微生物真菌.ppt

真 菌 概 述,2,概 念,真菌(fungus)是一类具有典型细胞核，有核膜和核仁，胞浆内有完整的细胞器，无根、茎、叶，不含叶绿素，无光合色素，细胞壁含几丁质和纤维素的单细胞或多细胞异养真核细胞型微生物。,真菌概念,真菌(fungus)：真核细胞型微生物具有典型细胞结构（细胞核、细胞器、细胞壁）无根、茎、叶，不含叶绿素细胞壁含几丁质和（或）纤维素以腐生或寄生方式摄取养料能进行有性生殖和（或）无性繁殖生长缓慢,4,概 念,真菌分布广泛，种类繁多，大多数无害，甚至有利。有些真菌也是造成动植物病害的病原，与医学有关的约数百种，少数真菌可以引起人类感染性、中毒性及变态反应性疾病。近年来，由于抗菌药物的广泛应用和或应用激素、抗癌药物导致机体免疫功能降低等原因，机会致病真菌感染也明显增多。,原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较,第一节 分 类,真菌分类的主要依据为：有性生殖的各种器官 无性菌丝和孢子及菌落的形态等特征 大多数学者认为真菌应作为一个独立界真菌界，并曾将真菌分为两个门，即黏菌门和真菌门,真菌门又根据其生物学性状等传统地分为五个亚门。最新的真菌分类是把真菌界分为四个门。,分 类,真菌门：5个亚门（传统）鞭毛菌亚门 接合菌亚门 子囊菌亚门 担子菌亚门 半知菌亚门（医学相关：后4个亚门）,最新分类：真菌界：4个门：接合菌门 担子菌门 子囊菌门 壶菌门,第二节 基本特性,一、形态特性真菌比细菌大，用普通光学显微镜的低倍或高倍镜就可见。真菌菌体外有一层坚硬的细胞壁；其细胞膜含固醇而细菌无。按形态可将真菌分为单细胞和多细胞两类。,第二节 基本特性,一、形态特性单细胞真菌：圆形或卵圆形，常见于酵母菌或类酵母菌多细胞真菌：菌丝+孢子 交织成团菌丝体（霉菌）二相性真菌：37呈酵母型，25呈丝状型的真菌,单细胞真菌,形态：圆形或椭圆形，如酵母型和类酵母型真菌。（1）酵母型真菌：有孢子，无菌丝 菌丝：无 繁殖方式：从母细胞芽生 菌落形态：与细菌相似,酵母菌在培养基上菌落形态,单细胞真菌,（2）类酵母型真菌：芽生孢子与假菌丝 菌丝：假菌丝 假 菌 丝：长的芽体可伸进培养基内 繁殖方式：从母细胞芽生 菌落形态：与酵母型相似，由假菌丝联结成假菌丝体，称为类酵母型菌落,假菌丝,假菌丝：类酵母菌进行出芽生殖时，子母细胞不立即分离而以狭小的面积相连，这种藕节状的细胞串为假菌丝。假菌丝与真菌丝明显不同处在于其两细胞间有一细腰，而不象真正菌丝横隔处两细胞宽度一致。,多细胞真菌,由菌丝和孢子两大部分组成 1.菌丝(hypha)2.孢子(spore),18,（一）菌丝（hypha),真菌在适宜环境中，由孢子出芽长出芽管，逐渐延长呈丝状，称为菌丝（hypha）。菌丝继续分支，交织成团，称菌丝体（mycelium）。菌丝分为营养菌丝和气生菌丝，气生菌丝中能形成孢子的叫做生殖菌丝。有些真菌的菌丝具有隔膜，叫有隔菌丝；有些真菌的菌丝无隔膜，叫无隔菌丝。,不同形态的菌丝具有鉴别意义,(1)单纯菌丝 细长的管状组织，有粗有细分枝或不分枝，有隔或无隔，有色或无色。(2)球拍状菌丝 菌丝在隔膜部位一端膨大球拍状，排列规整。(3)破梳状菌丝 菌丝一侧有不规则的梳齿状凸起，梳齿参差不齐如破梳状。(4)螺旋状菌丝 菌丝呈弹簧状，有规律性旋转状生长。(5)结节状菌丝 稍膨大的侧枝细胞、菌丝端细胞或中间性细胞弯曲成团，互缠成结。