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2023蛋白质组学技术在弱精子症中的应用进展摘要弱精子症是一种精子运动活力不足的病症，约有27.8%的男性不育由弱精子症导致，其病因复杂，发病机制尚不明确，探讨其发病机制有助于寻找有效预防和治疗策略。近年来，随着蛋白质组学技术（双向电泳、酵母双杂交技术、质谱等技术）的发展，众多研究者将研究重点放在基于蛋白质组学的弱精子症研究上，揭示了弱精子症差异蛋白及所在生物通路，为弱精子症的机制研究提供了众多理论支撑。本文围绕蛋白质组学的相关技术，对弱精子症的差异蛋白表达、病因和发生机制等方面取得的诸多成果进行综述，希望为弱精子症的诊治提供新思路。蛋白质间的相互作用和通路及代谢异常为研究弱精子症的精子运动活力提供了一个很有潜力的方向。【关键词】弱精子症；蛋白质组学；电泳，凝胶，双向；酵母双杂交；色谱；质谱；生物信息学；发生机制目前全球面临不育不孕问题的夫妻占比约五分之一1,且这一数字呈逐年升高趋势。其中由男性引起的不育不孕约占50%,常见原因诸如精液质量欠佳、精子活力下降、功能受损，但是其发病机制未明，治疗效果欠佳。尤以弱精子症常见，占男性不育原因的27.8%弱精子症是一种精子运动活力低下的病症。根据世界卫生组纨WorldHealthOrganizationzWH0）第五版诊断准则，弱精子症是指精液参数中前向运动(progressivemotility,PR)的精子率小于32%的病症2L其病因和病理复杂多样,以生殖道感染、免疫因素、精索静脉曲张、射精管梗阻、遗传因素等为主要原因，环境因素、生活习惯、全身性疾病及其他因素对精子活力也有一定影响3,确切地发病机制目前尚不明确。弱精子症在细胞遗传学方面的研究主要集中在染色体异常及核型分析等方面4-6o但受制于目前的技术，一些插入或者缺失、拷贝数重复大的序列难以检测，因此存在一定的局限性。弱精子症在基因方面的研究主要集中在基因多态性、分子标志物、拷贝数变异、免疫异常、基因突变筛查等方面7-9Jo目前因为基因技术成本过高、基因的选择性表达和多态性等自身原因，弱精子症发病机制在基因组学层面的研究尚无重大突破。随着蛋白质组学的逐步发展以及生物信息学技术和相关数据库的快速崛起，蛋白质组学技术也逐渐被用于弱精子症的机制研究中，为弱精子症的诊断和治疗提供了新思路、新技术。一.弱精子症的蛋白质组学研究蛋白质组的概念最早由WiIkinS等10提出，是蛋白质和基因组的结合。蛋白质组学以蛋白质组为研究对象，探索蛋白质的表达、结构、功能、相互作用和修饰，以研究其结构和功能m随着蛋白的分离、鉴定等相关技术和生物信息学的进一步开发与完善，蛋白质组学在弱精子症方面的研究应用也越来越广泛，对疾病的早期诊断、进展监测及预后判断有重要的指导意义。下面将对弱精子症中应用到的蛋白质组学方法进行阐述，相关方法的原理、优缺点、特点总结见表1。*1Iif白质组学方法原理、优缺点、特点对比方法原理优点块抵特点双向电泳导电聚焦电泳和十二烷癌维酸 钠重内惨帆胺标较电话的结 合技术.首先根据PH值对超 门质树段分离十义等电点,然左再根据相对分子Hija的大 小透行分办,最终获得:堆分 布的击门质电泳图解母双杂交技术网钟待测蛋白质分别克隆（施 合）到醉打表达所粒的就隶激 活因了的DN A结介站构域和 ，如N激活城I .形成融合表达 籁体行通过时&达产物的分 析进行相.件用景门的都送、 轮证及机理探讨1分离 10 0100 OOOHl 对 分TMi口的浅白旗Jl” 上样累大,分阳率高.做感 度高.不复性好等优点： 2可用匕大规模样本说选 和分析;3卅K羌舁定性 In定量版白的H分析,尤 其是表征杀门质的和陶 i予后修饰的Hi白质!筛邮门及搭建<D、Ajt M ; 2能研究细胞内不Id 他置和功尊的at门班; 魏逝门质表现型和从因 一相相系;猿度度.探 价向便1受等电点.相却分了质试.疏1能分离林定发分析大收水件等限制.M极M极跋. 相对分 TMiV >200 o.< 8 OOO制疏水性张门感以仃效分离：23以现I限1核内表达的正门质的 相比作用,尤其M依区tiflf 门内的的评杆修饰的研究 一定的BI制;2只只理论 说明也门质间可能”在作 川；3易工假附件质谓技术成样中（2电离的离了束选人质 量分析器,利川电场和磁场使 其色Itt后分别聚焦徨到旗请 图,从而编定其质城生物信.Q学作为一口新兴睁门质组学辅助学科,通过数学和计算机时 生物蛋白质组7数裾进行加 工、分析等,对出大数据下的 生物学意义I可定相对分乎质,；2,分析的佗圉广.包括气 体、液体.固体和化合物 等；3分析速度快.