新生儿听力与遗传性耳聋基因联合筛查标准.docx

ICS11.100.C63SZDB/Z深圳市标准化指导性技术文件SZDB/Z1222015新生儿听力与遗传性耳聋基因联合筛查标准2015-01-23发布2()15-020实施深圳市市场监督管理局发布前III范南12缩略语I3术i否和定义I1.1 1新生儿听力筛直11.2 新生儿遗传性耳凭基因筛查21.3 减然对21.4 常染色体除性遗传21.1 5常染色体显性遗传23.6 统合突变23.7 杂合突变21崎杳对象、模式与结果显示5听力与遗传性耳聋基因联合筛杳流程图6筛查前宣传教育7听力与遗传性耳光基因筛查程序7.1听力崎杳程序7.2遗传性耳费基因帅查程序7.2.1知情同意书签箸7.2.2受检者资料采集7.2.3样本来集、保存和运输47.2.1检测工作流程47.3粒量控制58筛查结果处理59追踪随访6附录A（资料性附录新生儿听力筛杳知情同意书7冏录B（资料性冏录新生儿遗传性耳聋基因嘛克知情同意书8附录C（资料性附录新生儿听力与遗传性耳先基因联合筛查送检单9附录D（资料性附录新生儿听力与遗传性耳比艰因联合筛杳报告单10冏录E（规范性附录新生儿听力损失高危因素12参考文献13I1.本标准按照GB,T2009给出的现则起草，谛注意本文件的某线内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的说任。本标准由深圳市卫生和人I计划生育委员会归1.1.本标准负责起草单位：深圳华大基因医学有限公司、深圳华大临床检验中心.本标准主要起点人：赵立见、令蕊、梁金龙、杨玲，本标点为首次发布.新生儿听力与遗传性耳聋基因联合筛查标准本标准规定了新生儿听力与遗传性耳魂他因联合笳食的晞杳对象和模式，听力与遗传性耳先城因岷合筛查流程，加吉前宣传教科，听力与遗传性耳聋基因箭变程序、筛查结果处理及追踪随访的要求.本标准适用于新生儿听力与遗传性耳聋将因联合籍查的机构，通过听力与遗传性耳受基因的联合筛可使先天性耳点患儿、具行迟发性耳荒风险的高危儿、以及具有药物城感性耳告风险的而危儿得到早发现、早诊断、早干预,并指导临床用药2 Wff下列缩略语适合于本标准.bp：碱龙对"(basepair)A：腺嚓吟(Adenine)Ti胸腺啼嚏(Thyminc)G：鸟噪吟(Guanine)C：fe½(Cy1.OSinC)U：尿嗑U(Uraci1.)DNA：脱氧核制!核酸(DetixyribiMiucIeicAcid>RNA：核.鹅核酸(Ribonuc1.eicAcid)PCR：裳合筋链反成(Po1.ymcrascChainReaction)M1.DITOF-MS：妖质辅助激光解吸附/电离飞行时间顷诺(MiMriXASS加d1.aSerDes<rp<ioioniauonTimc-of-t1.ightMassSpectromcin')dNTPs：三微酸Wt基脱氧核甘酸(Deoxyribonuc1.eosideTriphosphate)3下列术谱和定义适用于本文件.3.1 新生儿听力筛查采用耳声发射、自动听性脑干反应和冷阻抗等电生理学检测技术，对处于自然睡眠或安怖的状态下的新生儿进行的客观、快速和无创的听力检查.32新生儿遗传性耳登基因缔查采用MA1.DI-ToF-MS技术对新生儿脐带血、足跟血进行遗传性耳蓬基因筛查,可到阍新生儿四个常见遗传性耳近基因突变怖况。3 .3碱基对碱基对是一对相互匹配的碱基.被级犍连接起来.组成喊基对的碱基包括A、T、G.C.U：是形成DNA、RNA堆体以及编码遗传信息的化学结构.4 .4常染色体隐性遗传行染色体胞性遗传是人类范因的一种遗传模式，指位于常染色体上的法因，其拈因性状是I®性表达的,即只有同一个体中的等位基因存在两个异常挎贝时才显示性状。