(6)鹿角状菌丝 菌丝顶端呈不规则分枝，状如鹿角。,22,（二）孢子(spore),孢子（spore）是真菌的繁殖结构。孢子分有性与无性两类。孢子与细菌芽胞不同。,真菌孢子与细菌芽胞的区别,二相真菌：一些真菌可因寄生环境及培养条件（营养、温度、氧气等）的不同而交替形成两种形态，即在室温中呈霉菌型，在37摄氏度或体内呈单细胞的酵母型，这类真菌有双向性，所以称之为双态真菌或二相真菌。如球孢子菌、组织胞浆菌及芽生菌。,二相真菌,二相真菌,机体内寄生37,单细胞型：,多细胞型：,含动物蛋白培养基,酵母菌,沙保氏培养基25,普通培养基25,丝状菌,孢子(spore),孢子是生殖结构，由生殖菌丝产生。是鉴定和分类的依据。(1)无性孢子 不经过两性细胞的配合而产生，菌丝上的细胞分化或出芽生成，病原性真菌大多形成无性孢子。(2)有性孢子同一菌体或不同菌体上的2个细胞融合经减数分裂形成。绝大多数为非致病性真菌所具有。,26,无性孢子分为：分生孢子：大分生孢子小分生孢子叶状孢子：芽生孢子关节孢子厚膜孢子孢子囊孢子有性孢子分为：卵孢子、接合孢子、子囊孢子及担孢子,（二）孢子(spore),无性孢子,1)叶状孢子 由菌丝细胞直接形成 芽生孢子 通过发芽方式形成圆形或卵形的细胞 关节孢子 由菌丝分化成长方形的几个节段，胞壁稍厚 厚膜孢子 是一种休眠细胞，条件适宜可再发芽,2)分生孢子 常见的一种无性孢子形状、大小、结构、颜色等：分类、鉴定 大分生孢子 体积较大，多细胞性。孢子呈纺锤形，棍棒状等。小分生孢子 体积小，单细胞性，外壁薄，球形、卵形、梨形以及棍棒状等。,无性孢子,生殖菌丝末端细胞分裂或收缩形成；也可从菌丝侧面出芽形成,大分生孢子的形态,3)孢(子)囊孢子由丝末端形成一种囊状结构（孢子囊），内有许多孢囊孢子。,无性孢子,多细胞真菌形态,真菌孢子和细菌芽胞的区别,繁殖与培养,真菌的繁殖方式依靠孢子及菌丝进行繁殖:有性繁殖 无性繁殖无性繁殖 1.芽生:酵母菌及酵母样真菌 2.裂殖:以二分裂法进行繁殖 3.萌管:萌发芽管，芽管伸延后形成菌丝 4.隔殖:在分生孢子梗某一段落形成一隔膜，随之原生质浓缩而形成一个新的孢子。孢子可再独立繁殖。,真菌的培养特性,真菌的营养要求不高 常用沙保培养基：蛋白胨、葡萄糖、氯化钠和琼脂。温度：2228，但某些深部感染的真菌为37。pH：4.06.0 生长速度:较慢,“三低两高”,常用的培养基,沙氏琼脂培养基Sabourauds Agar蛋白胨 10.g葡萄糖 40.0g琼脂 20.0gpH值5.60.2 蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；琼脂是培养基的凝固剂。,马丁氏(Martin)培养基(分离真菌用),配方KH2PO4 1gMgSO4 7H2O 0.5g 蛋白胨 5g葡萄糖 10g琼脂 15-20g水 1000mLpH 自然此培养液1000mL加1%孟加拉红1%水溶液3.3mL.临用时每100mL培养基中加入1%链霉素液0.3mL.,基本原理葡萄糖主要作为碳源,蛋白胨主要作为氮源,KH2PO4和MgSO4 7H2O作为无机盐,为微生物提供钾,磷,镁离子.