植物茎尖培养.docx

植物茎尖培养外植体的选取及预处理外植体选取选择生长健壮、已发芽、长势较好、无病害的生姜根状茎作为外植体。材料预处理取带芽的枝条或鳞茎球茎，洗衣粉适量冲洗，然后扳取或用清洁剪刀剪取带芽部位（约ICmXlCnI大小）,顶芽和腋芽、大芽和小芽分开。继续用洗衣粉清洗10分钟，清洗时需不停晃动。再用自来水冲洗干净，置空培养瓶备用。2、超净工作台无菌操作准备检查超净工作台，是否已开机灭菌，酒精灯、酒精瓶、升汞是否齐备、无菌水、培养瓶放置与位置、接种器械是否齐备与放置。3、外植体消毒蒸储水冲洗外植体置于已杀菌开机的超净工作台上，新洁尔灭洗液消毒双手，无菌蒸偏水清洗外植体2-3次，需随时晃动。酒精消毒75%酒精倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-60s,时间长短视植物材料情况而定，一般幼嫩材料和室内带菌培养材料消毒时间短，老材料或室外材料消毒时间长。动作一定迅速，需晃动，然后将酒精倒去。整个时间计算以酒精倾倒开始至酒精倒出瓶外为止，升汞消毒1%生汞倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-10min,时间长短视情况而定。需晃动，在最后3min静置，升汞注满容器，将已灼烧的镜子放入容器升汞内浸泡。10%次氯酸钠溶液倒入装外植体的容器内，消毒外植体10T2min,时间长短视情况而定。蒸得水清洗用镶子将外植体取出，放入另一无菌蒸储水瓶中清洗，反复清洗4次。4、材料的整理用灼烧冷却的镶子和剪刀对外植体开展处理，剥离外植体材料芽外部小叶片，露出尖端生长点和2-3片叶原基部分，将此部分剪下做培养材料。再用无菌蒸偏水清洗3-4次。5、接入培养基培养基瓶放入工作台内，将剥离的材料分别用消毒过的镶子放入培养瓶内，盖上瓶盖，置培养篮内，写上培养时间、操作人及培养品名，入培养室培养。实践指导1、操作中严格有菌观念、无菌操作。2、操作前一定先换上工作服、专用鞋、清洁双手。3、超净工作台工作前，检查工作台是否开启紫外灯和风机，酒精灯、消毒器械的酒精、消毒液是否准备齐备。蒸傕水、培养基是否齐备。4、工作时培养基、蒸储水、消毒液等放置齐整，器械取出后放入消毒液里，用过的溶液、线和报纸放在工作台外。5、接种工具不能碰触瓶口和工作台其它部位，手不能碰触瓶口，更不能伸入瓶内，不能碰触材料。6、无菌水和酒精、升汞处理材料时需不断晃动，便于材料与液体充分接触。7、酒精、升汞处理材料时间必须适宜，时间短消毒效果不理想，时间长会将材料杀死。8、操作细致，水不要洒在工作台上，掉落在台面的材料不能再用。9、操作完毕,须在瓶上注明日期、操作人，便于观察。10、有些同学器械放置很乱，整个超净工作台面乱七八糟，影响效果。推荐阅读：鲜切花采后技术原则及必要性荷兰铁受损芽能恢复非洲菊和雏菊的区别苗圃花卉对除草剂的选择要慎重