《广藿香组培苗生产技术规程》编制说明.docx

广霍香组培苗生产技术规程（送审稿）编制说明一、任务来源、起草单位、主要起草人根据云浮市市场监督管理局关于征集2022年度市级地方标准制修订计划项目的通知（云市监科字（2022）4号）文件精神，由云浮市中医药局提出，广东至纯南药科技有限公司、广西壮疑自治区中国科学院广西植物研究所、罗定市百草源种养专业合作社等单位起草云浮市地方标准广港香组培苗生产技术规程。为高质量编制云浮市地方标准广麦香组培苗生产技术规程，由起草单位成立标准编制工作组并进行如下分工：二、制定标准的必要性和意义中药材广卷香来源于唇形科植物广茶香Pogostemoncah1.in(B1.anco.)Bcnth的干燥地上部分，其味辛，性微温；归脾、胃、肺经，具有芳香化浊、发表解暑和开胃止呕等功能。临床上主要用于湿浊中阻，胸闷不舒，脱痞呕吐，署湿倦怠，腹痛腹泻等症的治疗。广着香还是“奢香正气水”、“着香正气液”和“抗病毒口服液”等多种中成药的重要原料药。此外，广港香提取的特殊芳香味的挥发油，也是日用化妆品工业的重要原料之一。广茬香原产于菲律宾、印度尼西亚等东南亚国家，现在广东省的广州、肇庆、湛江、云浮等地及海南、广西等省区均有栽培。据文献记载，广茬香最早于宋代传入我国，引种在广东地区，故名广演香。我国广藤香种植区域包括广东、海南和广西，以广东省种植面积最大。全省广芨香种植地主产区集中分布于粤西、粤中地区。据调研，广东省广蒙香种植总面积在2.535万亩之间，其中：云浮市广茬香种植总面积1.3万亩，形成有一定规模生产的主产区主要在罗定市、郁南县、云城区等地。广馨香药材亩产量为8001100kg/亩。通常广花香药材正常收购价在1016元kg,近两年因新冠病毒疫情发生后，由于临床用药的需求，市场对广港香药材原料需求剧增，20202021年间广重香药材原料已涨到4060元/kg。随着广藤香资源的开发利用拓展，市场对广森香原料需求量会越来越大。随着种植规模的不断扩大，广番香苗木的需求极为旺盛。由于气候等生态条件不同，广皆香引进我国栽培后，罕见开花结籽,故长期采用杆插繁殖。传统的剪枝杆插种植模式虽然简单易行，但长期采用杆插繁殖,易引起植株生长缓慢、参差不齐,且病虫害发生率高、抗逆性弱,单位产量低，故亟需寻找新的广蕾香种苗繁育方法。植物组织技术比常规育种繁殖系数及成活率高，能在短时间内育出大量幼苗，广蕾香组培苗繁育技术不仅可以为种植单位周年提供优质的无菌种苗，而且还能结合化学诱变技术高效地创造遗传突变体，为创造和丰富广麦香突变体基因库提供技术支撑。为让种植户了解并掌握广建香组织培养的方法，为产业提供优良的种源，促进广营香产业健康发展，必须尽快制定广麦香组培苗生产技术规程，以满足市场需求。制定地方标准广装香组培苗生产技术规程可以为广着香优质苗木生产提供规范依据和技术支持，对促进广东广差香产业的健康发展有着重大的现实意义。三、主要起草过程（一）成立标准编制工作组云浮市地方标准广重香组培苗生产技术规程项目任务下达后，成立了标准编制工作组，制定了标准编写方案，明确任务职责，确定工作技术路线，开展标准研制工作，具体标准编制工作由广东至纯南药科技有限公司、广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所、罗定市百草源种养专业合作社等单位相关人员配合。编制工作组下设二个组分别是资料收集组、草案编写组。资料收集组负责国内有关广着香组培苗生产技术的文献资料的查询、收集和整理工作。草案编写组负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作，包括后期召开征求意见会、网上征求意见，以及标准的不断修改和完善。