而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂,对真菌无抑制作用,因而真菌在这种培养基上可以达到优势生长,从而达到分离真菌的目的.,察氏琼脂Czapek Dox Agar,硝酸钠磷酸氢二钾硫酸镁氯化钾硫酸亚铁蔗糖琼脂,3.01.00.50.50.0130.015.0,原理：硝酸钠提供氮源；磷酸氢二钾是缓冲剂；硫酸镁、氯化钾、硫酸亚铁提供必须的离子；蔗糖提供碳源；琼脂是培养基的凝固剂。用途：用于青霉,曲霉鉴定及保存菌种用(GB标准),孟加拉红培养基（虎红培养基）Rose Bengal Medium,蛋白胨 葡萄糖磷酸二氢钾硫酸镁(无水)琼脂孟加拉红氯霉素,5.010.01.00.520.00.0330.1,原理：蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氢钾为缓冲剂；硫酸镁提供必须的微量元素；琼脂是培养基的凝固剂；氯霉素可抑制细菌的生长；孟加拉红作为选择性抑菌剂可抑制细菌的生长，并可减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长。,在沙保培养基上，3种类型的菌落：1.酵母型菌落：菌落柔软、光滑、湿润。镜下可见单细胞性的芽生孢子，无菌丝。隐球菌菌落 2.类酵母型菌落（酵母样菌落）：和酵母型菌落相似，镜下可见假菌丝。白色念珠菌菌落 3.丝状型菌落：由多细胞菌丝体组成的絮状菌落（一部分向空中生长，并形成孢子）。丝状真菌或霉菌菌落。(菌落较大),真菌的培养特性,赭曲霉,镰刀菌及其大分生孢子,黄曲霉菌落形态,黄曲霉镜下特征,青霉菌菌落形态,青霉菌镜下形态,镰刀菌菌落形态,镰刀菌镜下特征,变异与抵抗力,变异性 多次传代或孵育过久，容易变异（形态、结构、菌落性状、色素以及生理性状(毒力)的改变。抵抗力 热：不强。孢子一般60经1h即被杀灭（不同于芽胞）。干燥、日光、紫外线及多种化学药物：耐受性较强。1%3%石碳酸、2.5%碘酊、0.1%升汞及10甲醛液：较敏感。,55,三、致病性,致病物质：细胞壁糖蛋白（有内毒素样活性）、毒素、荚膜等。致病方式：病原性真菌感染（主要是外源性真菌感染）条件致病性真菌感染（主要是内源性真菌）真菌变态反应性疾病（皮炎、哮喘等）真菌性中毒（毒素引起）真菌毒素与肿瘤的关系（黄曲霉毒素等）,真菌性感染,真菌病(mycoses)：由真菌引起感染并表现临床症状者 真菌的致病力比细菌弱 致病性真菌、条件致病性真菌原发性感染：球孢子菌(Coccidiodes)、皮炎芽生菌(Blastomyoes dermatitidis)、组织胞浆菌(Histoplasma)等继发性感染：机体防御机能显著低下时。致病机理：真菌的粘附能力，对免疫系统功能的抑制，胞壁中的酶类,真菌性超敏反应,按性质分：感染性超敏反应：感染后,型接触性超敏反应：吸入或食入,型按部位分:皮肤超敏反应:皮炎、湿疹、荨麻疹、瘙痒症等呼吸道超敏反应:支气管哮喘以及过敏性鼻炎消化道超敏反应,真菌毒素中毒,农作物、食物或饲料上表现:1.肝、肾、神经、造血系统损伤 2.致癌性:黄曲霉毒素,等（原发性肝癌）,免疫力不强，不能形成稳固的病后免疫 1.抗体的作用 2.细胞免疫及超敏反应,免 疫 性,微生物学检查法,取材：浅部：鳞屑、病发或甲屑 深部：分泌物、排泄物、体液、痰液及血液直接镜检：粘稠或含角质的标本:先加10%KOH，加温后镜检 液体标本：离心后镜检培养：含抗生素的沙保弱培养基 25(丝状真菌)37(酵母型真菌),3.