敏感度 育.所需样品量小L可川干构i与分析向凝 皎电泳图话；？对米门城仪器成本及应用门帼高:圆百动化段度低功能、Ie构和家族等进行 债潸分析物信息学相关工具的安装 知使用人“门槛高蛋白殖；2可表征J8白 决WM和翻洋行修饰的Ai门回；3 I球状毒下他查仍可住未来进行蜜UI反映核内表达的近门啦的相互作用十疏门啦育级结构及就 白之间相h作川研究多学和交叉Itt介.4才大 数据.可分析和解Ff数 据间的本质联系1 .双向电泳（two-dimensionalelectrophoresis,2-DE）:2-DE是等电聚焦电泳和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE粕结合技术，先是通过pH值将蛋白质梯度分离至各等电点，随后再根据相对分子质量的大小进行分离，最终获得二维分布的蛋白质电泳图。双向电泳是蛋白质测定和分析的经典技术，具有高分辨率和高敏感度的优势，且能从整体水平反映精子蛋白组分，为揭示弱精子症病因的分子表型及分析机制提供了必不可少的技术支撑。作为蛋白质组学的发展核心，它广泛应用于疾病蛋白质检测及成分分析上。在对弱精子症的研究中，双向电泳技术结合了计算机图像分析、大数据处理，在充实弱精子症蛋白质水平的病因及机制研究的基础上，更加完善了蛋白质图谱中相关机制。有研究通过2-DE技术在精子活力正常与弱精子症精浆中筛选差异蛋白，建立了2-DE图谱，结果显示健康对照与弱精子症患者的精浆中存在42个差异蛋白,并初次发现弱精子症的3个蛋白缺失点(Ran-特异GTP酶活化蛋白、泛素类似蛋白3前体、载脂蛋白A-II前体)以及3个特异表达的蛋白点COMM区域结合蛋白10、精眯/亚精胺N(I)-乙酰转移酶2、瘙痒症应答蛋白1前体12oBoilard等13通过牛精子与重组GRP78蛋白共孵育实验及双向电泳法，检测到特发性弱精子症患者存在差异表达的蛋白质(乳铁蛋白、SPANXBxGRP78、PGK2等)，丰富了弱精子症蛋白质数据库的内容，为深入研究人弱精子症提供了依据。申树林等14为探索人类弱精子症患者和精子活力正常人群精液中GRP78的表达差异,利用2-DE及WeStem-blotting共同得出GRP78在精子活力正常人群的精子蛋白中高表达，表达倍数比弱精子症高2倍左右,提示GRP78的下调跟精子活力的调节息息相关，为临床诊断弱精子症提供了新的研究方向。2-DE在分离具有极端分子量、Pl或疏水性的蛋白质时具有部分局限性。目前对于蛋白质的研究从原先的单个蛋白质扩展为蛋白质间相互作用、翻译后修饰等方面。2 .酵母双杂交技术：酵母双杂交系统是根据真核转录调控创建，其原理是将两种待测蛋白质分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域(DNAbindingdomain,DNA-BD)和转录激活域(activationdomain,AD)上，形成融合表达载体后通过对表达产物的分析进行相互作用蛋白的筛选、验证及机理探讨。酵母双杂交技术是真核生物调控转录起始过程的理论基础。近年来在研究抗原抗体互作、新蛋白功能探究及药物作用位点筛选等方面应用广泛，具有敏感度高、操作简便等优点。Freitas等15利用酵母双杂交技术和免疫共沉淀(co-immunoprecipitationzCo-IP)共同探究蛋白质之间的相互作用，揭示了精子运动分子机制中的新潜在蛋白糖原合成酶激酶-3(glycogensynthasekinase-3,GSK-3)z并提出GSK3A的相互作用物可能的非活性丝氨酸蛋白酶37(probableinactiveserineprotease37,PRS37)可能参与精子运动。关注蛋白质之间的相互作用并构建蛋白质相互作用网络可为弱精子症病理机制的研究提供新思路。3 .质谱：质谱可以帮助确定样品的相对分子质量及组成成分，其基本原理是利用电场和磁场将进入质量分析器的试样中各组分电离产生的离子进行色散后分别聚集得到质谱图，从而确定其质量。它特异性高，但敏感度受样本影响较大。色谱技术主要包含液相色课liquidchromatography,LC)、气相色谱(gaschromatography,GC)等技术，具有成本低、分离度高、多种可选分离模式等优点，已成为众多研究者在蛋白质组学中选择的工具。研究者们为提高质谱敏感度，通常将质谱与其他技术结合进行学术研究。如LC、GC等技术结合,极大地推进了弱精子症的研究进展。目前高效液相色谱技术(highperformanceliquidchromatography,HPLC)成为蛋白质组学技术中的核心和热点技术，在弱精子症的研究中有广泛应用，为蛋白质及其翻译后修饰的鉴定和分析提供了良好的硬件支持。