（二）收集整理文献资料通过在全国标准信息公共服务平台搜索（DB4408/T9-2021地理标志产品遂溪广素香QB/T2522-2011广腐香（精）油QB/T2795-2010食品添加剂广茯香（精）油QB/T2522-2001广霍香油GB11961-1989食品添加剂广着香油（三）研讨确定标准主体内容标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究后，标准编制工作组召开了标准编制会议，对标准的整体框架进行了研究，并对标准的关键性问题进行了初步探讨。经过研究，标准的主体内容包括广点香组培育苗的瓶苗培育、瓶苗移植、包装与运输的技术要求。（四）调研、形成草案、征求意见稿、送审稿2022年7月2022年10月，标准起草工作小组进行了广泛实地调研工作，查阅了大量的国内外文献资料，对广菱香组培技术进行系统总结。经编制组反复讨论，形成了标准的基本构架，对主要内容进行了讨论并对项目的工作进行了部署和安排。2022年11月，在前期工作的基础之上，通过理清逻辑脉络，整合已有的参考资料中有关广点香组培生产技术的内容，并结合云浮市环境特点的基础上，按照简化、统一等原则编制完成云浮市地方标准广府香组培苗生产技术规程（草案）。2022年12月2023年3月，编制组再次深入广东、广西等广府香生产企业进行分组调研，并向广盛香种植、销售的相关科研单位、企业征求生产技术意见。根据反馈意见及试验成果，标准编制工作组多次召开会议，对标准草案进行反复修改和研究讨论，形成云浮市地方标准广亚香组培苗生产技术规程（征求意见稿）和（征求意见稿）编制说明（第一次）。2023年4月2023年5月，根据专家反馈意见及试验成果，标准编制工作组多次召开会议，对标准进行反复修改和研究讨论，最终形成云浮市地方标准广花香组培苗生产技术规程（征求意见稿）和（征求意见稿）编制说明（第二次）。2023年6月2024年8月，在征求意见的基础上继续对文稿进行修改，形成云浮市地方标准广腐香组培苗生产技术规程（送审稿）和（送审稿）编制说明。四、制定标准的原则和依据，与现行法律、法规的关系，与有关国家标准、行业标准的协调情况（一）编制原则1、实用性原则本文件是在充分收集相关资料和文献，分析广茬香组培技术的特点，在现有国家、行业标准相关广盛香技术的基础上，结合多年实践而总结起草的。符合当前云浮广蓄香生产的要求，有利于行业的长远发展，具有较强的实用性和可操作性。2、协调性原则本文件编写过程中注意了与广腐香相关法律法规的协调问题，在内容上与现行法律法规、标准协调一致。3、规范性原则本文件严格按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写的要求和规定编写本标准的内容，保证标准的编写质量。4、前瞻性原则本文件根据当前云浮境内广菱香组培生产的现状，同时考虑生产区及苗木的生长特性，在标准中体现了个别特色性、前瞻性和先进性条款，作为对广芨香组培苗生产的指导。（二）编制依据云浮市地方标准广蕾香组培苗生产技术规程主要内容包括广芨香组培育苗的瓶苗培育、瓶苗移植、包装与运输的技术要求。主要调研基础上结合起草单位实际经验起草。（三）与现行法律、法规的关系，与有关国家标准、行业标准的协调情况本标准与相关法律法规、强制性标准协调一致，无冲突。经查阅，与广海香相关的国家标准、行业标准、地方标准和团体标准有：DB4408/T9-2021地理标志产品遂溪广港香、QB/T2522-2011广卷香（精）油、QB/T2795-2010食品添加剂广壁香（精）油、QB/T2522-2001广芨香油、GB11961-1989食品添加剂广藤香油。