抗菌药物最小抑菌浓度的测定.docx

抗菌药物最小抑菌浓度的测定一、概念：最小抑菌浓度(minimuminhibitoryconcentration,MIC)：在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于定量测定体外抗菌活性。二、试验目的：通过采纳常量稀释法，检测几种抗菌药物对-菌株的最小抑菌浓度(M1.C),对临床诊断用药有指导作用。三、仪器和试剂：MH液体培育基无菌试管分光光度计05麦氏标准比浊管MH琼脂微量加样器蒸储水吸头0.1mo1.磷酸缓冲液(PH6.0)接种环无菌生理盐水无菌平板无菌滤膜0.22无菌针筒金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌抗菌药物四、检脸方法：液体稀释法、琼脂稀释法、E试验(Etest)液体稀释法操作步骤：抗菌药物原液配置OOOOOOOOOOOOOMH液体试管中抗荫药物树咬稀择1.抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于100ogm1.(如1280gm1.)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度.所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如：需配制100mI浓度为1280gm1.的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750gmgo用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6mgo依据公式计算所需稀释剂用量为:(182.6mg×750gm1.)1280gm1.=107.0m1.然后将182.6mg抗生素粉剂溶解于107.0m1.稀释剂中。制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表Io配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-2Ob环境，并留意抗窗药物的保存期限。表1稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法药物浓度(ugm1.)取药液运加稀释剂药物稀释浓度(ugm1.)琼脂或肉汤中最终含药浓度(ugm1.)药物：琼脂(或肉汤)=1：9(m1.)量(m1.)5120105120512512011256025651201312801281280116406412801332032128017160161601180816013404160172022011101201350.520172.50.252.5111.250.1252.5130.60.062.517°30.032 .药敏试验用抗菌药物浓度范围依据NCC1.S抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特别状况例外。3 .培育基NCC1.S举荐运用MUeI1.er-HintOn（MH）肉汤,pH7.2-7.40需氧菌与兼性厌氧菌在此培育基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯理西林的敏感性时,应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制须要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌运用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌运用含2%5%溶解马血的MH肉汤。4 .接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相像待检菌落3-5个，接种于4-5m1.的水解酪蛋白（MH）肉汤中.35C°捋育2-6h0增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1.21.O8CFUm1.°二是干脆菌落悬液配制法.对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌与甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，举茬干脆取培育18-24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。用MH肉汤将上述菌悬液进行1：1稀释后备用。留意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培育，以检查接种物纯度.5 .稀释抗菌药物的制备与菌液接种取无菌试管（131.0Omm）13支，排成一排，除第1管加入ISmIMH肉汤外，其余每管加入MH肉汤1m1.,在第1管加入抗菌药物原液（如1280gm1.）0.4m1.混匀,然后吸取Im1.至第2管,混匀后再吸取Im1.至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取Im1.