Li等16通过HPLC分析精浆中的游离左旋肉碱，结果表明精浆游离L-肉碱水平的测定可作为一种潜在的生育力生化指标。LaZZarin。翱17使用HPLC得出与氧化还原能量状态、抗氧化防御、氧化/亚硝化应激、瞟聆、Il密咤和能量代谢有关的化合物，可能是有效评估弱精子症的实验室指标。这引发了对于弱精子症病因及发病机制在分子层面的思考，氧化还原反应相关酶的变化诱发弱精子症的发生发展，还需进一步探索和研究。Murdica等18探究了弱精子症患者精浆中外泌体的蛋白质组学差异,显示硒相关蛋白可能与精子成熟及运动机制密切相关。上述研究提示我们可以将代谢异常的化合物与弱精子症结合起来分析，进一步研究其对临床治疗的意义，以探究其对精子活力的影响。陈厚仰19基于液相色谱-质谱联用分析结合免疫共沉淀结果提示TDRG1与CATSPER1存在的相互作用或是TDRGl在弱精子症中的具体作用机制的前提。目前随着色谱及质谱技术的快速发展，基于离子质荷比、离子峰强度和保留时间3个维度进行的3D蛋白质组学逐渐成为该领域热门的研究方法,它采取液相色谱和质谱并联合定量技术如细胞培养条件下稳定同位素标记技术(stableisotopelabelingtechniqueincellculture,SILAC同位素标记相对和绝对定量(isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation,iTRAQ)技术、连续窗口采集所有理论光谱(sequentialwindowacquisitionofalltheoreticalspectra,SWATH)技术和非标定量法等的方法，更好地服务于蛋白质组学的研究中。牛鑫20和石理华等21通过二维液相色谱串联质谱(twodimensionalliquidchromatographytandemmassspectrometry,LC-MS/MS)联用串联质量标签(tandemmasstag,TMT)标记或相对和绝对定量的等压标签(isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation,iTRAQ)标记技术得出，在弱精子症患者精液中部分蛋白质表达异常，其中以蛋白质数量降低为主，其变化幅度与疾病严重程度密切相关。Amaral等22为探索人类精子活力缺陷有关的蛋白质，通过TMT蛋白标记和LC-MS/MS得出几种代谢途径有助于调节精子活力,尤以包括糖酵解在内的生物代谢途径最为重要。王轶等23应用iTRAQ方法探索特发性弱精子症精浆中的差异蛋白表达情况，结果显示差异蛋白NF2、SNX12下调超过2倍。PannerSelvam等24采用LC-MS/MS得出与弱精子症生殖功能有关的一些关键蛋白(CCT3、ATP1AATP5A1和UQCRC2)下调。Parte等25通过纳米超高效液相色谱-质谱联用(ultraperformanceliquidchromatography-massspectrometrytandem,UPLe-MSE),得出老年男性精子和年轻弱精子症患者精子中PATE1均呈下降，或可作为评估精子活力及质量的潜在生物标志物。Chen等26采用WeStemblotting和免疫荧光法得出弱精子症患者精子中TDRGl的水平显著低于正常精子症患者，且与精子活力呈正相关，同时使用Label-Free方法检测与TDRG1相关相互作用蛋白质。蒋丹丹等27根据TMT技术筛选少弱精子症患者精子差异蛋白,进而对蛋白进行验证得出Cu-ZnSOD和GSS的含量降低与精子质量改变相关，可作为少弱精子症的候选标志物。以上研究得出弱精子症差异蛋白的种类、数量变化、蛋白缺陷、代谢途径等与弱精子症的发生发展及疾病严重程度密切相关。从蛋白种类和量的角度为诊断弱精子症提供了基础理论支持。研究弱精子症与蛋白质翻译后修饰之间的关系以及蛋白质相互作用可能为后续研究精子运动的分子理论以及该疾病的靶向临床治疗提供新思路。随着软电离技术的产生和应用，基质辅助激光解吸离子化技术(matrix-assistedlaserdesorptionionizationmassspectrometry,MALDI-MS)的迅速发展,其本质是在气相中利用脉冲激光电离基质分子,将质子转移到已被脉冲激光电离气化的样品分子上进行质谱分析。由于基质吸收了大部分激光能量，可保证样品分子只产生准分子离子，且脉冲激光电离具有作用时间短和温度低的优势，从而减少了热分解，被普遍应用于蛋白质、核酸等生物大分子的相对分子质量测定和分析中。