取20m1.洗脱液(6.9)到3个“0”接触时间的试样和对照样中，充分洗脱后,取定的洗脱液,用10倍稀林法系列稀择至今适稀择倍数.佥黄色他珀球盟和大肠杆茵接种于平板计数琼脂(PCA)中，板个稀邰倍数制作两个平行样，在(37±DC下培养24h-48h，白色念珠前接种于马铃舞培养茶(PDA)中.在(28±l)C下培井48h72h.然后进行活衡计数.11.3.2Uft分别显取20m1.洗脱液(6.9)到培笄后的试样和对照样(11.2)中.充分洗脱后.取-定量的洗脱液，川10倍稀杼泣系列稀和至合适稀箱倍数.金黄色前3球偈和大肠杆商接种于平板计数琼脂(PCA)中，林个将林倍数制作两个平行样，在(37±DC下培养24h48h.白色念珠苗接种于马铃*培养基(PDA)中,在(28±1)下培养48h72h,然后进行活甫计数.如试验的息液3)中增加情性烦抑剂以增加曲液的黏度，洗脱时霜要采用机械搅井，如均质、旋动或也声波振动等.需脸让这些方法的回收有效性后方可采用，也对于耳图狄坡也适当做脚发液的用量.用阳三皓注明.11.4 MtHft用肉眼观察(必要时可用放大镜或偏落计数器)，记录稀择倍数和相应的幽落数m，以CFV我示.选取菌落数在30CRJ-3CF1.h无卷延菌落生匕的平板记录雨落总数-小于30CFU的平板记录具体菌落数，大300CFU的可记录为多不可计,短个稀择倍数的菌落数以两个平板的平均数.若平板有较大片状曲常生长时,不直采用.应以无片状商落生长的平板作为该稀择倍数菌落数：若片状菌落生长不到平板的一半,另半中甫落分布比较均匀，可计律半个平板后乘以2,代表该平板中的菌落数,当平板出现曲落间无明显界限的展状生长时,将年条单於作为一个菌落计数.12第果计g访他1着«试的结果以试样中的活的数表示，按公式(1)进行计算：N=C×D×V式中:N每个试样的活赭数，单位为曲落形成单位每片(CFU/片)；C阳落数平均位,单位为前落形成单位(CFU);D稀择倍数：V洗脱液体枳。计致时所取洗脱液体积的比(ft.活曲故N的计诔结果保留两位有效数字。在V为20的情况下，对前常数小于1的情况活茵数试险结果记为小于20.试验结果取3个试样中的活菌数的灯术平均值，保留两位有效数字。当活的数小于20时.用2。进行平均俄计獴，保第四位有效数字。12.2 试的有数性当试验同时满足以卜3个条件时,则试验有效，否则应啦新取样进行试验：a) 3个对照样的“0”接触时间的活商数应符合(地密对数假一圾低对数0/平均活菌数值对数依W0.2的要求：b) 3个对照样“0”接触时间洗脱的菌落数平均仅应在1.OX10,CRJ/片一l.OX10,CFU/片：O接种培养后卷个对照样上的活苗数不应小于1.OXlQ,CFU/片，123抗的率在试脸忏效的前提下,按公式（2）计算:抗菌率,结果保用两位有效数字。K事1.XK）O<2>*l三R-抗菌率.;T03个皮革试样“0”接触的活篇数平均值,单位为南落形成电位J片（CFUJ片）；T,3个皮革试样培养规定时间（11.2）后的活苗数平均也，单位为菌落形成单位银片（CFIJ/片）.如果CO>T.,以C.代件To.G3个对照样“0”接触的活菌数平均依，单位为菌落形成单位板片（CFW片葭13试验报告试验报告应包含以下内容：a）本文件编号：b）试样的类里、来源和名称：O试脸两种及掰号Id）试脸结果,抗偈率：c）。本文件规定方法的任何儡,%.GBT31402-2015塑料理料表面抗偈性能试验方法QB/T2881犍类和鞋类部件抗菌性能技术条件WS/T65O-2019抗菌和抑雨效果评价方法ISO16187FootwearandfootwearcomponentsTestmcth<xitoassessantibacterialactivitySTME218OSuu<krdIeMrnelh<xllrdete11niningthe<ctivi(yofincvrporuledanlimkr-bialagenl(三)inPolVmeriCorhvd11>phbic11uleriuh