侵袭性真菌感染的实验室检查.pptx

侵袭性真菌感染的实验室检查,重要医学酵母菌分类,医学重要的丝状真菌分类,白色念珠菌（Candida albicans)光滑念珠菌(C.glabrata)热带念珠菌(C.Tropicalis)近平滑念珠菌(C.Parapsilisis)克柔念珠菌(C.Krusei)烟曲霉(A.fumigatus)黄曲霉(A.flavus),临床常见病原真菌,真菌菌落形态,真菌菌落形态,真菌菌落形态,区分念珠菌和丝状真菌,假菌丝和真菌丝的区别曲霉菌菌丝,分隔,假菌丝,血涂片革兰染色马内菲青霉菌的菌丝,脓标本直接涂片革兰染色接合菌菌丝,真菌感染的临床表现,形态学检查显微镜检查（革兰染色、KOH压片，乳酸棉芬兰染色）培养检查-培养时间5-7天组织病理学特殊检查血清学试验（G实验，GM实验）分子生物学,真菌感染的实验室诊断方法,念珠菌直接涂片结果解读,可见真菌孢子及假丝（念珠菌）可见真菌孢子未见假丝（念珠菌）找到真菌菌丝（丝状真菌，如曲霉，毛霉）,是最简单也是最实用的检查方法阳性结果可以确定真菌感染，阴性结果亦不能排除诊断如果在无菌体液的直接镜检中发现有真菌成分常可确立深部真菌病的诊断；但一般在有菌部位则只有发现大量真菌菌丝方可作出诊断快速，常在1-2小时出结果经常是唯一的诊断依据,真菌标本的直接镜鉴,曲霉菌形态学鉴定烟曲霉菌落,棉兰染色烟曲霉镜下图,棉兰染色黄曲霉,棉兰染色黑曲霉,棉兰染色构巢曲霉,棉兰染色小孢根霉,棉兰染色稻根霉,棉兰染色制片,（1，3）-D葡聚糖（简称G实验）：可特异性激活鲎变形细胞溶解产物中的G因子，引起裂解物的凝固，故称G试验。可检测多种致病真菌感染：念珠菌，曲霉菌，肺孢子菌，镰刀菌，地霉，组织胞浆菌，毛孢子菌等。不能用于检测隐球菌和接合菌的感染早期诊断：可先于临床诊断4天,临床常见的真菌血清学诊断方法,假阳性血液透析、腹膜透析（应用纤维素膜）某些抗肿瘤药物的应用如香菇多糖和磺胺类药物病人输入白蛋白、球蛋白、脂肪乳、凝血因子某些细菌败血症（尤其是链球菌败血症）手术中使用棉纱，棉拭子对策：动态监测葡聚糖的变化假阴性:隐球菌具有厚壁胞膜，在免疫缺陷患者体内生长缓慢，导致试验呈假阴性。,假阳性 假阴性,诊断：侵袭性曲霉菌感染（IPA），对侵袭性曲霉病的诊断具有较高的灵敏度和特异度，尤其在骨髓移植和血液病等免疫抑制的患者中。检测范围：曲霉菌、青霉菌，拟青霉。链格孢。,GM试验,应用哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉维酸。谷类食物和脂质甜点中的GM抗原。肠道中定值的曲霉释放GM进入血液循环。,假阳性,侵袭性念珠菌病是导致危重病患者死亡的主要疾病之一，在美国及许多发达国家位居医院血源性感染的第四位，许多权威人士估计由其导致的成人死亡率为15%-25%,新生儿和儿童死亡率为10%-15%。侵袭性曲霉病病死率达50%。抗真菌药作用于真菌细胞的同时也容易对人体细胞产生毒性作用。临床治疗真菌感染的药物有限、用药剂量较大、疗程长、因此不良反应较多、毒性较大，成为临床应用抗真菌药物的主要瓶颈。,侵袭性真菌感染的流行病学,侵袭性念珠菌病的定义,患者简介：女性，37岁，农民，因“咳嗽，咳痰4天，加重伴喘憋1天，意识不清2小时”于2014年5月7日入院。当日下午即行支气管镜检查，示气管粘膜充血，水肿，糜烂，大量黄粘痰，留标本送检。入院诊断考虑“重症支气管哮喘”，予甲基强的松龙80mg,氨茶碱0.25，硫酸镁2.5分次点滴，症状不见好转。结合支气管镜所见，丝状真菌感染不能除外。,病例分析,病原学诊断：5月7日痰涂片可见真菌菌丝，菌丝呈45度折角，似曲霉菌丝。痰培养及BALF培养为烟曲霉菌。5月9日BALF培养为烟曲霉菌；5月11，12，13，16日气道分泌物培养为烟曲霉菌。根据流行病学资料，微生物学证据，影像学检查诊断为侵袭性肺曲霉菌感染（IPA）。治疗：5月8日在莫西沙星的基础上，加用两性霉素B脂质体制剂，5月9日，12日，13日气道滴入两性霉素B脂质体，20日加用伏立康唑。,病例分析,5月21日，22日痰培养为铜绿假单胞菌，用派拉西林/他唑巴坦治疗，继续应用伏立康唑（口服，400mg/d)及两性霉素B脂质体（150mg/d)治疗。患者出院后院外服用伏立康唑1个月，停用后改为伊曲康唑口服液1个月，复查CT基本吸收后停用。,病例分析,