5 .5常染色体显性遗传常染色体显性遗传是人类基因的种遗传模式，指位于常染色体上的菸因，其她因性状是显性表达的,即只要同一个体中的等位基因存在一个异常拷贝时就会显示性状。6 .6纯合突变纯合突变是指对等位法因在同一个位置都存在突变,7 7杂合突变杂合突变是指一对等位基因中只有其中个基因出现突变.8 的左对象、模式与结果显示8.1 筛查对象：所有新生儿.42筛查模式：联合采用听力简杳和基因检测技术手段，对新生儿进行系统的听力与遗传性耳光相关基因的检测,可以更加全面和有效地及早发现听力损失和携带耳遂致病基因的新生儿,辅助临床早期诊断.段警临床早期干预,指导临床用药.4.3筛杳结果显示：听力初筛和双。年的结果将用“通过”和“未通过”来去述，“通过”者说明听功能基本正常：“未通过”者说明可能存在耳花,需要进一步检查,确定诊断.并按相关规定定期进行随访。遗传性耳停就因随香结果将宜接显示所检测因位点的突变情况，分为“正常”与“突变”两种结果。“正常代表的是箭查“通过”，”突变”代表的是箭杳“未通过”。5听力与遗传住耳三西因联合nsSe筛Si前宣传教育宣传各年龄段所党语言观察方法及相关科普知识，下发相关科普宣教资料I未通过通过I,匐诊程序未通过高度预警程序通过一听力学渗断程序未通过*听力和基因的联合诊断程序6MiratWkW筛查前府对监护人进行宣传教育,告知监护人听力与遗传性耳花基因联合筛查的意义、重要性、检出能力和技术局限性等信息.遵循知情I可建、尊泵监护人个人遗愿选择的原则开展筛宣。7听力与遗传性耳聋因的杳程序7.1 听力林查程序7.1.1 知情向意书签署：知情同意行中明确听力筛食的性质、合理的预期目的、风侬性和必要性等。新生儿听力筛查知情同意书参见附录A.7.1 2初筛：在新生儿出生后23天（48-72h）进行筛查型耳声发射仪和/或自动听性脏干反应仪筛查，如单耳或双耳不通过,进入程序7.1.3.7.1.3狂筛：初筛未通过的新生儿在出生42天内使用筛式型耳声发射仪和/或自动听性脑干反应仪筛查进行双耳发第。72遗传性耳聋基因筛查程序7.2.1知情同意书签署知情同痣书中明确遗住性耳莲祭因崎农的性质、预期目的、技术方法、风险性和必要性等。新生儿遗传性耳聋基因筛杳知情同意书参见附录&7.2.2受检者资料采集包括受检新生儿的基本估息、新生儿听力筛查结果、新生儿母亲相关伯恩、家族遗传性耳徙病史等，新生儿遗传性耳挣基因。中杳送检单畚见附录Co723样本采集、保存和运输7. 2.3.1样本采集I）在遗传性耳弹基因筛查采血卡上填写新生儿性别、监妒人姓名、送检医院、采血苕、采血时间、而护人的联系电话等.采血R为专业制作的枭样耗材，制作过程中需经过特殊处理和消揖火萧，避免外源污染,采血卡内侧应有液体防治防污染的保护膜.2）严格按照无序操作规范，采集新生儿脐带血或足距血涂布于采血PJ:.血愤不少于一个直径为I1.mm的血斑。3）在采血卡上粘贴唯一样本编号标签.4）常温晾干，避免阳光及紫外线照射、烘烤、挥发性化学物质等污染.5）将隙干的血片固尸密封袋内保存.6）在新生儿听力与遗传性耳聋基因联合筛查送检第（参见附录C）上填写样本信息.申清检测者和送检医生均需在送检单上签字。7.2.3.2样本在常温下运输保存不宜超过5天。7.24检测工作流程7.2.4.1样本接收：核对样本编号.送检单及知情同意书对符合要求的样本接收、登记并在送检单上签字。对不符合要求的样本，拒收、赞记并通知JR新采样，7.2.4.2DNA提取：按照DNA提取试剂盒说明书操作要求进行DNA提取.