2025《实验室活细胞工作站安全操作规程》修订版.docx

活细胞工作站安全操作规程一适用岗位范围本安全操作规程适用于实验室活细胞工作站的所有技术人员及实操员工，包括但不限于细胞培养、细胞观察、细胞处理等相关岗位。二、岗位主要危险源在活细胞工作站工作中，可能存在以下危险源：1、生物性危险源：包括细胞培养过程中可能产生的细菌、病毒等微生物污染。2、化学性危险源：包括细胞培养基、消毒剂、荧光染料等可能对人体产生危害的化学物质。3、物理性危险源：包括紫外线辐射、电器设备可能产生的电击或短路等危险。4、人为因素：包括操作失误、疏忽大意等可能导致安全事故的因素。三、岗位职责1、遵守国家和行业相关的法律、法规、规章、规程和标准，确保实验室安全。2、严格按照本安全操作规程进行活细胞工作站的操作和管理。3、熟悉岗位危险源，掌握紧急情况下的现场处置方案。4、负责活细胞工作站日常设备的维护和保养，确保设备正常运行。5、参与安全培训和演练，提高安全意识。四、工艺安全作业程序和方法（一）细胞培养前的准备1、检查细胞培养箱、离心机、显微镜等设备的运行状态，确保其正常运行。2、检查细胞培养基、血清等试剂的保质期和存储条件，确保试剂质量。3、准备实验所需的无菌器皿、吸管、移液枪等物品，并进行灭菌处理。4、佩戴好实验服、手套、口罩等个人防护用品，确保个人安全。（二）细胞培养操作1、细胞复苏：从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速放入37水浴锅中解冻，然后将细胞悬液转移到离心管中，离心后弃去上清液，加入新鲜培养基重悬细胞，接种到培养瓶中，置于细胞培养箱中培养。2、细胞传代：当细胞生长至80%至90%融合时，进行细胞传代。首先弃去旧培养基，用PBS洗涤细胞，然后加入胰酶消化细胞，待细胞变圆后，加入新鲜培养基终止消化，吹打细胞成悬液，离心后弃去上清液，加入新鲜培养基重悬细胞，按一定比例接种到新的培养瓶中，置于细胞培养箱中培养。3、细胞计数：取适量细胞悬液，加入台盼蓝染液，混匀后滴加到细胞计数板上，用显微镜观察并计数活细胞数量。（三）细胞观察与记录1、使用显微镜观察细胞生长状态、形态变化等，记录观察结果。2、定期拍摄细胞图片，记录细胞生长过程。3、发现异常情况时，及时向上级汇报，并采取相应的处理措施。（四）细胞处理与废弃物处理1、细胞处理：根据实验需求，对细胞进行冻存、转染、药物处理等操作。2、废弃物处理：将使用过的培养基、离心管、吸管等物品放入专用的医疗废弃物容器中，由专业人员进行处理。细胞废液应经过消毒处理后，再倒入下水道。（五）控制要点1、细胞培养过程中，应严格控制无菌操作，避免微生物污染。2、细胞传代时，应掌握适当的消化时间和消化程度，避免对细胞造成损伤。3、细胞计数时，应准确记录活细胞数量，确保实验结果的准确性。4、细胞处理过程中，应使用合适的试剂和操作方法，避免对细胞造成不良影响。5、废弃物处理时，应遵守国家和行业的相关规定，确保环境安全。五、紧急情况的现场处置方案1、生物性污染事故：若发生细胞培养过程中的微生物污染事故，应立即停止实验，将污染物品放入专用的生物安全柜中，使用消毒剂对污染区域进行消毒处理，并及时向上级汇报。2、化学性泄漏事故：若发生试剂泄漏事故，应立即佩戴好个人防护用品，使用沙土、吸油棉等物品吸附泄漏物，将泄漏物收集到专用的容器中，并使用消毒剂对泄漏区域进行消毒处理。3、电器设备故障事故：若发生电器设备故障事故，应立即切断电源，使用灭火器进行灭火处理，并及时向上级汇报。4、人员受伤事故：若发生人员受伤事故，应立即将受伤人员送往医院进行治疗，并保护好现场，以便进行事故调查。六、附则本安全操作规程自发布之日起实施，由实验室安全负责人负责解释和修订。所有技术人员及实操员工应严格遵守本安全操作规程，确保实验室安全。对于违反本安全操作规程的行为，将依据相关规定进行处理。