LiU等28通过基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱技术(matrix-assistedlaserdesorptionionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOFMS),利用仓鼠无透明带卵母细胞进行体外实验得出PATE1参与精卵穿透和精子运动，提示可能与弱精子症精子运动减弱密切相关。Hashemitabar等29通过2-DE和MALDI-TOFMS分析，首次提出在弱精子症精子尾部有4种差异性蛋白(HSPA9、TUBBB.SPANXB和ASRGL1)的含量变化。有助于寻找弱精子症治疗靶点以及为体外受精(invitrofertilizationzIVF)手术提供新的方案。Giacomini等30研究表明Iipocalin-I和催乳素诱导蛋白在少弱精子症中过度表达。C叩kova等31实验结果提示TERA和微管蛋白与弱精子症精子活力密切相关。Chan等32研究表明低磷酸化蛋白和Y-微管蛋白表达降低可能与弱精子症精子活力低下有关。Y-微管蛋白复合物相关蛋白2(gamma-tubulincomplexcomponent2,GCP2)在低活力精子中是低磷酸化的。综上研究得知部分蛋白质参与精子运动过程并影响精子活力，使我们对精子功能调节有更深的见解，部分蛋白有望成为弱精子症精子质量评估及疾病诊断的新指标,且有助于寻找治疗弱精子症的治疗靶点，为IVF手术提供候选方案。4.生物信息学：近年来随着生命科学和计算机技术的高速发展，应运而生了众多大型科研数据库，其中包括蛋白质数据库（如UniProtPDB等1基因数据库等。生物信息学利用模式识别对蛋白质进行功能预测，并且与计算机图像分析、大数据分析等技术的结合也在蛋白质组研究领域起着至关重要的作用，并取得一定进展。miRNA参与精子发生，相关人员利用芯片杂交技术构建了mRNA和miRNA基因表达谱，应用miRBasexTarBase等数据库,研究弱精子症mRNA和miRNA差异表达谱中对应的靶基因，解析差异表达基因的生物学通路的同时可揭示转录组和蛋白组之间的相互调控作用或者关联。刘利敏33利用miRBase.TarBase等数据库研究显示弱精子症精子表达下调的基因主要聚集在精子发生、线粒体结构和呼吸链组分、蛋白代谢等方面，这可能是导致精子活力低下的原因之一。余振东等34利用生物信息学筛选得到特异性新基因TSBAG,该基因与精子发生有密切联系，同时检测到精子发生与热休克蛋白的调节作用有关。毛向明等35通过生物信息学分析显示弱精子症患者精子中蛋白质及大分子物质新陈代谢下降同时差异基因在细胞死亡/凋亡以及凋亡介导的生物过程中富集，通过调控下游蛋白质影响着精子的活力。景晓玮36运用多种生物信息学工具对基因芯片筛查得到关键基因CRISP2,并对其进行深入研究得出CRISP2基因以及蛋白的表达水平与精子活力密切相关。有研究通过小鼠精子发生蛋白进行生物信息学分析，使用DAVID进行京都基因与基因组百科全书(kyotoencyclopediaofgenesandgenomes,KEGG)通路富集分析和基因本体分析，以获得相关蛋白的功能概述37o综上，生物信息学成为弱精子症差异蛋白功能及相互作用部分探索的重要工具，蛋白质的相互作用网络有望成为弱精子症发病机制研究及诊断的重要支撑。蛋白质组学研究的最初目的是识别和定量蛋白质,而生物信息学可用于数据表示、数据库构建和功能注释。基于生物信息学的弱精子症蛋白质组学研究有效地利用大型数据库等现有资源，缩小了样本之间的差异性和独立性，从基因调控到蛋白质的表达阐述了弱精子症的发生发展机制，也拓宽了弱精子症研究的视野。近年来采用生物信息学和实验相结合的研究方式，在探寻疾病原本机制的同时加入干预措施，为更好地探索蛋白质所在通路层面的弱精子症的诊治提供了思路。二.结论与展望随着人们社会压力的增加和生活环境的改变，弱精子症的发病在逐年上升。弱精子症不但给男性带来了极大的心理负担和健康隐患，而且在目前人口老龄化严重及实施三孩生育政策的大背景下，弱精子症也极大地影响着国家生育率的提高。探讨弱精子症的病因及发病机制能为弱精子症的诊断和治疗提供扎实的理论基础。本文从多方面系统地阐述了弱精子症在蛋白质组学方面的研究进展，先前研究表明蛋白质可在多种层面极大地影响着弱精子症的发生发展。弱精子症精子中的相关差异蛋白种类及其数量的变化与弱精子症的发生发展及疾病进展密切相关，蛋白质相互作用及机制通路和代谢途径也参与调控精子活力、精子的成熟等关键环节，以上为弱精子症病因探究、诊断及发病机制的研究提供了丰富的理论基础。