提取过程中,设置阴性对照，提取好的DNA样本可曲存于4C冰箱中，长期应保存于20C0射于冻存的DNA样本，-20C保存不超过2年,反纪冻融不超过5次.7 243PCR扩增和廷仰反应1）通过多或PCR扩增,获得纪序列扩增产物。2）使用虾碱性璘酸梅处理扩增产物,除去扩增产物中的NTPs.3）加入延伸引物进行通械基延伸反应，在延伸引物3'濯连接一个与突变位点互补的Itt基.孩得小片段单链延伸产物.8 .2.4.4产物纯化和质谱上机1）使用阳肉子交换树脂纯化延伸产物.除去延伸产物的阳离子.2）用基痂辅助激光裤吸附/电离飞行时间质谱技术（MA1.DITOF-MS）对纯化后的产物进行质谱检测.7.2.4.5数据分析：使用MaSSARRAYTyper系统时耳莲菸因筋自信息进行数据分析，7.2.4.6出具报告：通过报告系统生成报告单,并反馈给受检者监护人.检测报告包含送检信息、受检者基本伯恩和检测结果等内容.新生儿听力与遗传性耳弹基因联合筛吉报告单参见附录D.7.3质量控制7.3.1新生儿听力筛查程序的初筛.立崎、阳性病例确渗和治疔的机性设置、房屋与设法和人员要求应符合卫生部£新生儿听力能杳技术规范3的要求，7.3.2新生儿遗传性耳母基因筛查相关人员应接受生物安全、检测技术等专业均训，持证上岗.7.33新生儿遗传性耳黄触因筛食机构应配备必要的基础设施和适宜的检测环境，对设施和环境进行监控.734新生儿遗传性耳苑地因箭杳时应设立阴性'市更对照,确保每次检测的质Iih如阴性而照与预期结果不相符时，进行原因分析并采取纠正措施，形成出面记录.X.1听力筛查与遗传性H总基因筛查均通过且无高危因素的新生儿,传授监护人各年龄段相应的听性行为反应观察方法知识及发放科普宣教资料。听力筛查与遗传性耳差基因筛资均通过但具有高危因素的新生儿，应当定期跟踪追访到3周岁，在随访过程中怀疑有听力损失时，应当及时到听力障碍诊治机构就诊,新生儿听力损失高危因素参见附录E.8.2 听力筛查通过但遗传性耳隹基因筛查未通过的新生儿，进入高度预警程序,进一步进行基因诊断、遗传咨询以及听力学监控，井陆访。8.3 遗传性可爱明因筛杳通过但听力篇查未通过的新生儿，进入听力学诊断程序。听力女蹄未通过的新生儿.在出生3个月内诳行第一次诊断性检查，对确诊为听力障碍的患儿应当在6个月内进行相应的临床医学和听力学干预,并定期跟踪追访至6周岁（银半年至少1次）.8.4 听力筋杳与遗传性耳势聪因筛食均未通过的新生儿，进入听力和%因的联合诊断程序，进一步确诊和随访.8.5 遗传性耳花基因筛查结果未通过表示发现检测范阳内的基因突变.其指导意义如下:8.5.1对于城粒体12SrRNA基因突变检测为突变的新生儿，其终身应避免使用M型精仃类药物以防止的物性耳筐发生。8.5.2对于常染色体隐性遗传基因统合突变或单基因坡合杂合突变的新生儿，其可能于出生时出现耳蓬联状,须尽早进行临床医学和听力学干预。8.53对于常染色体隐性遗传域因杂合突变的新生儿,其为致准突变基因携带者本身不发病，若日后与具有相同基因型的携带者始则其后代发病概率为25%.8.5.4对于常染色体显性遗传基因统合突变或杂合突变的新生儿，其可因该基因突变而导致耳蓬.部分人群可表现为迟发，应定期监测，一旦发现听力下降，即给予早期干预和治疗。9.1 追踪随访对象为出生时存在径烧高危因素者、听力箍食未通过老、遗传性耳径法因筛查未通过者以及听力筛查和遗传性耳连基囚筛查均未通过者.9.2 如实登记随访结果,保存随访资料.总结统计分析.评估筛件效果.并指导儿氽听力测试和保健.附录A（资料性附录）新生儿听力筛查知情同意书新生儿听力篇查知情同意书母亲姓名:新生儿性别：出生日期:住院病历号：新生儿听力筛查是根据中华人民共和国母婴保健法实施办法、卫生部£新生儿疾病筛查管理办法在新生儿期对严重危害新生儿健康的先天性、遗传性疾病实施的专项检查.