以上5项标准主要针对广港香精油等进行了规范，未涉及组培苗生产技术规程方面，无法有效指导广族香组培苗生产工作。五、主要条款的说明（一）主要内容云浮市地方标准广芨香组培苗生产技术规程主要内容包括范围、规范性引用文件、术语和定义、瓶苗培育、组培苗驯化、苗木包装与运输。其中，外植体根据企业自身经验及总结相关文献的报道，规定了外植体的选择、消毒灭菌、接种等一系列技术要求；组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。不同培养基有不同特点，适合于不同的植物种类和接种材料。开展广芨香组织培养活动时，起草单位前期对各种培养基迸行比对和分析，并综合组培成功率和节约成本等多当面考虑，不断优化配方，最终确定了本文件中的培养基配方；组培苗驯化其依据主要根据企业及个体户多年的经验做法，以及课题组多年的研究，主要规定了育苗棚搭建、苗床准备、容器与基质、炼苗、移栽和苗期管理；包装和运输主要规定了广凄香组培苗出圃时的包装等相关指标。（二）关键技术数据来源1、外植体取材部位选取当年生无病虫害且生长健壮的广茬香的嫩茎、嫩叶、老茎、老叶，4类材料，进行消毒灭菌。结果发现，嫩叶诱导出的丛生芽较多，但后期玻璃化、污染率较高。嫩茎诱导出的丛生芽虽较少，但苗木长势壮实。老茎、老叶因生长时间长，表面携带的微生物较多，不容易灭菌，污染率较高。综合考量，嫩茎是广着香组织培养理想的外值体选择。2、外植体消毒选取当年生无病虫害且生长健壮的植株,取其嫩茎,带回实验室。首先设置了手洗、机洗两种清洗方式，接种后发现可能是由于清洗方式给组织造成了损伤，导致细胞质外流，接种后极易发生发黄现象，故该两种清洗方式不适宜广盛香组培，后期选择了清水冲洗的洗涤方式。继续探讨了酒精单独消毒、升汞单独消毒和酒精与升汞联合消毒几种消毒方式，发现两种溶液单独消毒的效果都较差，酒精与升汞联合消毒的效果较好。接着探讨了用0.1%HgCI2溶液浸泡5、7、9、11、Cmin后的消毒效果,结果发现：嫩茎在0.1%HgCI2溶液中适当的消毒时间为57min。表1不同清洗方式对外植体污染的影响清洗方式效果自来水冲洗表面520min,过3次清水，无菌条件下无菌水冲洗I次，接种后易75%乙薛消毒30s后进入0.1%升汞溶液浸泡7-9min,再用无菌水冲洗5-6污染次。自来水冲洗表面2O3Omin,过3次清水，无菌条件下无菌水冲洗I次，接种后正75%乙醉消毒30$后进入04升汞溶液浸泡79疝11,再用无茵水冲洗56常次。接种后外机洗（超声波）表面2O3Omin,过3次清水，无茵条件下75%乙醇消毒植体易发30S后进入0.1%升汞溶液浸泡79min,再用无菌水冲洗56次。黄自来水冲洗表面2O3Omin,过3次清水，无茴条件下75%乙酣消毒30s,污染严重再用无菌水冲洗56次。无菌条件下无菌水冲洗I次，75%乙醉消毒30s后进入0.1%升汞溶液浸泡污染严重7-9min,再用无曲水冲洗56次。表2不同升汞消毒时间对外植体污染的影响外植体开汞消毒时间/S污染率/%茎555758966I1.703、初代诱导将消毒灭菌后的茎段接入下面5种培养基中进行腋芽诱导：(1)MS+()mg1.6-BA+0.1mg/1.NAA,(2)MS+0.3mg/1.6-BA+0.1mg/1.NAA,(3)MS÷0.6mg1.6-BA+0.1mg/1.NAA,(4)MS+0.9mg/1.6-BA+0.1mg/1.NAA,(5)MS+0.9mg/1.6-BA+0.1mg/1.NAA,以上培养基PH=5.86.0,糖浓度为3%,琼脂浓度0.5%,每处理接种50个茎段，重复3次。