铁含量亚铁嗪比色法检测试剂盒说明书分光法48样.docx

铁含量（亚铁嗪比色法）检测试剂盒说明书（分光法48样）一、产品简介：在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫红色化合物，该有色物质在562nm处有特征吸收峰，进而计算得出铁含量。适用于检测组织、血清等样品中的铁含量。二、试剂盒组分与配制：试剂名称规格保存要求备注提取液液体60mL×I瓶4保存试剂一液体26mL×1瓶4保存试剂二粉体Xl支4保存用前甩几下或离心使粉体落入底部，再加入2.4mL的蒸储水溶解备用。试剂三液体2mLxl支4C保存标准品液体ImLxl支4C保存临用前用试剂三稀释50倍（即取10L的标准品至EP管中，再加490L的试剂三），制备成2gmL的铁标准品。二、所需仪器和用品：可见分光光度计、ImL玻璃比色皿（光径ICm）、可调式移液器、离心机、蒸储水。四、铁含量检测：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！Iv样本制备：组织样本：取约0.1g组织，加入ImL提取液，进行冰浴匀浆。4oC×12000rpm离心5min,取上清，置冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：510的比例进行提取。细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入ImL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W,超声3s,间隔IOs,重复30次）；1200OrPm4离心Iomin,取上清，置冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照细菌，细胞数量（104）：提取液（mL）为5001000:1的比例进行提取。液体样本：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。2、上机检测：可见分光光度计预热30min,设定波长到562nm,蒸储水调零。所有试剂解冻至室温，在EP管中依次加入：试剂名称（L）测定管标准管（仅做一次）空白管（仅做一次）样本240标准品240蒸储水240试剂一520520520试剂二I40I4040充分混匀，置室温15min后，若浑浊则需30（X）rpm离心5min后取全部上清液至ImL玻璃比色皿（光径1cm）中，于波长562nm处读取各管吸光度A。五、结果计算：1、按照组织质量计算：铁含量（gg）=（C标准XVI）X（A测定-A空白）÷（A标准-A空白）÷（VI÷VxW）=2×（A测定-A空白）÷（A标准-A空白）÷W铁含量（nmolg）=（C标准XVl）X（A测定-A空白）:（A标准-A空白）÷（VI:VXW）XI（P÷Mr=35.8IX（A测定-A空白）+（A标准-A空白）÷W2、按细胞数量计算：铁含量（g104cell）=（C标准XVI）X（A测定A空白）:（A标准A空白H（VI÷Vx细胞数量）=2×（A测定-A空白H（A标准-A空白）4细胞数量铁含量（nmol/IO,cell）=（C标准XVI）X（A测定A空白）÷（A标准-A空白）÷（VWVx细胞数量）×103÷Mr=35.81×（A测定A空白H（A标准A空白）细胞数量3、按照液体体积计算：铁含量（gmL）=（C标准XVI）X（A测定A空白）÷（A标准A空白）÷V1=2×（A测定-A空白）÷（A标准A空白）铁含量（molL）=（C标准XVI）X（A测定-A空白片（A标准-A空白HVlXlO3.Mr=35.81×（A测定A空白H（A标准A空白）C标准铁标品浓度，2gmL;Vl加入样本体积，0.24mL：Vi提取液体积，1mL：W一样本取样质量，g；Mr铁分子量，55.847o