目前主要采用的新生儿听力筛查技术有耳声发射和自动听性腑干反应等技术。这些技术都是客观、破感和无创伤的方法。缩变结果分为通过和不通过两种,筛查结果不通过者,应当在42天内到筛查机构进行更筛,未通过能筛的婴儿需在3个月解内到省徽R生行政部门指定的听力障碍珍治机构进一步确诊.筛查费用元，由支付.知情选算我已经充分了好了该项检查的性质、合理的预期目的、风险性和必要性，对其中的疑问已般得到医生的解答.我同It按却生儿听力篇查.我已被告知孩子患耳无可能导致的不良后果，我不同意按爻新生儿听力篇叠.监护人签名（正楷）年_月_口监护人身份证号:监护人现住地址：省（区、市）州（市）县（市、区）乡（流）/街道村/号监护人联系方式：电话（手机号胆箱第杳财人员献我已经告知监护人该新生儿珞要进行听力筛查的性质、目的、风险性、必要性和费刖，并旦解答了关于此次筛查的相关问跑.筋杳技术人员筌名：年_月_日附录B（资料性附录新生儿遗传性耳务基因解查知情同意书新生J1.it传性耳聋基因篇查知情同意书母亲姓名r新生儿性别：出生日期1住院病历号:耳杳是临床上常见的疾病，在新生儿中严杀听力障网发生率为1%3治，其中一半以上与遇住因素有关.通过对新生儿出生后采集脐带血或足跟血，is行常见遗传性耳先施因进行筛查，可以及早发现携带耳花基因的先天性住儿、迟发性花及药物敏感性隹的高危儿，为后期的诊断及治疗提供科学依据，布助于及时采取干预措施预防吉谙阳科的发生.将有效的降低t哼发病率.局隈性说明1.iS传性耳隹涉及的基因众多，该检冽项目只包括其中4个基因（GJB，QJB3、S1.C26A4和12SrRNA）共20个位点的突变检测,其它位点突变或其它基因突变造成的遗传性耳蓬不在检测范围内,因此可能出现听力筛查不通过他遗传性耳聋基因筛变正常的情况,或听力筛查通过但遗传性耳姿基因筛查异常的情况，两者均M正常，具体报告解择及疾病诊断可咨询专业医师，2 .鉴于当前医学检测技术水平的限制和个体差异等不同原因,即使在检测人员已经履行了工作职费和操作规程的前提下，仍有可能出现线阳性或假阴性.3 .本校测结果仅供参考，不作为最终诊断结果,若因受检者不当使用该结果，由此带来的心理、生理负担，医院及检测机构不承担贡任和风险，知情选界I,我已知晓该检测的性质、预期目的、风险和必要性，对其中的疑问已经得到医生的解答。4 .医生己告知我将要进行的依测方法的相关内容：我并未得到该检测方法百分之百准确率的许诺。5 .我承诺提供的相关信总真实可独：并授权医生时检测涉及的血液、血片及医疗废弃物等进行处理。6 .我知晓该检测技术的先进性.该结果作为参考，需根据其它检查结果综合分析.我已知«1.h处所Ir内容，HJft控受该事检舞、同谶回访，并承担因树M带来的相关风险.我已知晓上述所有内容，不JUt按爻该项检,并承担相关地.监护人签名（正精）年一月日监护人身份证号：监护人现住地址：省（区、市）州（市）县（市、区）乡（锁/街道村/号!Ki护人联系方式：电话手机号Iieffi我已经告知监护人该新生儿将要进行遗传性耳聋基因卸置的性质、目的、风险性、必要性、费用，并且解答了关于此次检测的相关问题。医生签名（正椭）：签名H期：附录C（资料性附录新生儿听力与遗传性耳省然因联合筛查送检单新生儿听力与遗传性耳衽因联合if查送检单送检日期：I送检单位：I送检医生：样本编号：受检者基本信息犍别，I出生BN1.