菌种鉴定,(1)丝状真菌：根据菌落形成所需要的时间，在不同条件下生长的情况，菌落表面及背面的形态、色素，培养基中有无色素，培养物用乳酚棉蓝染色后镜检找特征性标志结构。主要是形态学的鉴定，如直接涂片观察，小培养显微镜鉴定，,毛霉,根霉,梨头霉,曲霉结构图,烟曲霉菌落,烟曲霉,光镜 X400,黄曲霉菌落,黄曲霉,光镜 X200,黄曲霉镜下特征,黑曲霉菌落,黑曲霉,光镜 X200,土曲霉菌落,土曲霉，光镜 X200,构巢曲霉菌落,构巢曲霉,光镜 X400,杂色曲霉菌落,杂色曲霉,光镜 X400,青霉菌菌落形态,青霉菌镜下形态,镰刀菌菌落形态,镰刀菌镜下特征,2)酵母菌鉴定：,形态学鉴定主要观察有无假菌丝产生，如有则为念珠菌属，如无则为念珠菌以外的酵母菌;玉米吐温诱导下特征菌丝及特征孢子的检验，血清芽管形成在形态学基础上还必须进行生化鉴定：有标准鉴定，自动仪器鉴定，显色鉴定，其中，自动仪器鉴定(如API20C，ID32C等)，显色鉴定对于酵母样真菌的鉴定，特点是快速简便;,标准鉴定是按传统双歧表流程鉴定(包括糖同化试验，糖发酵试验，CAFC酚氧化酶试验，尿酶试验，KNO3同化试验，脂肪酸需求试验)，是真菌鉴定的金标准，系统准确，缺点是程序繁琐，耗时长，与临床治疗不太适应。血清学玻片凝集试验，动物致病性实验，,血清学方法检测真菌抗原成分,念珠菌感染和曲霉感染的血清学检测可分为抗体检测和抗原检测两大类；由于发生侵袭性真菌病的免疫受损宿主往往缺乏可检测到的抗体，或者抗体的产生变化较 大，因此检测抗体对于系统性真菌感染的诊断意义不大，而目前用于临床的血清学检查主要属于后者，即检测血液循环中的抗原；常用的有下述几种：,（1）-D-1,3葡聚糖（BDG）：,是许多真菌细胞壁的主要成份，如念珠菌、曲霉、镰刀菌等，但不包括隐球菌和接合菌；由于细菌、病毒、哺乳动物无 这种成份，因而在循环血液中测得时则提示侵袭性真菌感染，目前已经有商品化BDG检测的试剂盒。BDG的检测，在2小时内可以获得结果，因此尽管不能区分 真菌感染的种类，但是仍然具有重要作用，美国FDA已经批准Fungitell用于真菌感染的诊断，国内也有相似试剂问世，目前在临床应用中。,（2）半乳甘露聚糖（GM）：,GM是存在于曲霉和青霉细胞壁的一种热稳定的多糖，可用于侵袭性曲霉病的临床诊断。可以使用血清和支气管肺泡灌洗液检测 GM，近来也有人使用尿液和脑脊液等标本检测。GM检测的敏感性为29-100%，而其特异性可超过90%。由于GM量的多少与组织中真菌含量密切相关，因此检测GM还可以提示疾病的预后。,分子生物学鉴定：,如核酸杂交，DNA探针杂交，PCR扩增序列分析，PCR-SSCP单链构象多态性分析，PCR-RFLP限制性片段长度多态性分析，PCR-RAPD随机扩增多态性分析，PFCG脉冲电泳核型分析等。,防治原则,皮肤癣菌：注意清洁卫生，避免接触深部真菌病：去除诱因，提高抵抗力 食物中毒：不食用霉变食品,小 结,真菌的概念、分类、命名、生物学特性及与医学相关真菌所致常见疾病。真菌按形态分为单细胞和多细胞两类。真菌细胞壁中缺乏肽聚糖，而含大分子几丁质，故其不受青霉素或头胞菌素的作用。真菌的营养要求不高，易于培养。真菌可以引起人类感染性、中毒性及变态反应性疾病。条件致病性真菌感染近年来明显上升，这与临床上滥用抗菌药物、应用激素及免疫抑制剂和抗癌药物等导致机体免疫功能下降有关，已引起临床关注。真菌的鉴定以形态学为主，单细胞真菌辅以生化及血清学鉴定,