2024流式细胞术临床检验图文报告书写专家共识要点（全文）.docx

2024流式细胞术临床检脸图文报告书写专家共识要点(全文)摘要流式细胞术(FCM)是一种综合运用了光学、机械学、流体力学、免疫学等学科的实验技术，广泛用于临床检验。FCM临床检验报告以文字描述和必要的图片呈现检验结果，并给出解释性注释，提出实验诊断及进一步检验建议。然而，FCM检验结果的描述和报告书写规范尚未统一，致使不同医疗机构的FCM检验报告的可读性和严谦性参劳不齐。为此，中国中西医结合学会检险医学专业委员会蛆织专家对FCM临床检酷图文报告中的必要信息和书写格式进行规范，以加强实验室和临床对FCM检验结果的正确解读。流式细胞术(f1.owcytometry,FCM)是一种综合运用了光学、机械学、流体力学、免疫学等多学科方法，对细胞进行定性及定量检触的技术，已成为临床对淋巴造血系统肿瘤和非造血系统肿瘤进行诊断与鉴别诊断、微小残留病及疾病复发检验的重耍手段；并且通过评价免疫细胞亚群和功能,广泛应用于实体肿痛、自身免疫性疾病、感染性疾病、免疫缺陷型疾病和移植免疫等领域1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12。不同领域FCM临床检验报告内容有所不同，如对免疫分型及微小残留病(minima1.residua1.disease,MRD)等临床诊断项目需使用文字及相关图片来描述检验结果，并给出FCM的分析诊断，必要时还需提出进一步检验建议；而免疫细胞亚群检测项H需评估目的细胞群的细胞水平。然而，FCM临床检酷报告的书写尚未统一，临床检验报告内容的描述存在差异，这阻碍了FCM检验结果的规范化和标准化，甚至影响临床对检验结果真实性和可信度的判断，更不利于实验室间结果互认。少砧指南共识对FCM临床检验报告的内容作出了推荐，但局限于少数检测项目和报告内容的极少部分指标1,2,3,4。随着FCM检验技术的发展和临床应用需求的提高，对FCM临床检验报告的规范也提出了更高要求13,14,15O因此，中国中西医结合学会检验医学专业委员会组织专家制订该共识，对FCM临床检验报告提出书写要求，规范r图文报告的表达方式，将在规范检险报告的必要信息及检验结果的正确解读。共识编写工作组由来H我国26个省、H治区、直辖市的57家医疗机构共71位专家组成，包括执笔人和专家组成员。共识编写工作蛆组长及其他执笔专家必于临床实践和文献复习，围绕检验过程中的术语、方案和分析技术等13个要素相关内容，编制了“流式细胞术临床检验图文报告书写调行问卷”，提出13个问题并收集专家意见和建议。共识的提出和形成：由7位执笔专家总结来自全国71位专家所在医疗机构对调杳问卷的反馈意见和纳入文献综合分析结果，结合执考专家的工作经验，按4项内容分组合作完成“专家共识讨论稿”。通过线上会议和函审形式由起草专家对讨论稿的内容提出修改意见和建议，再山执笔专家修改形成“专家共识修改稿”，井提出了13条专家共识。共识编写工作组组长编制了“流式细胞术临床检验图文报告书写专家共识讨论稿的专家评审意见表”，通过函市形式由起草专家组进行评审，参考德尔非法确定评审结果的统计评价方法。根据评审结果，由执笔专家修改形成“专家共识审核稿”，提交给审核专家组做最后审核。共识的确定：以函审形式由审核专家对“专家共识审核稿”进行审核，共识编写工作组组长根据反馈意见和建议完成修改、补充，形成“流式细胞术临床检脸图文报告书写专家共识”，共包含10条共识。