脂肪酶LPS活性试剂盒说明书.docx

脂肪酶（LPS）活性试剂盒说明书微量法100T/96S注意，正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。澜定意义：1.PS又称甘油酯水解防，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。澜定原理：1.PS催化油防水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。自备仪器和用品：研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、甲苯80mL、冰和蒸储水。试剂一: 试剂二: 试剂三: 试剂四: 标准品:液体65mL×2瓶, 液体IOmLxl瓶, 甲苯80mLxl瓶, 液体IOmLxl瓶,试剂组成和配制:4保存。49保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡20min°4保存（自备）。49保存。液体10IlLXl瓶，10molmL的标准溶液，4保存。临用前加入3.168mL甲苯，充分溶解。粗胸液提取：1 .组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：510的比例（建议称取约0.1g组织，加入ImL试剂一）进行冰浴匀浆。12000g,4离心IOmin,取上清置冰上待测。2 .细菌、真菌：按照细胞数量（IO4个）：试剂一体积（mL）为5001000:1的比例（建议500万细胞加入ImL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w,超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后12000g,4,离心IOmin,取上清置于冰上待测。.血清等液体：直接检测。1.PS流定操作：1.分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到710nm,蒸储水调零。2.试剂一和试剂二置于37水浴预热30mino3.在1.5mLEP管中依次加入卜列试剂试剂名称（L）空白管测定管蒸溜水150样本50试剂一300300试剂二10037C振荡反应IOmin试剂三80080037C振荡反应IOmin后，8000g,25,离心IOmin,取上清液试剂名称（L）空白管测定管标准管上清液400400标准品400试剂四10010010037C振荡反应5min后，静置5min,取200L上层液加入微量石英比色皿/96孔板，于71Onm处测定吸光值。注意：空白管和标准管只需测定一次。1.PS活性计算公式：1 .组织、细菌或细胞LPS活性（1）按照蛋白浓度计算活性单位定义：37七中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1mol脂肪酸为一个醉活单位。1.PS（molminmgprot）=C标准品X（A测定管-A空白管）÷（A标准-A空白管）×V反总÷（Cpr×V样）÷T=16x（A测定管一A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷Cpr（2）按照样本质量计算活性单位定义：37七中每克组织每分钟水解橄榄油生成1mol脂肪酸为一个酶活单位。1.PS（molming鲜重）=C标准品X（A测定管A空白管）÷（A标准管-A空白管）×V反总+（W×V样÷V样总）÷T=16XKA测定管一A空白管）÷（A标准管-A空白管）W（3）按照细菌或者细胞数量计算活性单位定义：37中每IO4个细胞每分钟水解橄榄油生成lmol脂肪酸为一个酶活单位。1.PS（molmirIOSCen）=C标准品X（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）xV反总÷（细胞数量XV样÷V样总）÷T=16x（A测定管一A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷细胞数量2 .血清等液体LPS活性活性单位定义：37C中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成Imol脂肪酸为一个所活单位。1.PS（molminmL）=C标准品X（A测定管一A空白管）÷（A标准管A空白管）xV反总÷V样÷T=16M（A测定管一A空白管）÷（A标准管-A空白管）C标准品：10molmL:V反总：反应总体积，0.8mL；V样：反应中加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，ImL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mgmL,需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；W：样本质量，g；T：催化反应时间，10min0