伪狂犬病毒和猪传染性胃肠炎病毒诱导β干扰素产生的分子机制研究-预防兽医学专业论文.docx

伪狂犬病毒和猪传染性胃肠炎病毒诱导干扰素产生的分子机制探讨-预防兽医学专业论文华中农业高校2011届博士探讨生学位论文2.猪ST玳G基因的克隆及其功能鉴定继DAI后，国际上三个探讨小组几乎同时报道了另一个参加细胞内dsDNA诱导IFN.1表达的信号分子.STING(Sti11Iu1.atorofinte疵rongenes),但不同探讨对STING的亚细胞定位及其在dsRNA和时蛆病毒诱导1EN.1中的作用存在着分歧。依据与人STNG基因序列有较高同源性的猪EST序列进行拼接并设计引物，从猪外周血单核细胞中扩增并获得猪SnNG全长cDNA.序列分析表明，猪STING开放阅读框全长为1137bp(Ge1.IBank收录号：FJ455509),编码378个氨基酸，含有1个内质网滞留序列。通过组织衣达谱分析发觉猪STING主要表达于脾脏、淋巴结和肺脏中。结构预料表明猪STING含有4个路膜区，利用绿荧光蛋白做标记进行探讨发觉其主要定位于内质网，但也有部分定位于线粒体。超表达猪STING能有效激活转录因子IRF3和NF.IcB,并诱导IEN.B的产生。利用I斟Ai卜调猪STING的表达则抑制RNA病毒和DMA病毒在细胞中所诱导的IFN.D的表达。这些结果提示STING是猪自然免疫系统中的一个重要的调整因子，为进一步阐明STING在自然免疫中的作用供应了依据。3.PRV诱导B干扰素产生的分子机制探讨伪狂犬病毒(PRV)属于疱疹病毒科，为双链DNA病毒。以前的探讨表明，PRV感染能有效诱导机体H然免疫。但是迄今为止对于PRV是否诱导p干扰素(INB)的产生及其分子机制还不清晰。采纳IFN.D启动子荧光素海报告系统检测发觉PRV感染PK.15细胞(PorCinebdneycenIine)后能显著诱导IFN.B的产生，荧光定量ImPCR检测也得到了相像的结果。为了阐明PRV感染PK.15细胞激活IFN.p的分子机制，运用RNAi技术和显性负调控突变体分别探讨了胞内信号通路和T1.R信号通路在PRv激活IFN.D中的作用。结果显示PRV可通过T1.R(To1.1.1.ikereceptor)的接头分子MyD88(mye1.oiddiMrentrationfaCtor_88)和胞内信号分子融G.I(retinoicaCid-i11ducib1.egeneD和VISA(Vin塔一inducedsigi1.灿gadaptor)激活IFN.Do好玩的是，RNAi试验表明PRV感染PK.15细胞诱导IFN.D的表达须要11强1(interferonregu1.ato巧faCtor1)IRF5(inte疵ronregu1.ato巧factor5)和IRF7(interferonregmat0巧tor7)参加，却不需要IRF3。IRF3是干扰素调整因子(imc彘ronregu1.ato巧f1.aC1.ors,IRFS)家族中的重要转录因子之一，并且在许多病毒诱导的干扰素基因表达和抗病毒自然免疫反应中都具有瓶要作用。为了迸一.