本共识适合各类医疗机构临床实验室和健康体检中心等相关单位人员，在使用FCM进行临床样本检敷时，均可采用或参照本专家共识。该共识主要规范了FCM临床检验报告中的基本信息、方法学描述、结果分析与结论、图片展示、审核与签发等内容。一、FCM临床检验报告的基本信息FCM临床检验报告的堪本信息主要包括患者信息、临床信息、申请信息、样本信息共4个部分。（1）患者信息：包括姓名、性别、年龄、科室、床位号、身份识别号（住院号和/或门诊号）等；（2）临床信息：主要是临床诊断（也可注明主诉症状和/或特殊治疗信息）；（3）申请信息：包括申请医师、申请科室、申请检验项目等；（4）样本信息：包括样本唯一识别号、样本类型（必要时注明抗凝剂类型）、采集时间、接收时间、报告时间等。如有其他可能影响检验结果的相关信息（如特殊治疗或样本状态）应予以备注2,3,4,8,9。二、FCM临床检验报告的方法学描述FCM临床检验报告的方法学描述包括：仪器及试剂信息、荧光素标记抗体蛆合方案、样本制备方法和样本检脸信息等。针对不同的检验目的和实险室检验设箔的适用性，FCM检险方案在实际应用中具有较高的灵活性和差异性。因此对于检验方案更杂的FCM临床诊断项目（如免疫分型和MRD）的检验报告，需进行方法学描述，以供实验室间交流及结果互认；对于非诊断性FCM检验项目（如免疫细胞亚群）报告，因靶标和抗体方案具有一定通用性，可不描述或简要描述方法学。1.仪器与试剂：各型号的流式细胞仪性能不同，建议在检验方法中注明制造商、型号、分析软件3,8,16,17,18,19。检验方案中的主要荧光素标汜抗体需注明厂家与荧光素；对疾病具有重要诊断价值的抗体如浆细胞肿瘤CD38多表位抗体，需注明抗体类别和克隆号19;其他试剂如溶血索、破膜剂、固定剂等注明厂家或配制方法。2.荧光素标记抗体组合方案：由于不同荧光素波谱之间存在相互重榄的现象，荧光素在组合时需要进行补偿调节，以纠iE光学检验器间由于荧光登加造成的检验误差，而荧光索的组合、补偿调节方案均会影响荧光信号的检验结果，因此建议提供每个检验管荧光素标记抗体的组合方案1,5,16,17,可在FCM图片上注明。3样本制备方法：（1）常规方法：外周血和骨的样本的常见染色步骤为抗体标记、裂解红细胞、免洗或洗涤5,12,17;也可采用裂解红细胞、洗涤、抗体标记、洗涤19;或（孵育）洗涤、抗体标记、裂解红细胞、洗涤1等方法，以达到最佳检验效果.（2）胞浆抗体染色：胞浆抗体需破膜处理5,8,9,对破膜剂和破膜方法需进行描述。（3）对特殊样本的制备方法应进行描述，如脑脊液样本需离心富集待检细胞、蛆织样本需制馅单细胞悬液（研磨或解离后过淀），根据需要再进行裂解红细胞、染色、洗涤18等步骤，必要时特殊样本应标汜死细胞并报告活细胞比例.共识1在FCM临床检验图文报告的方法中，建议提供流式细胞仪、分析软件、主要荧光索标记抗体的相关信息，对疾病具有重要诊断价值的抗体需具体到抗体类别和克隆号；其他主要试剂注明厂家或配制方法。推荐强度：强烈建议。共识2对FCM的样本制备信息予以简单描述，提供主要检验管的荧光素标记抗体组合方案（可在图片中标注），简述关键操作步骤；样本制备完成后，若不能匕即上机检触，需注明保存条件与时间；注明收集的细胞总数。推荐强度：一股建议。三、FCM临床检验报告的检验结果与结论不同检验项目的FCM临床检脸报告对于检验结果、图片与结论的展示方式的要求不同：FCM临床诊断项目如免疫分型和MRD需提供完整的检验结果、结论，并附带FCM彩色二维点图。