高尔基体片段化程度降低在维持衣原体持续感染中的作用.docx

成果名称：高尔基体片段化程度降低在维持衣原体持续感染中的作用完成单位：中山大学主要人员：韩建德、马春光、刘隽华、张勤奋、陈木开、李文静、王璞、朱慈玲介绍：沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis.CT)生殖泌尿道感染是性传播疾病的主要病原体之一，我国沙眼衣原体感染呈上升趋势。由于沙眼衣原体感染后症状隐匿，大部分未得到有效的诊治。沙眼衣原体沿着生殖道上行至子宫腔及输卵管等上生殖道部位，受宿主免疫作用、抗生素不规则治疗等因素影响，沙眼衣原体可进入持续感染状态。目前国外学者证实输卵管堵塞、输卵管性不孕、异位妊娠、自发流产等一系列严重的疾病与沙眼衣原体持续感染关系密切。近20年来，本团队一直进行CT的体内外感染的相关研究，受到国家自然科学基金2次，及多次广东省自然、省科技及广州市科技项目的支持。本项目受到广东省自然科学基金支持进行CT持续感染的相关研究。已知宿主细胞高尔基体片段化是急性感染期CT获取脂类营养物质的主要途径，持续感染状态CT代谢活动减弱。在前期国家自然科学基金的支持下，我们初步发现持续感染状态宿主高尔基体片段化的程度显著降低。据此，我们认为，高尔基体片段化程度降低与持续感染CT对营养物质需求下降有关，并在维持CT持续感染状态中发挥重要作用。本项目分别通过关键酶抑制剂干扰神经酰胺的合成以及增加前体物质促进其合成，从而干扰高尔基体片段化，采用透射电镜、共聚焦显微镜、荧光标签、免疫印迹、ELlSA等技术，设立CT急性感染作对比分析，研究高尔基体片段化程度降低对维持CT持续感染状态的作用，拟得到宿主细胞高尔基体片段化程度加剧可促使CT从持续感染状态恢复为急性感染状态的证据，为阻断CT持续感染状态提供干预依据，并结合药物敏感性分析的结果，为解决CT持续感染状态的诊断及治疗难题提供基础。本项目对持续感染沙眼衣原体的三维结构、脂质代谢、持续感染沙眼衣原体与宿主细胞高尔基体碎片化的相互关系做了一系列的研究，获得以下结果：(1)利用背需素建立沙眼衣原体持续感染的细胞模型。(2)建立体外沙眼衣原体持续感染快速鉴定的方法。与传统的鉴定方法相比，该方法明显地节约时间，节省成本，步骤简单、容易实施，为国内开展沙眼衣原体持续感染的研究提供一个简单、快速的初步筛选方法。(3)利用常温电子断层成像技术获得持续持续感染的沙眼衣原体(ABS)及急性感染的沙眼衣原体(EBs,RBs)三维结构。(4)通过对持续感染沙眼衣原体与宿主高尔基体碎片化的关系研究发现，与急性感染相比较，沙眼衣原体持续感染状态下宿主高尔基体的碎片化受到显著抑制，高尔基体基质蛋白Golgin-84和GM130的裂解程度明显降低。(5)钙蛋白的抑制剂Calpcptin抑制Golgin-84的降解,破坏持续感染沙眼衣原体的结构，对其产生彻底的抑制作用。这可能成为衣原体持续感染的药物治疗的一个思路。(6)利用免疫荧光剂免疫印迹的方法，发现急性感染状态的沙眼衣原体获取鞘脂类的速率明显降低，而持续感染状态沙眼衣原体仍存在获取鞘脂类的活动，提示持续感染状态沙眼衣原体可能存在与急性感染状态不同的鞘磷脂代谢途径，以提供自身的生命代谢活动。(7)利用酶联免疫吸附法和PCR法，比较分析沙眼衣原体急性感染状态和持续感染状态下宿主细胞Rab4A、Rab6A、Rabl0、Rabl1A、Rabl4的含量，发现持续感染状态下宿主Rab蛋白表达高于急性感染状态，进一步提示持续感染状态沙眼衣原体可能存在与急性感染状态不同的鞘磷脂代谢途径，为阻断沙眼衣原体持续感染状态提供新的治疗思路及靶点。以上成果成功建立细胞模型及CT持续感染快速鉴定方法，提出CT持续感染状态下高尔基体的碎片化与急性感染不同，同时发现钙蛋白酶抑制剂CaIPePtin抑制Golgi-84的降解，提出这一发现可能成为衣原体持续感染的药物治疗的一个思路。并揭示了持续感染状态CT以不同与急性感染状态的鞘磷脂代谢途径，为阻断沙眼衣原体持续感染状态提供新的治疗思路及靶点。为我国CT感染的诊断及治疗积累了大量研究基础，近4年来发表国内外文章7篇，在国内处于领先水平。批准登记号：粤科成登(2)字20180156登记Fl期：2018-04-16研究起止时间：2013.10至2015.IO所属行业：卫生和社会工作所属高新技术类别：评价单位名称：广东省自然科学基金管理委员会评价日期：2016.01.11