值得关注的是弱精子症的发病机理仍旧尚未明确。近些年，蛋白质组学在弱精子症中的应用取得了诸多成果。随着2-DE、酵母双杂交技术、质谱、3D蛋白质组学、软电离技术、生物信息学等蛋白质组学及相关技术的逐步发展，近年来发现众多弱精子症相关差异蛋白。分析差异蛋白及其互作蛋白，筛选和鉴定与精子活力相关蛋白，研究其功能对于弱精子症的病因学机制及诊断意义深远。目前GRP78蛋白的研究从牛弱精子症定性过渡到人弱精子症定量，直接揭示了人弱精子症精子活力的调节与其息息相关，为该疾病的临床诊治弱精子症提供了新的研究靶点。蛋白PATE1在老年男性及年轻弱精子症患者精子中均呈现下调，后通过仓鼠无透明带卵母细胞进行体外细胞实验得出PATE1参与精卵穿透和精子运动才是示可能与弱精子症精子活动力密切相关28oHs-14检测蛋白与精液质量显著正相关，且Hs-14单克隆抗体不仅结合Hs-14蛋白,还可以与过渡性内质网ATP酶(transitionalendoplasmicreticulumATPaseszTERA)和微管蛋白结合，提示TERA和微管蛋白与弱精子症密切相关，进而研究该类结合蛋白与弱精子症的发生发展机制。以上研究提示多种蛋白质及其相互作用物的变化对于弱精子症的发生发展及精子活力研究有着重要的导向意义。大量差异表达的蛋白质不仅能作为弱精子症临床诊疗的生物标志物，而且能从不同角度认识弱精子症的发病机制，为临床诊断、研发药物和IVF提供新的思路。与此同时，蛋白质组学技术的发展也面临着瓶颈，蛋白质组学各方法的整合互补和优化，以及与基因组学、生物信息学等学科交叉利用等方面仍存在广阔的发展空间。相信随着蛋白质组学及相关辅助技术的不断发展，蛋白质组学将会在疾病蛋白层面的研究中更有前景。尽管之前的研究在蛋白质组学方面取得了很多成果，然而关于精子自身程序性死亡对于弱精子症发病机制的探讨并没有过多的关注。自噬是一种细胞程序性死亡方式。我们在先前的实验中获知自噬和弱精子症的发生发展有紧密联系。Erkkila等38研究表明糖酵解中线粒体ATP生产机制在调节体外诱导的人类男性生殖细胞凋亡的主要途径中起重要作用。根据目前的研究现状猜测糖酵解途径可能通过复杂的信号通路，影响能量代谢障碍，进而促进精子程序性细胞死亡，降低精子活力。然而，其机制尚需深入探索、证实及完善。探索缺氧与自噬在弱精子症中的作用机制及通路有一定的创新性，有助于探索自噬通路与糖酵解通路之间的联系以及蛋白质相互作用机制与精子活力之间的关联，扩展弱精子症发生机制的认识以及为弱精子症的诊疗提供新的理论基础。参考文献李新阳，孙自学.基于网络药理学和分子对接探讨益肾通络补气方对少弱精症大鼠雌激素受体的影响J.中成药，2021,43(11):3216-3221.DOI:103969jJssn.1001-1528.2021.11.055.1.iXY,SunZX.ExploringtheeffectsofYishentongqiRecipeonestrogenreceptorinOligoasthenoteratozoospermicratsbasedonnetworkpharmacologyandmoleculardockingJ.ChinTradlPatentMed,2021,43(11):3216-3221.DOI:10.3969j.issn.1001-1528.2021.11.055.2世界卫生组织.世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册第五版M.北京：人民卫生出版社，2011.WHO.WHOLaboratoryManualfortheExaminationandProcessingofHumanSemenFifthEditionM.Beijing:People'sMedicalPublishingHouse,2011.3中国医师协会生殖医学专业委员会生殖男科学组弱精子症诊疗中国专家共识编写组弱精子症诊疗中国专家共识UL中华生殖与避孕杂志,2021,41(7):593-599.DOI:103760101441-20210520-00224.ChineseExpertConsensusCompilationGroupforAsthenozoospermiaDiagnosisandTreatment,ReproductiveAndrologyGroup,ReproductiveMedicineProfessionalCommitteeofChineseMedicalDoctorAssociation.Chineseexperts'consensusonthediagnosisandtreatmentofasthenozoospermiaJ.ChinJReprodContracepz2021,41(7):593-599.DOI:10.3760101441-20210520-00224.