免疫细胞亚群的临床检验报告一般只需提供检验结果（多以表格形式提供，附带健康群体参考区间），除具有明确检验目的或临床截断值的项目，否则般不提供结论，且无需提供附图3,8,9,10,11,12.（一）FCM临床检验报告结果中的术语描述规范FCM临床诊断项目的检验报告主要描述抗原表达结果1,3,12,17,18,19,包括抗原表达的比例和强度。其中抗原表达比例的描述涉及阈值，而表达强度的描述涉及内对照细胞群8,9,10,13,18,19o1 .抗原表达的比例：抗原表达分为阳性（筒称表达）、部分阳性（简称部分表达）和阴性（简称不表达）3种情况。抗原表达比例的描述涉及阈值（指精确设门后，目的细胞群抗原表达率）（表1）9,10,13,20;如方研究结果支持，也可采用其他特殊阈值并注明。例如，早期前体T急性淋巴细胞白血病/淋巴母细胞淋巴病CD1.a和CD8阴性表达要求抗原表达比例低于5%21;而急性白血病系别判断中，关于馈过负化物能阳性的定义为抗原表达比例高于3%28%9,13;其他特殊情况，如靶向治疗中涉及的肿瘤细胞靶点筛杳，除r描述阳性和阴性结果，还需给出肿痂细胞特定抗原的表达百分比8。2 .抗原表达强度：需借助内对照细胞群进行评价，内对照细胞群是指在所分析的样本中存在的抗原表达强度已知的细胞，利用这些细胞的阳件.和/或阴性表达以及荧光强度作为检验对照值，来评价目的细胞的抗原表达强度1,2,3,8,9,W,H,12,13,14,15。FCM临床检脸报告中，建议使用增强（bright,bri）或减弱（dim）描述病理性细胞（例如恶性、克隆性、异常细胞）的抗原表达强度改变；使用高（high,hi）或低（1.ow,Io）描述非病理性细胞（如免疫细胞亚群和正常内对照细胞）的抗原表达强度差异。（二）FCM临床检验报告中的结果描述1.FCM临床诊断项目检验报告中的结果描述：FCM临床诊断项目（如免疫分型和MRD）的检验报告需对样本中主要细胞群特别是异常细胞群的仃分比及抗原表达情况进行客观描述，同时根据抗原表达情况判断肿痛细胞、异常细胞群体所代表的血细胞系别和成熟阶段，结合临床信息给出相关疾病诊断或提供向性意见，主要包括以下内容。（1）细胞群仃分比：包括肿痂细胞、异常细胞占有核细胞或单个核细胞百分比，必要时提供其占特殊业群细胞百分比（如恶性浆细胞占总体浆细胞百分比)19,以及其他主要正常细胞群占有核细胞或单个核细胞百分比。(2)肿就细胞或异常细胞抗原表达定性描述方式：包括抗原表达比例和抗原表达强度。抗原表达比例描述方式为检验标志物阳性表达(简称表达)、部分阳性表达(简称部分表达)、阴性表达(简称不表达)，重要标志物(例如肿瘤靶点抗原、淋巴瘤的ki67和/或CD38)需提供表达百分比，必要时提供单位体积的绝对细胞数；杭原表达强度描述方式为增强(bri),减弱(dim)、异质性表达(heterogeneous,heter),heter指抗原在阳性表达细胞群上的表达强度呈现延续性，超过1.5个对数级9,10;抗原表达强度与内对照细胞群相比，未发生改变的抗原可不予备注3,8,9,10,11f12o(3)肿痛细胞或异常细胞抗原表达强度定盘描述方式：FCM使用荧光素标记抗体，荧光强度可在一定程度上定量反映抗原表达强度。