分解纤维素的微生物.ppt

土壤中能水解纤维素的微生物,1、纤维素在生物圈的分布状况？,2、纤维素酶的组成及作用？,一种复合酶，包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,回顾：纤维素和纤维素酶,纤维素 纤维二糖 葡萄糖,C1酶、CX酶,葡萄糖苷酶,能够溶解纤维素的粘细菌1,能够溶解纤维素的粘细菌2,选择培养,1、配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？,2、此培养基对微生物是否有选择作用？如果有，是如何选择的？,3、你能否设计一个对照实验，说明 选择培养基的作用？,用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,选择培养基配方：纤维素粉 5gNaNO3 1gNa2HPO47H2O 1.2gKH2PO4 0.9gMgSO47H2O 0.5gKCl 0.5g酵母膏 0.5g水解酪素 0.5g 将上述物质水解后，用蒸馏水定容到1000ml,有。碳源是纤维素，所以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。,以纤维素作为唯一碳源,利用纤维素刚果红培养基筛选菌种的原理是：,1、刚果红可以跟大分子多糖牢固结合。,2、纤维素是大分子多糖，跟刚果红牢固结合。,3、纤维素酶降解平板中的纤维素成小分子糖，刚果红无法与小分子糖结合，就被洗脱下来，呈现透明圈。,刚果红染色法,方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应,方法二：在倒平板时就加入刚果红,思考：这两种方法各有哪些优点与不足,方法一 缺点是操作烦琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发 生混杂；优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 方法二 优点是操作简便，不存在菌落混杂问题缺点一是由于培养基中还含有淀粉类物质，可以使能产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应；缺点二有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红，形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分,土壤中纤维素分解菌的分离,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,挑选产生透明圈的菌落,分布环境,（1）土壤取样：,富含纤维素的环境中,操作步骤,由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。,原因,实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。,讨论:如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？,答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。,（2）选择培养,目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物,操作：称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30 mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30 下振荡培养12 d，至培养基变混浊。吸取一定的培养液（约5 mL），转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊。,（3）梯度稀释：,（4）涂布培养,1、刚果红染色法:,（5）筛选菌株：,常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行染色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红,试验结果,实验组：,对照组：,经刚果红染色法，菌落周围将会出现明显的透明圈,不含纤维素的培养基经刚果红染色法，菌落周围不出现明显透明圈,讨论：这两种方法各有哪些优点与不足？,方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。,方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂的问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应，但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。,方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间的培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。,在产生明显的透明圈的菌落，挑取并接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C 370C培养，可获得纯培养。,2、挑菌,加入青霉素的培养基：,加入高浓度食盐的培养基：,不含有机碳源的培养基：,自养型（硝化细菌）,酵母菌、霉菌,金黄色葡萄球菌,在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为,选择培养基。,分解尿素的细菌,以尿素作为唯一氮源的培养基：,伊红美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标、,例如：鉴别大肠杆菌培养基,菌落呈黑色,纯净菌种的保藏,1、斜面保藏（临时保存）2、甘油保藏（长期保存）,