IgM 捕捉 ELISA 法（MacELISA）检测登革热 IgM 抗体.docx

IgM捕捉E1.1.SA法（MacE1.ISA）检测登革热gM抗体I目的检测出登革病毒特异性IgM抗体。2适用范围适用于人血清或血浆中登革病毒特异性IgM抗体的快速检测。3样品接收和准备3.1核对被检样品（血清或血浆）患者的姓名、编号及检测项目等。3.2待测样品在检测前应放置于28°C冰箱或置于冰上。4检测项目及参数本方法检测项目为检测血清或血浆中病毒特异性IgM抗体5检测仪器设备和材料加样器、温箝、洗板机、含波长45Onm的的标仪、登革病毒IgM抗体检测试剂盒，或实验室自备材料：5.1 版：阳性抗原：采用C6,36细胞感染登革病毒培养物为阳性抗原.阴性抗原：未接种病毒的正常C6/36细胞为阴性抗原对照。5.2 抗人IgM（链）单克隆抗体或多克隆抗体：5.3 登革病毒IgM阳性、阴性对照血清；5.4 辣根过氧化物的标记登革病毒单克隆抗体；5.5 缓冲液：洗涤液：pH7.4PBS-T（0.05%吐温-20）：稀释液：pH7.4PBS（5%牛血清）：封闭液：pH9.6碳酸缓冲液（1%牛血清白蛋白）:5.6 显色液：B液5.7 终止液：4NH2SO46检测的环境条件生物安全二级实验室（BS1.-2）中进行.灭活后样本在生物安全一级实验室（BS1.-I）内进行。7检测原理本方法采用抗人链捕获人血清IgM抗体，加辣根过氧化物的标记的病毒抗原物，用以检测出血热特异性IgM抗体。具有较高的敏感性、特异性和重M性。适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。8检测步再8.1 用稀择液按效价稀择抗人链单克隆抗体，100p1./孔，加盖，4过夜：8.2 弃去抗人链，用洗涤液重或洗3次，甩干，加封闭液，K）OW孔，S37°C水浴孵育2小时：8.3 弃封闭液，用洗涤液重复洗3次，甩干。8.4 将待检血清用稀粹液从I：IO开始作2或4倍连续稀择，加入酸标板孔中，100W孔,同时加入已1：IO稀释的阳性血清、阴性血清对照各4孔，1001.,孔，置37oC水浴孵育2小时：8.5 弃去血清，用洗涤液重熨洗3次,甩干，分别加4个型DV抗原及阴性抗原对照，100w孔，4过夜：8.6 弃抗原，用洗涤液重复洗3次,甩干，加用稀释液稀释至工作浓度的相应的登革热渔标单克隆抗体，正常抗原加4个型混合的酶标单克隆抗体，I（X）1.孔,37°C水浴2小时：8.7 弃去标记物，用洗涤液重勿洗3次，甩干，于各反应孔内加A/B液各滴，37,避光35分钟：8.8 加终止液丁每反应孔，一滴/孔.9结果判断（1）目测方法：阳性对照孔呈明显蓝色，阴性对照孔呈无色，对照成立；若待检血清孔呈明显淡蓝色或深蓝色（TMB）,则标本为登革热IgM抗体阳性，反之阴性。（2）胸联免疫检测仪检测：于45Onm(TMB)阳性对照孔OD值/阴性对照孔OD值,即Pg2.1,对照成立；若待检血清孔OD值与阴性对照孔OD比值NZI,则标本为登革热IgM抗体阳性，反之阴性。(阴性对照孔OD值小于0.05按0.05记，若大于0.05按实际数值计算)10意义阳性结果，提示患者新近登革病毒感染，用于登革热早期临床诊断。