描述方式包括平均荧光强度(meanf1.uorescenceintensity,MFI)、中位英光强度(medianf1.uorescenceintensity,MdFI)»几何平均荧光强度(geometricmeanf1.uorescenceintensity,GeoMFI),报告多采用MFI或者MdFI进行描述,必要时选择阴性对照细胞或荧光微球进行MdF1.或MFI校准1,5,6,7,8o骨骼增生异常综合征、骨制增殖性肿瘤等慢性肺系肿册可能涉及多个异常细胞群，如髓系原始细胞、分化阶段粒细胞、分化阶段单核细胞、有核红细胞、巨核细胞、淋巴细胞等5,6,建议描述各群细胞的比例和抗原表达是否异常。MRD检验报告建议提供获取样本的细胞数随，检验方法的检出限和定依限，以评价检验方法的况敏度。2.免疫细胞亚群的结果描述：目前多以表格形式提供检验结果，并附带健康群体参考区间，检验结果脱离参考区间的项H以升高（）或减低（I）警示3,8,9,10,11,12。（三）FCM临床诊断项目检验报告的结论FCM临床诊断项目的检验报告需提供检验结论，即针对检验结果做出相关疾病诊断或疑似诊断，必要时给出进一步检验建议。当怀疑存在影响检验结果准确性的因素时，应在报告结论中，予以提示和建议。共识3FCM临床诊断项目（如免疫分型和MRD）的检验报告需提供完检的检验结果、结论和FCM彩色二维点图。检验结果需客观描述样本中主要细胞群情况：（1）肿瘤细胞、异惜细胞、正常细胞群占有核细胞百分比，必要时描述亚群细胞占某群细胞的仃分比甚至单位体积的细胞绝对数；（2）目的细胞群抗原表达比例（阳性表达、部分阳性表达、阴性表达），必要时提供表达百分比；目的细胞群抗原表达强度（bri、dim、heter）;特殊标志物需提供荧光强度（MdF1.或MFI）,必要时选择阴性对照细胞或荧光微球进行MdFI或MFI校准。结论部分针对检脸结果作出相关疾病诊断或疑似诊断，必要时给出进一步检验建议。推荐程度：强烈建议。共识4免疫细胞亚群检验的临床报告一般只需提供检验结果以及健康群体参考区间，检敷结果脱离参考区间的项目以升高（f）或减低（1）警示，除具有明确检酷目的或临床裁断值的项目，否则股无需提供结论及附图。推荐程度：一般建议。共识5描述抗原表达比例需参考阚值，目的细胞群抗原表达率80%为阳性表达（简称表达），目的细胞群中胞膜抗原表达率为20%v80%或胞浆抗原表达率为10%80%为部分阳性表达（简称部分表达），目的细胞群中胞膜抗原表达率20%或胞浆抗原表达率10%为阴性表达（简称不表达）；若有研究结果支持某界值具方相关临床意义，则可采用特殊阈值并注明。推荐强度：强烈建以。共识6FCM临床检验报告中，建议使用增强（bri）或减弱（dim）描述病理性细胞（包括恶性、克降性、异常细胞）的抗原表达强度改变；非病理性细胞（如免疫细胞和正常内对照细胞）不同亚群的抗原表达强度采用高（hi）或低（Io）进行描述。推荐强度：强烈建议。四、FCM临床检验报告附流式图耍求为评价检验结果的真实性与可信度，以及加强室间结果互认，FCM临床诊断项H的检验报告应依据诊断需求提供全面、清晰的彩色流式图，图中应包含诊断所需的主要设门信息、主要免疫标志物和荧光参数信息。免疫细胞亚群检验项目如TBNK潸巴亚群分析因不涉及对相关疾病进行诊断或疑似诊断，可报告但不限于成熟的非肿瘤性免疫细胞亚群的百分比和绝对计数11,12O（一）FCM常用图片类型FCM图片类型主要有一维图（直方图、透视图），二维图（点图、密度图、等高线图、透视图），多维图（三维图、宙达图、t分布殖机邻域嵌入图）等。