：K恢：Nm姓正：分娩方式：WAUMtn1.J的户口的生体皿；UIK%地址，IM«>t1.ifi>孕期病史：无疾病口风疹口单纯拘疹病毒感或口巨细胞烧毒5央口弓形虫感染口猴红热口流行性腮腺炎口知毒性肝炎口其他疾病口孕期用药史：无口有口,详细才父母近亲结婚：是口苦口&述（若有）：新生儿NICU史：有口无口三代以内的家族成员是否有耳伟患者：有口无口如有，请填写：耳隹患者共名，分别与受检者关系采祥11期;样本来源：足跟血口脐带血口其它口样木类型；采血卡口其它口检项目听力筛杳听力初筛（TE0,EDK）AR）左耳：口通过口未通过右耳口通过口未通过听力复笳（teoae/dpoae）左耳：口通过口未通过右耳口通过口未抽过听力玄箭（MBR/ABRWfi左耳：口通过口未通过右耳：口迪过口未泡过遗传性耳善基因筛查基因检测位点GJB235dc1.G167de1.T176_191dd1623SddC299JWOddATS1.C26A4281CTT589GAIVS7-2A-G1174ATT1226CiA1229CTIVS1.5+5GTA1975GTC2027TTA2I62C-*T2168ATG!2SrRNA14WCTI555AGGJB3538CT547GA信息确认上述信息对检测结果有虫要意义，申请检测者及送检医生均已如实填写并对上述信息准确性负贡。申请检测者签名（正楷）：送检医生签名（正楷）：附录D(资料恒附录)新生儿听力与遗传性耳氽基因联合筛查报告单新生儿听力与遗传性耳1»因联合篇查报传单样本侑息送检单位:送检科室;送检医生：送检编号:样本编号:样本类型：收样日期:父(母)姓名：新生儿姓名：性别：出生日期：父(母)联系电话:联系地址：听力m结果听力初筛(TE0EDP0E)左耳：通过口本通过口右耳：通过C1.未通过口听力更筛(TEOEDPOAE)左耳：通过口未通过口右耳：通过口未通过口听力复筛(AABRBRf)左耳1通过口未通过右耳：通过口未通过口遗传性耳社因母制果任因检测位点检测结果暴因型正常/突变GJB235de1.GGG167de1.TTI76.1.91.de1.1.6GCGCAGACGTGTGGCTGCAAGAACGTGTG.Gctgcaagaacgtgtg235dc1.CCC299-300de1.ATAT.ATGJB3538C>TCC547OAGGS1.C26A4(PDS)281C>TCC589G>AGG1174A>TAA1226G>AGG1229OTCC1975G>CGG20271>ATT2162C>TCC2168A>GAAIVS7-2A>GAAIVS15+5G>AGGMT-RNR1.(12SrRNA)1494C>TCC1555A>GAA1 .本报告结JK只对本次送检样本鱼血.2 .本报告仅对报告内所列出的检罚礼因及位点负贫，此外的星内或内点突变不在本检测范W内.3 .以上结论均为女胸空检测致据,仅用于突变检测之目的，仅供临床畚考,由于个体系异以及其也不可控因素，可能出现假阳性或假阴性结果，如需进步的诊断和治疗.SHWMII关医院专科医和.检测者：审核者：报告日期:附录E（规范性附录）新生儿听力损失高危因素!.新生儿重症监护病房（NICU）住院超过S天。2 .儿童期永久性听力障碍家族史.3 .巨细胞病毒、风疹病毒、疱疹病册、桁得或盘浆体原虫（弓形体）病等引起的宫内感染.4 .陵面形态畸形，包括耳廓和耳道畸形等.5 .出生体Hi低于1500克。6 .高眼红素血症达到换血要求.7 .病毒性或细菌性脑膜炎.8 .新生儿室息（APgar评分I分钟（M分或5分钟0-6分）。9 .V产儿呼吸利迫综合征10 .体外脱氧。11 .机械通气超过48小时.12 .母亲孕期曾使用过耳毒性药物或科利尿剂、或滥用药物和酒精.13 .临床上存在或怀疑布与听力障瑾。关的综合征或遗传病.参考文献11新生儿疾病能杳管理办法（卫生部令第81号）2新生儿疾新筛杳技术规范（2010年版）