程秀艳，杨晓华.重度少弱精症及无精症381例细胞遗传学分析几河北医学,2012,18(12):1845-1847.DOI:10.3969j.issn.1006-6233.2012.12.075.ChengXY,YangXH.Cytogeneticanalysisof381caseswithsevereOligoasthenoteratozoospermiaandazoospermiaJ.HebeiMed,2012,18(12):1845-1847.DOI:103969j.issn.1006-6233.2012.12.075.5徐清华，马振勇，王琳琳，等.1469例不孕不育患者细胞遗传学分析J.中国优生与遗传杂志,2017,25(5):53-55,58.DOI:10.13404ki.jbhh.2017.05.022.XuQH,MaZY,WangLL,etal.Cytogeneticanalysisof1469infertilitypatientsJ.ChinJBirthHealthHeredity,2017,25(5):53-55,58.DOI:10.13404ki.cjbhh.2017.05.022.郑杰梅，刘之英夏培，等764例精液异常患者的细胞遗传学分析J.中国优生与遗传杂志,2017,25(2):76-78.DOI:10.13404ki.jbhh.2017.02.032.ZhengJM,LiuZY,XiaRetal.Cytogeneticanalysisof764patientswithabnormalsemenJ.ChinJBirthHealthHeredity,2017,25(2):76-78.DOI:10.13404/ki.cjbhh.2017.02.032.7高轲，王志强刘星辰，等.少、弱、畸精子症相关遗传基因研究进展J中华男科学杂志,2017,23(4):367-371.DOI:10.13263jxnki.nja.2017.04.014.GaoK,WangZQLiuXC,etal.Geneticgenesassociatedwitholigospermia,asthenospermiaandteratospermia:AdvancesinstudiesJ.NatlJAndrol,2017,23(4):367-371.DOI:10.13263jxnki.nja.2017.04.014.8郭瑞莹，李玉山，王金先.弱精子症患者精子中LDH-C4表达的变化J.医药论坛杂志,2014,35(9):11-12.DOI:CNKI:SUN:HYYX.0.2014-09-006.GuoRY,LiYS,WangJX.ChangesofLDH-C4expressioninpatientswithasthenospermiaJ.JMedForum,2014,35(9):11-12.DOI:CNKI:SUN:HYYX.0.2014-09-006.9邱晓峰，胡小平，李元杰，等.宁夏地区汉族MTHFR基因C677T多态性与男性无精和严重少弱精的相关性分析JL宁夏医科大学学报2011,33(7):625-628.DOI:10.16050ki.issn1674-6309.2011.07.034.QiuXF,HuXRLiYJ,etal.AssociationbetweenmethylenterahydrofolatereductasegeneC677TpolymorphismandmaleinfertilitywithazoospermiaorsevereOligozoospermiaandAsthenospermiainNingxiaHanPopulatioJ.JNingxiaMedUniv,2011,33(7):625-628.DOI:10.16050ki.issn1674-6309.2011.07.034.10WilkinsMR,SanchezJC,GooleyAA,etal.Progresswithproteomeprojects:whyallproteinsexpressedbyagenomeshouldbeidentifiedandhowtodoitJ.BiotechnolGenetEngineeringRev,1996,13：19-50.DOI:10.1080/02648725.1996.10647923.11DomonB,AebersoldR.MassspectrometryandproteinanalysisJ.Science,2006,312(5771):212-217.DOI:10.1126science.1124619.12彭咏波，马永平，唐伟，等.