彩色二维点图通过使用不同颜色代表不同细胞群，结果展示直观、筒便、通俗易懂，因此最常用于FCM临床诊断项目的检验报告3,8,9,10,H,12,22。（二）二维点图展示的参数信息二维点图中坐标轴展示内容主要包括物理参数前向散射光（forwardscatter,FSC）和侧向散射光（sidescatter,SSC）'荧光素和标记抗体，及其产生的信号强度。荧光信号参数包括高度（height,H）、面积（area,A）、宽度（width,W）,分别代表荧光信号峰值、轨迹曲线面积、曲线宽度。目前大多数流式细胞仪可选择不同荧光信号参数，通常首选A,少数选择H,几乎不选择W5。检验指标的数值可选择以线性（1.inear,Iin）对数（1.ogarithmic,1.og）、指数或双指数形式显示于参数坐标轴上5,16,17。根据不同细胞群的指标参数的表达差异，可选择不同的显示形式，例如白细胞各亚群以及有核红细胞之间，FSC紫异度小，故采用Iin形式显示；除粒细胞外，其他白细胞亚群的SSe信号之间的差异度较小，故采用Iin或1.og形式显示；血小板、成熟红细胞与白细胞之间的FSC和SSC差异度较大,因此分析血小板和成熟红细胞时，多采用IOg形式显示；不同细胞群之间荧光信号强度（荧光强度）型异度较大，故多采用1.og、指数或双指数形式显示；数字化流式细胞仪由于某些荧光信号在不同检验通道之间的溢出较多，为显示完整的荧光信号强度信息，方时需采用指数或双指数形式显示1,5,16,17o（三）设门方案展示FCM临床诊断项目的检验报告建汉提供相对完整的彩色图片以展示设门方案。FCM临床检验中常用的设门方法分为基础设门、各主要细胞群设门、反向设门、序贯设门（图2、4）,根据检验目的不同，设门方式存在很大差异。1 .基础设门：大多数FCM临床检验项目均需进行顺序性设门得到单个活细胞，具体操作是：首先使用FSC-A和FSC-H或FSC-W设置单个细胞门排除粘连体细胞；然后单个细胞门内，使用FSC和SSC设置细胞门（大多数FCM临床检验使用新鲜标本，此门可代表活细胞门）排除碎片和死细胞，如果特殊情况卜.需要使用核酸染料设置活细胞门，需注明核酸染料名称。因为单个细胞门和细胞门是依次进行，所以先后顺序可以互换。基础设门相对规范，临床检验报告可选择性展示。2 .主要细胞群设门：从单个活细胞开始分析，使用CD45和SSC对各主要细胞群设门，同时选择门内细胞颜色（图2A、4A）:成熟淋巴细胞门（图2A、4A,绿色）、单核细胞门（图2A、4A,棕色）、粒细胞门（图2A、4A,天蓝色）、有核红细胞门（图2A、4A,黄色）、原始细胞门（图2A,红色和宝蓝色），必要时设置嗜酸性粒细胞门（图4A,浅粉色）和嗜弑性粒细胞门，以及其他细胞群的门。3 .反向设门：从单个活细胞开始，使用系别标志物或原始细胞标志物结合SSC>CD45或其他标志设门。4 .序贯设门：肿瘤细胞在CD45和SSC设门或反向设门中与正常细胞群的位置不同，并且为单一肿瘤细胞群，可不再进一步针对肿痛细胞序贯设J;如CD45和SSC设门或反向设门不能有效区分肿瘤细胞与背景细胞（图41、4K）,或存在两种肿痼细胞群（图2T）,则需初步设门后,再根据标志物组合进一步区分门内不同细胞群。（四）FCM图片展示内容与颜色FCM图片展示内容主要与两种：第一种为检验样本中单个活细胞门内主要细胞群的免疫表型特征；第二种为特定细胞门内异常或目的细胞群的免疫表型特征（可同时显示目的细胞群与内对照细胞群，或只显示目的细胞群）。