铁皮石斛组培快繁技术.docx

铁皮石斛组培快繁技术铁皮石斛外植体可选择叶片、茎段、种子、细胞、组织等器官，但为了适合药用铁皮石斛工厂化育苗的需要，通常选用未成熟种子（未成熟胚）作为外植体，有时也可选择茎段作为外植体。1 .种子作为外植体1.1 种子的制备及消毒每年5-6月对铁皮石斛的亲本进行人工授粉，11月取未成熟荫果，带入实验室，用流水冲洗23min,去污剂浸泡IOmin（其间不时摇晃），然后流水冲洗IOmin,带入超净工作台，先用70%酒精浸润30s,0.1%升汞浸泡5Iomin,无菌水冲洗35次，备用。1.2 铁皮石斛无菌播种将铁皮石斛萌果置于无菌纸上，用解剖刀将葫果切开，将种子匀均播种于原球茎诱导培养基（改良N6+NAA0.5mgL+马铃薯提取液80gL+琼脂7gL+蔗糖30gL,pH5.6）中，置于培养室中培养，培养条件为25±2C,光照IOOOLX,光照周期12hd（开始7天给予暗培养），培养3个月后，铁皮石斛种子被诱导成原球茎（图9-3）。图9-3铁皮石斛播种后培养不同时间原球茎诱导情况a.播种30d：b.播种60d；c.播种90d1.3 原球茎分化增殖与壮苗生根培养将原球茎转接至铁皮石斛分化增殖培养基（改良N6+NAAL0mgL+香蕉汁80gL+琼脂7gL+蔗糖30gL,pH5.6）中，置于培养室中培养，培养条件为25±2°C,光照1500Lx,光照周期12hd,培养3个月后，原球茎分化成苗（图9-4）,再将分化出的幼苗重新转接至壮苗生根培养基（改良N6+NAAl2mgL+香蕉汁80gL+活性炭18gL+琼脂7gL+蔗糖30gL,pH5.6）中，每瓶接种2025株（以55Oml兰花瓶计），从转接至培养3个月即可出瓶移栽图9-4铁皮石斛原球茎分化培养a分化培养7db分化培养45dC.分化培养75d图9-5铁皮石斛试管苗生产车间接种室（照片由厦门塔斯曼生物L程有限公司提供）图9-6铁皮石斛试管苗生产车间培养室（照片由四川干草生物技术股份有限公司提供）图9-7铁皮石斛试管苗（照片由四川干草生物技术股份有限公司提供）2 .以铁皮石斛茎段作为外植体2.1 茎段的预处理及消毒将铁皮石斛带节的茎段先用洗洁精清洗干净，剥去叶片和膜质叶鞘，流水冲洗105分钟，剪成11.5Cm的带节小段，带入超净工作台，先用75%酒精浸润30s,用0.1%升汞浸泡Iomin,无菌水漂洗45次，最后用无菌滤纸吸干水分。2.2 茎段的初代培养将铁皮石斛茎段接入初代培养基（MS+6-BA2.0mgL+NAA0.5mgL+蔗糖3%+活性炭08gL+琼脂7gL）,置于25±2,光照强度1500Lx,光照周期12hd条件下进行培养，培养中每25d继代一次，75d后可获得茎段腋芽。2.3 丛生芽诱导将铁皮石斛初代培养产生的腋芽从茎段上切下，重新接种到丛生芽诱导培养基（%MS+6-BA1.5mgL+NAA0.5mgL+蔗糖3%+活性炭0.8gL+琼脂7gL）上，置于25±2C,光照强度1500Lx,光照周期12hd条件下进行培养40d,可在腋芽基部产生大量的丛生芽簇，增殖系数可达5以上，产生的丛生芽簇可继续切割增殖培养，也可用于壮苗生根培养。2.4 壮苗生根培养将铁皮石斛丛生芽诱导培养中产生的丛生芽簇切割成单芽，重新接种到壮苗生根培养基（%MS+IBA0.5mgL+NAA0.5mgL+蔗糖3%+活性炭0.8gL+琼脂7gL）,培养条件为25±2,光照强度1500Lx,光照周期12hd,培养9012Od后，铁皮石斛小苗长至3cm高，有34条根，即可移栽。五.驯化与移栽1 .驯化：铁皮石斛驯化采用瓶内驯化的方式，将铁皮石斛组培苗置于温室中，不开盖驯化IOd,然后打开瓶盖再驯化3d。2 .洗苗：将铁皮石斛组培苗从瓶中取出，用清水仔细洗去基部的培养基，然后用0.8%高钵酸钾溶液浸根30s,置于通风处将根晾干即可移栽。3 .基质准备：铁皮石斛基质要求通气、透水，通常铁皮石斛的基质以松鳞：石子=2-3：1的比例进行配制。4 .移栽：铁皮石斛栽培可以采用容器栽培（图9-9）、地面栽培（图9-10）或苗床栽培（图9-11）,容器栽培即将基质置于花盆或穴盘内，然后将铁皮石斛组培苗栽种于其中，每丛3株左右；苗床栽培需在苗床上铺设3cm左右石子，石子上方铺设IOCm左右基质，将组培苗种植其中，每丛3株左右，株行距为10x10Cm15x15cm。图9-8容器栽培图9-10苗床栽培