医院常规苏木素－伊红（HE）染色操作规程.docx

常规苏木素一伊红（HE）染色操作规程染色步骤：1、二甲苯I：5-IOmin2、二甲苯H：5IOmin3、二甲苯HI：5IOmin4无水乙醇I：13min5、无水乙醇:13min6、 95%乙醇：13min7、 80%乙醇:：13min8、水洗：Imin9、苏木素：3IOmin10、流水冲洗：Imin11、酸乙醇分化：1一3S12、水洗：30S13、40%氨水或温水（40度左右）返蓝Imin14、0.5%伊红液染色:l-3min15、水洗：IOS16、80%乙醇：IOS17、95%乙醇：l-3min18、无水乙醇I：l-3min19无水乙醇:13min20、二甲苯I：3-5min21、二甲苯:3-5min22>二甲苯III：35min中性树胶封固（湿封）以上1、2、3中二甲苯的作用：石蜡切片的常规染色必须先用二甲苯脱去切片中的石蜡，其作用是二甲苯可以溶解切片中的石蜡，以使染料易于进入细胞和组织，石蜡的存在妨碍水和染料进入细胞。以上4、5、6、7中酒精的作用：酒精用于苏木素染色前由高浓度向低浓度逐渐下降处理切片，是为了洗脱用于脱蜡的二甲苯，使水能进入细胞和组织中，因为纯酒精可以中和二甲苯互溶，二甲苯经过二次纯酒精的洗涤，完全被除去，再经过95%、80%酒精使水分逐渐进入切片，以免引起细胞形太结构改变。此时水洗作用：洗去未与切片结合的染液。此时分化的作用：苏木素染色之后，用水洗去未结合在切片中的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液0.5l%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程称为染色的分化作用，因酸能破苏木素的醍型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。此时水洗的作用：为了除去分化液和脱下的染料中止分化作用。此时水洗的作用：用水洗去未结合的染液，以防止大量伊红染液进入脱水的酒精中。以上16、17、18、19中酒精的作用：为二甲苯进入细胞创造条件，这时必须彻底脱水，否则二甲苯不能进入细胞组织切片透明度达不到光符显微镜观察时透光度的要求，在显微镜下能显示清晰的细胞和组织结构。此时二甲苯的作用：起透明切片的作用，以利于光成的透过。中性树胶的橡胶滴管，滤一滴在组织片的正下方右。