对干肿痛细胞比例高的样本，可只显示第种图片；而对于肿瘤细胞因占有核细胞比例低，第一种图片不能清楚显示时，建汉另外提供重点显示肿痛细胞群与内对照细胞群的图片。原则上，FCM图片展示的细胞群3个时,需使用彩色图片，并用不同颜色代表不同细胞群（图2、4）。各实脸室可按照自身习惯，设置不同细胞群颜色，原则为同一样本的多管组合图，使用不同颜色代表不同细胞群；尽盘选择鲜艳的颜色代表肿瘤细胞群或重要的低比例细胞群（如原始细胞群）。若样本中含有2种肿胸细胞群，要求2种肿病细胞群以及背景细胞的颜色设置对比鲜明。一般将低比例、目的细胞群置于图片上层，高比例、背景细胞群置于图片下层；大多数软件具有突出显示某细胞群的功能，在需清是显示低比例或目的细胞群时，可酌情采用（图2C、2F、2P2S的蓝色粒细胞群）。（五）FCM临床检取报告的组合图片内容FCM临床诊断项目的检验报告图片常采用多个二维点图形式展示，需提供单个活细胞中各主要细胞群的设门方式、占有核细胞百分比，所有检验标志物在各主要细胞群的表达情况包括：（1）根据设门方案，采用不同颜色代表不同细胞群；部分图片也可选择性显示某种或某几种细胞群；（2）横、纵坐标要求品示比例尺和坐标轴代表的参数，包括物理参数（FSC、SSO和荧光素标汜抗体及其产生的荧光强度信号；荧光强度的参数一股选择A信号，少数选择H信号；（3）横、纵坐标与原点的距离代表荧光强度的强弱，必要时显示MdF1.或者MFI;（4）FCM二维点图上应清楚显示H的细胞群与内对照细胞群的位置关系，并据此判断H的细胞群的抗原表达情况,>共识7FCM临床检脸报告图片建议采用彩色二维点图。要求显示比例尺和坐标轴代表参数（包括FSC、SSC.荧光素及标记抗体，上述参数指标产生的强度信号）；一般英光信号首选A,少数选择H,几乎不选择W。进行有核细胞分析时，检验指标的数值显示方式：FSC一般使用1.in,SSC使用Hn或1.og,荧光信号绝大多数使用1.og、指数或双指数。横、纵坐标离开原点的距离代表信号强度的强弱，必要时显.示MdF1.或者MFI;图片应清变显示目的细胞群与内对照细胞群的抗原表达关系。推荐强度：强烈建议。共识8FCM临床检验报告中应描述设门方法，并提供相对完整的彩色图片。临床诊断图片需依次设置活细胞门和单个细胞门（可选择性显示），并从单个活细胞开始使用CD45和SSC设置各主要细胞群，必要时使用反向设门和序贯设门。推荐强度：强烈建议C共识9FCM临床检脸图片需提供单个活细胞中各主要细胞群的设门方式、占有核细胞百分比以及所有检测抗原在各主要细胞群的表达情况。因肿瘤细胞占有核细胞比例低，导致全图不能清楚显示免疫表型特征时，建议另外提供重点显示肿瘤细胞群与内对照细胞群的图片。推荐强度：强烈建议。共识10彩色二维点图中，结合设门技术，每个实险室可按照习惯设置不同细胞群的颜色，原则是同一个病例的多管组合图，需使用不同颜色代表不同细胞群；尽量选择鲜艳的颜色代表肿瘤细胞群或重婴的低比例细胞群（如原始细胞群）。建议将低比例、目的细胞群群置于图片上层，高比例、背景细胞群置于图片下层，必要时使用软件功能突出显示目的细胞群。代表不同细胞群的颜色应清晰，色彩差别大。推荐通度：强烈建议。五、FCM临床检验报告的审核与签发FCM临床诊断报告需要具备资质的医师或授权签字人审核后签发，签发者和/或审核者一般由医疗机构根据国家相关要求进行资质确定和能力考核后授权。报告中需注明检验者、审核者、报告时间、实验室地址和联系方式等。