DB31 2010-2012 食品安全地方标准 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-串联质谱法.docx

DB上海市地方标准DB31/20102012食品安全地方标准火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定液相色谱-串联质谱法2012-10-26发布2012-10-26实施前言本标准的附录A、附录B为费科性阳录.食品安全地方标准火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定液相色谱一串联质谱法1范HiI本标掂Mt定了火锅食品中器栗破、吗叫、那可丁、可待因和蒂巴因的液相色谱-小联侦谱测定方法.木标准适用于火锅酱料、汤料、调味油和固体类调味粉等火锅食品中廖栗碱、吗啡、那可丁、可待因、蒂巴因的测定.2原理样品用水或盐酸溶液分散均匀、乙朋提取后，经盐折分层，乙脑提取液用设公硅固相萃取吸附剂净化.离心.液相色谣一事联侦谱仪检测，涔栗世、那可丁和蒂巴因采用外标法定量,吗啡和可待因采刖内标法定量.3试剂与材料除非另仃规定.本方法所用试剂均为分析纯或以上设格.水为GB,T6682烷定的级水.31甲醇（CH,0H）I色谱缆.3.2 乙册（CHJCN）:色谱纯.3.3 甲酸（HCOOH）：色谱纯.3.4 盐酸（HQ）,3.5 甲酸彼（HCOONH1）.36氯氧化钠（NaOH）.3.7 无水Jft酸楼（MgSo研研后在500C马弗炉内战5h,200匕时取出装瓶.It于干爆器中,冷却后备用.3.8 无水品酸陋（CH5COONa）.3.9 乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）填料：粒度407011m.3.10 CI8AH:粒度4050m.3.11 盐酸溶液0.Imo1.1.）:显取盐酸（3.4）9m1.加水至11.摇勺备用.3.12 甲酸检溶液（10mmo1./1.）：准确称取1.26g甲酸被（35）溶解于适盘水中,定容至21.混匀后备用.3.13 甲酸甲醉溶液（0.5%）：砥取甲酸（3.3）Im1.置广20Om1.容砥瓶中，用甲醉桶棒并定容至刻度，摇匀备用，3.14 衽氧化钠溶液（Imo1./D；准确称取40g班乳化钠3.6）溶解道后水中，定容生I1.,混匀后得用。3.158 酸黑果碱、吗啡、那可丁、磷酸可待因和蒂巴因标准品：纯度不少于98%.3 16内标物质I吗啡D3,可待因D3.3.17 标在储缶液（1.0mg.'m1.）:将率称取盐酸然衰碱、那可丁、蒂巴因、吗啡和磷酸可恃因标准品适Ift,用甲酸一甲解溶液（3.13）配制成璃栗喊、那可丁、蒂巴因、吗啡和可待因的浓度均为1.OmQm1.的溶液，作为标准储备液.4C避光保存,有效期三个月.3.18 混合标准品溶液：精密吸取浓度为IQman1.的察聚碱、那可丁、带巴因储液各1.Om1.和浓度为1.OmgXm1.的吗啡、可恃因储备溶液各Sm1.于20m1.容吊:瓶中，用乙肪（3.2）定容至刻度,插匀，膘得含器菜或、那可丁、蒂巴因浓度为S0gm1.和吗啡、可恃因浓度为250第m1.的混合标准溶液。4 *C避光保存，有效期三个月.3.19同位索内标I：作溶液（5.0gm1.）:分别精密吸取内标物妩（3.16）适此用甲醉3.1）配制成吗啡-D3.可待因-D3的浓度均为5.0gm1.的溶液.4匕避光保存,有效期三个月.3.20标准工作溶液的配M：分别精密吸取上述混合标准品溶液3.I8和同位素内标工作溶液（3.19）适量,用乙脂（3.2）稀择成都粟碱、那可丁、蒂巴因浓度为1.0Wm1.、2Qngn1.5Q喊m1.、IOQng/m1.、20.0ng,'m1.50.0ng1.叫咋、可待囚浓度为5.0ng/m1.、10.0ng.'m1.25.0ng1.'m1.50.0ng.'m1.KX）ng.'m1.250ng,'m1.的系列标准I：作溶液,内标溶液浓度均为50.0ngm1.临用新闻.3.21甲酸乙朋溶液（0.1%）：录取甲酸（3.3）Im1.,加乙肺（3.2）稀祥至I1.,摇匀，过渡，322甲酸甲酸钺溶液（0.1%）1.盘取甲酸（3.3）Im1.加甲酸钺溶液（3.12）稀择至I1.摇匀.过谑。3. 23注联：O.22m（尼龙）。324PH试纸：PH174,4仪等和设备3.1 液相色谱-中联质诣仪：带电喷雾离子源（ESI）.4. 2分析天平：感显为O.（X）O（1s和0.01g.4.1 离心机：10O（K）朽/分钟，4.2 超声波清洗器。4.3 涡旋混合器.5分析步骤5.1 提取5.1.1 火锅强料'汤料、调味油称取2g试样（精确至0.01g）于50m1.聚四冢乙烯具塞嘉心竹中，加入1501.同位素内标工作液3.9）,再加入5m1.水.振摇使分股均匀（笠类样品必要时可加IOM1.水），加入15m1.乙册（3.2）,涡旋振荡Imin,加入6g无水防酸镂（3.7）和1.Sg无水茹酸钠（3.8）的混合粉末（成以相当的市付商品代苗），迅速振描,涡旋振荡Imin,以4000粒/分钟卷心5min,以上清液待净化，5.1.2 固体类调味粉称取2g试样（精确至0.0Ig）于SOm1.聚四胡乙烯具塞离心管中,加入ISOH1.I可位素内标工作液（3.19）,再加入5m1.盐酸溶液（3.1.1.溶液,超声处理3。分钟,用氧氧化钠溶液谡节PH值呈中性,加入15m1.