结果表明，含有激素的各培养基均形成愈伤组织，并发生不定芽，不定芽的数量随6-BA浓度的变化而存在显著差异。总体趋势是，低浓度的6-BA处理中不定芽较多，且后期的生长较为旺盛；随着6-BA浓度的升高，不定芽数量呈降低趋势，且后期玻璃化现象较为严重。说明高浓度的6-BA不利于广着香不定芽的生长。综合考虑，6-BA适应的浓度为0.3mg/1.,此时愈伤组织和不定芽的诱导率都较高。4、继代增殖培养在前期继代培养的基础上，以MS为基本培养基，添加不同浓度的6-BA(0.10.5、1.0和2.0mg/1.)、IBA(0.01、0.02、0.06和0.08mg/1.)和NAA(0、0.1、0.5和1.0mg/1.),采用正交实验设计表1.6(43)对3种植物生长调节剂的4个浓度水平进行优化筛选，各处理培养基均添加蔗糖30g/1.、琼脂5.5g1.,pH5.86.0。将初代培养诱导的小芽分割成含23个单芽的小丛，接种于按照表3设计的正交培养基上进行增殖培养。每处理1()瓶，重复3次，3()天后记录芽苗高度和增殖倍数，并观察茎叶生长情况。增殖倍数为以母瓶培养时接种的材料规格和接种数为标准，每一母瓶材料所能扩繁的瓶数。结果表明，14号培养基上的芽苗叶片宽厚，植株整体外观较好；58号培养基上的芽苗长势一般，叶片中等大小；9I2号上的芽苗叶片相对较小，有较多丛生芽发生；1316号上的芽苗叶片小，且有发黄现象，部分材料出现变异，生长缓慢，整体培养效果差。在前期试睑的基础上可知，培养效果差异明显的情况下，为减少变异机率及降低成本应尽量选用较低浓度的激素。故后续选择组合2和组合3进行了对比试验，结果表明组合2的效果更为稳定，故最终确定组合2为广重香继代增殖培养的最佳培养基配方。表3广麦香继代培养的正交设计与结果编号.-植物康素mg1.-繁殖系数/倍生长情况6-BAIBANAA10.10.0105.0芽长势一般，叶中等20.10.020.17.0芽生长良好，叶大30.10.(M0.57.1芽生长良好,叶大40.10.0X1.06.0芽生长一般，叶大50.50.010.18.4芽生长一般,叶中等60.50.0207.1芽生长一般，叶中等70.5OXM1.08.0芽生长一般，叶中等80.50.0S0.56.2芽生长一般，叶中等91.00.010.58.0丛芽多.长势一般，叶中等I1.IO1.00.021.09.0丛算多,长势一般.叶中等I1.1.003O7.0丛芽多,长势一破,叶片小121.00.0X0.16.5丛芽多，长势一般，叶片小132.00.011.05.0芽生长不良：叶片小142.00.020.53.6幼苗有交异：叶片小152.()OXM0.13.0芽生长不良：叶很小162.00.08O1.8芽生长不良,部分死亡5、生根诱导培养在前期广卷香组织培养试验基础上，将增殖培养后叶片展开、生长健壮、高2.53.0cm的丛芽切成单芽，接种于含有不同浓度IBA的生根培养基中，设IBA浓度为0.1、0.25、0.5、1.Omg/1.,以上培养基中还添加蔗糖30g/1.、琼脂5.5g1.,pH5.86.0,每种培养基分别接种100株苗，比较生根情况，25d后统计生根指标。结果表明，在不同的生根培养基中，广蕾香的生根率都很高,属于易生根的品种。随着IBA浓度增加，广港香的生根时间逐渐加快，但太高的激素浓度会促进根部愈伤组织的产生，容易出现畸形苗，苗木生长不正常，甚至会停止生长。由于是易生根品种,相对较低的激素浓度对广者香的生根培养比较有利。通过比较，接种25d时，IBA浓度为0.25mg儿生根培养基的生根效果最佳。图广君香组培苗生根培养6、生根培养试验结果验证对前期试验结果进行统计分析，总结出优选培养方案，并通过验证试验及扩大生产对优选方案进行可靠性检验。