弱精不育患者与正常生育能力者精浆蛋白质的双向电泳图谱分析J.生殖与避孕,2007,27(12):764-767,771.DOI:10.3969j.issn.0253-357X.2007.12.003.PengYB,MaYRTangW,etal.Differentialanalysisoftwo-dimensionalgelelectrophoresisprofilesofseminalplasmaproteininhumanasthenospermiaseminalplasmaandnormalseminalplasmJ.ReprodContracepf2007,27(12):764-767,771.DOI:103969j.issn.0253-357X.2007.12.003.13BoilardM,Reyes-MorenoC,LachanceC,etal.LocalizationofthechaperoneproteinsGRP78andHSP60ontheluminalsurfaceofbovineoviductepithelialcellsandtheirassociationwithspermatozoaJ.BiolReprod,2004,71(6):1879-1889.DOI:10.1095biolreprod.103.026849.14申树林，刘德铭，贺大林.GRP78在弱精症精子和活力正常精子蛋白中的表达差异研究J陕西医学杂志,2012,41(1):27-29.DOI:103969j.issn.1000-7377.2012.01.007.ShenSL,LiuDM,HeDL.DifferentialexpressionofGRP78inasthenozoospermicandmotilenormozoospermicspermatozoaJ.ShaanxiMedJ,2012,41(1):27-29.DOI:10.3969j.issn.1000-7377.2012.01.007.15FreitasMJ,SilvaJMBrothagC,etal.Isoform-SpecificGSK3AactivityisnegativelycorrelatedwithhumanspermmotilityJ.MolHumReprod,2019,25(4):171-183.DOI:10.1093molehrgaz009.16LiK,LiW,HuangY.DeterminationoffreeL-carnitineinhumanseminalplasmabyhighperformanceliquidchromatographywithpre-columnultravioletderivatizationanditsclinicalapplicationinmaleinfertilityJ.ClinChimActa,2007,378(1/2):159-163.DOI:10.1016j.cca.2006.11.008.17LazzarinoG,ListortiI,MuziiL,etal.Low-molecularweightcompoundsinhumanseminalplasmaaspotentialbiomarkersofmaleinfertilityJ.HumReprodf2018,33(10):1817-1828.DOI:10.1093humrepdey279.18MurdicaV,CermisoniGC,ZarovniN,etal.Proteomicanalysisrevealsthenegativemodulatorofspermfunctionglycodelinasover-representedinsemenexosomesisolatedfromasthenozoospermicpatientsJ.HumReprod,2019,34(8):1416-1427.DOI:10.1093hmrepdez114.19陈厚仰.TDRG1蛋白在弱精子症中的作用及其机制D.南昌：南昌大学,2019.ChenHY.Roleandmechanismoftdrg1proteininasthenospermiaD.Nanchang:NanchangUnive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