乙腿3.2.涡旋振荡1min.加入6g无水硫酸嵌（3.7）和1.5g无水能酸钠（3.8）的混合扬末（或以相当的市包两旅代甘）.迅速振摇,涡旋振荡1min.以4000转/分钟潴心5min.取上消波得净化.称取5()mg(±5mg)PSA<3.9).1.(>0mg(i5mg)无水硫酸铁(3.7.100n唱(±5mg)C18给末<3.IO）W.F2m1.坡四氯乙烯具塞癌心管中（或以相当的市俗商品代替）.移取1.5m1.上消液<5.1）至此离心管中.涡旋混合Imin.以100OO转/分钟离心2min,移取上消液.0.22Hm/<3.23）过漉.取滤液待测.6测定6.1 参考液相色谱条件a）色谱柱tBEHH1.UC（粒径1.7pm.2.1.×1.mm）,或相当者：b）进样量:51.;c）柱三4（）C;d）&速：0.3m1.min;e>流动相：A相<3.21>；含0.1%甲酸的乙肪，Bff1.（3.22）；含0.1%甲酸的IOmmo1.Z1.甲酸铁溶液,按表1进行梯度洗脱.表I梯度洗脱程序时间minA相/%B相/%0.(»90IO0.3090IO1.00802024080203.0090IO6.(»%6.2 考质港条件a）离子化方式：电喷雾电掰：b）扫描方戒:正离子扫描:C）Kt测方式：多反应监测（MRM）：雾化气、气帘气、辆助气、祕接气均为高纯氯气：使用前陶调节各参数使质诸灵敏度达到检测要求.参考条件见附求A6.3 定性测定在相同实验条件下测定拓准溶液和样品溶液.如果样品溶液中检出的色谪珞的保留时间与标准溶液中的某种姐分色谱峰的保留时间一致.样品溶液的定性离子相对丰度比与浓度相当标准溶液的定性离子相对丰度比进行比较时,相对偏基不超过发2规定的范围,WI可判定样品中存在该组分.*2定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差相对隔子丰度/%>5020-50IO-»)<10允许的相对偏差/%±20±25±30±50在仪器城佳状态下,对标准工作液进样,以相聚破、那可丁和蒂巴因的色谱帽面积为纵坐标,相黎喊、那可丁和蒂巴因的浓度为横坐标绘制标准工作曲i½,外标法定Sh以吗啡和可待因的峰面积与相应内标物幡面积的比值为纵坐标，吗啡和可价因的浓度为横坐标绘制标准工作曲线,内标法定收.在上述色谱和质谐条件下，7种化合物的标准物质提取掰子（定价）质谙图卷见附录B6.5空白试验除不称取样屈外,按5、5.2步骤进行后测定.7分析结果的表述样品中5?栗时'吗啡、那可丁、可侍因和蒂巴的含氏按下式计算，«!未找到引用（1）式中，X-试样中各待制物的含最，单位为儆克每千克（g'kg）;C-从标准曲线中读出的供试茄溶液中各待测物的浓度.单位为微克每升（g,1.）:V-样液的提取体枳,此处为15,单位为圣升（m1.）：m-试样的侦址,单位为克（g）.计蟀结果保的三位有效数字。8方法精密度在由女性条件下获Iy的两次独立测定结果的绝对差值不得用过算术平均优的20%9方法检出限和定量限木标准湘栗吗啡、那可丁、可恃因和蒂巴因的检出限分别为8jigkg、40g,8gkg.40咯kg、8g1.g<定录限分别为253«、125g.1kg,25gkg.125gkg.25gg.10方法准确度器栗碱、那可丁和蒂巴因添加浓度的用为25pgkg-250ngAg,吗啡、可待因添加浓度范国为125g*g1.25O1.gkg时,回收率为70%H0%,附录A质谱/质谱测定参考条件5种生物碱及2个内标化合物的定性班子对、定无离子对、去祓电乐(DP)及他接气能fit(CE)见表A.U表A.17种化合翎的定性离子对、定量离子对、去簇电压和硬捶气能量组分名称定性离子对(m,z)定量离子对(mz)去放It1.K(DP)N痔奔气能转(CH)ZeV料梁碱MOAw2.2540.4202.29238340.4/171.149叫呼2孤(XI81.3286QI8139750286.<y65.350那可丁44,4r220.5414.4X220、95304144353.334可待因300.4/215.23(X).42I5.29()34MO.4/165.455蒂巴因312348.3312.“58J52383113/249.122吗啡D32894185.2289.MQ9540289.4,165.253可符囚-D3三'2I5.3303.57215.3«0353O3.W165.260附录B7种化合物标准物质的提取离子（定）质谱图*嘤-mM0.41202.2OO031.OU202，265A303，4JO"唯aca*1.3435.0UmnOD0510152025303540博皿1m444M0.54550tZmin0005m1.520252.623.0is40可朴国，IZQOW”上2455JOZAnxn00OJ1。152025240i303J40蒂巴因m512.3.5834550fmn0005101520252.66J1.3JO3340叫玲m"MM8S24550Hmn00031.01520232AI13JO3540可他国03相W38215J455。tZrmn0。0510IJ20253035404550tImn2.1)4图B.17种化合物标准物质的提取离子（定量）质谱图里栗碱：2011c111.吗蜂：100Wftu那可丁：20nf1.,可待因：10011<111.、布巴因：20n</«1.、吗蜂心：50n1.可待因-D3：50ntz）