验证试验每处理接种20瓶，重复3次；扩大生产每处理至少100o瓶，随机统计I(X)瓶。结果表明，以MS+0.25mg1.IBA为生根培养基，其生根率可达95%以上，该培养基可用于广营香组培苗生根培养。7,不同炼苗时间不同炼苗时间影响最大的是成活率，炼苗时间短组培苗对外界环境条件还未适应，移栽后成活率低；时间太久，培养基已经发毒，瓶内的小苗受到污染，影响生长。在生根数及株高上，炼苗时间越长的处理，指标越高，综合所有指标，715d的炼苗时间最佳。表4不同炼苗时间组培苗的生长状况炸苗时间M成活率/%790%IO92%1590%2085%8、移栽基质将生长健壮、根系发达(长1.52.0cm)的小苗从培养室移到炼苗棚710d,打开瓶盖洗净培养基，移栽于表6配方的基质中，基质装入10cm×10Cm的营养袋中，并在移栽前用多菌灵进行消毒备用。结果发现，4种基质中以园土:泥炭:珍珠岩=3:1:1(vvv)为基质的移栽效果较好，植株恢复快，成活率高达92%。但该基质在后期苗木移栽中易发生伤根现象，且该基质成本较高。故综合考量移栽成活率和生产成本，选择移栽成活率高且后期移栽时不易伤根的谷壳作为育苗基质。表5不同培养基质中组培苗的生长状况基质成活率，%组培苗长势回土:泥炭:珍珠岩92%长势正常靖泥+脚糠83%长势正常塘泥+煤灰75%长势正常谷壳90%长势正常9、遮阴时间将生长健壮、根系发达（长1.520Cm）的小苗从培养室移到炼苗棚710d,打开瓶盖洗净培养基，移栽于谷壳中，基质装入IOCmX1.OCm的营养袋中，并在移栽前用多菌灵进行消毒备用，然后进行不同时间的遮阴处理。结果发现，过早撤去遮阳网较易发生叶片荽焉等现象，20d后苗木基本恢复正常长势，此时撤去遮阳网不影响苗木的长势。表6不同遮阴时间组培苗的生长状况遮阴间/d成活率/%580IO8315902092259210、出圃时间将生长健壮、根系发达（长1.520Cm）的小苗从培养室移到炼苗棚710d,打开瓶盖洗净培养基，移栽于谷壳中，基质装入IOCmX1.（）Cm的营养袋中，并在移栽前用多菌灵进行消毒备用，前20d进行遮阴处理。结果发现，60d左右时苗高1540cm,地径23mm,可出圃种植。表7不同时间组培苗的出圃培养时间M成活率加2()7()40726090809111、水肥管理将生长健壮、根系发达（长1.52.0Cm）的小苗从培养室移到炼苗棚7IOd,打开瓶盖洗净培养基，移栽于谷壳中，基质装入IOCmXIOCm的营养袋中，并在移栽前用多菌灵进行消毒备用，前20d进行遮阴处理，然后喷施不同浓度的水溶肥。结果发现，水溶肥EC值为0.52.0mS/cm时既可促进苗木的生长，还不易发生烧苗现象。12、生产应用标准起草单位2022年初选用生产的广港香组培苗种植于云浮市镇安镇广蕾香种植基地。2022年11月底，组织相关专家对基地的广点香长势进行了现场查定，当年种植的广腐香组培苗高可达1.21.5m,与杆插苗等基本一致。六、重大意见分歧的处理依据和结果本标准研制过程中无重大分歧意见。七、实施标准的措施1、云浮市地方标准广装香组培苗生产技术规程发布后,积极向有关行政主管部门宣传，向与广慈香生产相关的企业单位进行宣传，向关于广蕾香栽培的种植户等推荐执行本标准。2、由广东至纯南药科技有限公司、广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所、罗定市百草源种养专业合作社等单位牵头举办培训班或宣贯会，以促进本标准的贯彻实施。八、其他应当说明的事项无。云浮市地方标准广善香组培苗生产技术规程标准编制工作组2024年8月5日