丙烯酰胺对大鼠DRG细胞NF-M转运速度的影响及其机制初探.docx

丙烯酰胺对大鼠DRG细胞NF-M转运速度的影响及其机制初探安丽红I谢克勤*,李国珍2,司纪亮2,韩晓英31.山东大学公共卫生学院毒理所；2.山东大学公共卫生学院环境与健康系；3.山东师范大学生命科学院摘要：目的研究丙烯酰胺(ACR)对WiStar大鼠原代DRG细胞NF-M转运速度的影响并初探其机制。方法用ACR对原代培养的WiStar乳大鼠背根神经节细胞(DRG)染毒，用四甲基偶氮哇盐(MTT)确定受试物的染毒剂量。将质粒P-GFP-NFM和DsRED共转染进入DRG中，细胞培养48h后ACR染毒(0,0.14,0.28mmolL)oACR染毒培养24h后，将DRG置于荧光显微镜下，选取共转染成功、状态良好的DRG的平滑近端轴突，每隔30min记录一次视野内轴突的pGFP-NF-M绿色荧光强度，连续记录2h。将各时间点的PGFPTFM绿色荧光强度与Omin的荧光强度相比较，计算在该时间段内的绿色荧光强度变化，并以此代表在该时间段内DRG的NFM转运水平。同时检测各ACR染毒组DRG的ATP水平。结果根据Mn结果，ACR染毒大鼠DRG,其IC50为2.67mmol/L；ACR染毒剂量低于0.7OnlnIo1/L时，其光密度(OD)值与阴性对照组相比无显著性差异(P>0.05),故在此剂量以下选择ACR染毒剂量进行试验。在30min、60min、90min120min四个时间段内，ACR染毒组(0.14,0.28mmolL)的NF-M运动速度显著低于阴性对照组(P<0.01),且0.28molLACR染毒组的NFf转运速度也明显低于0.14mmol/LACR染毒组(P<0.05),在12Omin内ACR染毒各组(0,0.14,0.28mmolL)未被转运的NF-M为(62.64%±7.82%)(74.20%±4.09%)、(81.27%±5.26%)。ACR染毒组(0.14,0.28mmol/L)的ATP水平分别为(8.68±0.59),(6.76±0.28)nmolTPmgPr,低于阴性对照组(10.54±0.50)nmolATP/mgPr,差异有统计学意义(P<0.01)结论ACR染毒可导致Wistar乳大鼠原代DRG细胞轴突内NFM转运速度减慢，其机制与ACR减少原代DRG内ATP水平有关。