弃去，第12管为不含药物的生长比照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25gm1.然后在每管内加入上述制备好的接种物各Im1.使每管最终菌液浓度约为5×105CFUm1.第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125gm1.o另外设比照3支,别为肉汤比照、质控菌比照和待测菌生长比照。6 .孵育将接种好的稀释管塞好塞子,置35C。一般空气孵箱中孵育1620h；嗜血杆菌和链球菌在一般空气捋箱中孵育2024h；对可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应持续孵育满24h07 .结果推断与说明在读取和报告所测试菌株的MIC前，应检查生长比照管的细菌生长状况是否良好，同时还应检查接种物的传代培育状况以确定其是否污染，质控菌株的M1.C值是否处于质控范围。以肉眼视察，药物最低浓度管无细菌生长者，即为受试菌的MIC0甲氧莘胺喀咤或磺胺药物的肉汤稀稀法终点推断，与阳性生长比照管比较抑制80%细菌生长管药物浓度为受试菌MIC。【MIC参考范围】表2稀释法质控标准菌株M1.C预期值范围(ugm1.)抗菌金黄色韵萄球菌粪肠球菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌药物(ATCC29213)(ATCC29212)(ATCC25922)(ATCC27853)青客0251.01.04.0-素G0.12*0.5-,-苯嗖0.52.0-西林-0.52.02.08.0-甲氧-1.04.01.04.0西林0.12-0.5-4.0-16-氨0.251.0-1.04.0-西林-2.08.0-哌拉0.06-0.51.04.0西林0.03-0.1216-64头抱0.06-0.252.08.0嚏吩0.121.0-0.251.01.04.0头抱-0.54.02.08.0理咻0.060.25-头抱。120.51.04.0-味辛0.52.01.04.0-头½0.120.50.252.00.0040.0150.25-1.0他咤头走理的氨曲南庆大霉索阿米卡星克林霉素红寄妻春万古霉素环丙沙星常用抗菌药物稀释和配制方法药物淞件SP到方法吉索索NS一次氨茎西林NS一次芒西林I年疑辛西林经FnN一:欠NS一次阿茸西林就名NS一次阿莫西林舒巴Ms-一次阿苴西林市栉ZS一次奈夫西林NS一次阿潴西林5½GNSS-1S一:攵隹。先用IDm1.注射用水溶解英洛西林CiWGZSS-IeWIGS一次羊洛西林肄FDNS53GNS5.10iGS二次弁用活岳注射用水或小理卦水溶?羊叁羊西林5%G,S一次楼士西林西希SQiG一次去用Iom1.洋朝用水溶儆脏折西林*一次眼拉西林他建SQiGNST欠盛栉西林钾FnSWGNS一次末建西林NSGS一次斗葩睡啾NSGS一次弁用注射用水溶解王水斗葩成啾NSs%一次雄田洋酎田水冷g斗葩痴联NS一次斗洵陵吩NSSS一次.#4C用20m1.注卵田水溶融句吐空干一次斗狗羊砰NSGS一：欠斗福林心NGS一次以憎NSGS一次斗狗尼.西NSS.1二次斗狗西工NSs-10一次4询法名NSSGS一次头抱他定斗胸曲松NS5%GS一亦NSs%一；欠余用/钳用水NS-CS酊.成C1.C/m1.义购庭酣GNs一次柒法度为S-2Smm1.头葩口底酮舒FNSS%S一次Ia-水溶后总量4m1.1.用同一溶媒溶解C斗苑皿酿他型Ns%S一次去用汴钳用水NSS-ICIm1.溶蒯将浦斗询NSSGS一次纵询米诺N.S.5J0G.S一次斗旃阵后NS1GS一次4洵i哮N林格tGS一次4U旬甲股NSGS一次斗旃ITU睹NSGS一次斗和酎后NSGS一次斗J句兀号NSGS：欠而睹培南西百NSGS一:欠至用搞南NSS-10S；一次可先用分活海体加制布曲古MQ匚1CXUQ一%1c牛田石/卜OeI：士也田7上京钮奴冲底木物阿奇霉素N.S,5%G.S二次.先用注射用水稀释成0.1mgm1.,再稀释成终依林来星NSSS一次名西环素Mq一次牛田ftf用水或营神宏游珠母F1m11m1.事林雷宏升一次万古累素NS5%GS一次牛用IOm1.注射用水溶再加入至分，OCmI去甲万古霉素N.S,5%G.S二次.先用注射用水溶解.再用至少200m1.液体慢替考拉宁N.S,5%G.S二次.先用注射用水溶解，双手滚动小瓶至药粉全i簿处居%11一次宝后讨星SS一次洛美沙星NSSS一次先用5m1.射用水溶解大蓊絮汕星NSGS一次加恭沙尾NS5咻GS一次族浓府为2mcm1.依诺沙星KWCST欠他珠讪比NS一次利油空素5%GS一次案座鹿无T欠两性霉素B5C.S（用NS有沉二次.5m1.注射用水溶解25mg药物，终浓度阿昔洛韦N.S,5%G.S二次.每0.1g用IOmI注射用水溶解成50g1.o再用更昔洛韦N.S.5%G.S先用N.S或注射用水溶解，再用大瓶稀稀成100m1.。会安洛韦NsT欠联甲豁领9F；欠留i水价。号/#Br活生田利民剂愉酒阿赫展苻升一次H1.<1m11k11底市阵NS5tGS1.次.1.mm1.悒满磁雷索NSCwfiG赤田洋蜗田水溶g.悔涵11IK总结：1.N.S溶解：青霉素、氨节西林类、阿莫西林类、奈夫西林、头抱硫眯、帕珠沙星（阿青安怕牛来）2.GS溶解：培篦沙星.W岩处星.曲佳处星.依诺汕星.两怦鼻专B/利福安（两