核桃研究进展.docx

经济林木争论进展1.1 核桃概述核桃(J"g4"sWghL.)又名胡桃属于胡桃科(JUgIandaCeae)核桃属(JUgkms),为胡桃科落叶乔木。与扁桃、腰果、榛子并称为世界闻名四大干果(都荣庭和张毅萍，1996)。核桃是重要的果材兼用树种之一，也是中国重要的出口农产品。依据FAO(2022)统计数据，2022年，我们我国种植核桃面积为40万公顷，带壳坚果产量为165.6万吨，占世界核桃总产量的48%,位居世界第一位。我们我国核桃育种工作者于20世纪60年月开头实生选种、杂交育种，80年月开头从国外引种，到目前已有超过100个品种在生产中应用。由于受环境条件限制和品种要求的影响，只有一部分品种被大面积推广，但很少有品种能占到肯定优势。特殊是由于我们我国核桃产业的快速进展，种植者不考虑品种的合理配置，生产中栽培品种多而混杂，很多实生繁殖的苗木时常混于其中。除此之外，由于四川品种间亲缘关系很近，有些苗木很难区分，也是造成品种混杂的缘由之一。品种杂乱、种植中配置又不够合理，造成收获的坚果质量层次不齐、外形各异，加工品质不一，对果实的加工、分选都造成障碍，不仅无力参加竞争，也难以满意市场对核桃品质的需求，建立一种合适的品种鉴定的体系，合理选择生产用的品种尤为重要和迫切。坚果是核桃种植中最主要的目标产品，在栽培中合理配置品种，选用相同品种或坚果外形相近的品种对果实分选和加工有重要意义。过去的争论证明在核桃不同基因型坚果特征中(比如：坚果大小、果形、果壳厚度、核仁颜色等)存在丰富的变异(COSmUIeSCU&Botu,2022)。而且，坚果外形，也就是内果皮外形，是一种稳定可遗传的特性，能够在种质收集中通用(TrUjillOR.,2022)。坚果外形特征也己被国际新品种爱护联盟(UPOV)作为核桃DUS测试指南中的描述符被应用。可是，仅用果实是很难区分全部品种，特殊是由于很多品种的亲缘关系很近，很多坚果外形特别相近。因此，需要用一种有效并且明确的遗传指纹作为形态评价的补充来清晰的区分每一个品种。1.1.1 核桃的起源核桃原产于中亚，包括中国新疆、哈萨克斯坦、乌兹别克斯坦和吉尔吉斯斯坦的部分区域,从尼泊尔、中国西藏、印度北部和巴基斯坦的山区往西到阿富汗、土库曼尼亚和印度，再到阿塞拜疆、亚美尼亚、格鲁吉亚和土耳其东部地区（McGranahan&Leslie,2022）f在我们我国的分布遍及南北。泡核桃起源于云南、四川、西藏等省（自治区），其中地处云南大理州的漾溪县占有重要位置。20世纪80年月，有学者对泡核桃分布区考察后发觉，在西藏和云南省，特殊是澜沧江流域，泡核桃的种质资源也特别丰富，既有野生类型，也有栽培类型，还有半野生状态的中间类型。在西藏，目前仍存在着很多核桃和泡核桃的原始群落。1.1.2 核桃的种类核桃属植物包含23个种，被分为四组，即：核桃组（SeCtion力华/sw）、核桃楸组（SeCtionCardiocaryon）黑核桃组（SeCtionRsoCYZfy和灰核桃组（SeCtionTyaCzlyCGyo）（都荣庭，1990）,主要分布在北温带，但对亚热带、热带山地森林气候也有广泛的适应性。据联合国粮农组织年鉴资料，2022年世界上生产核桃的我国有54个（FAO,2022）。我们我国是核桃的原产地之一，现有核桃属植物9个种，其中原产于我们我国的有5个种，分别为核桃、核桃楸、野核桃、泡核桃和麻核桃；其中广泛栽培的是核桃和泡核桃，种质资源特别丰富，仅中国核桃种质资源一书记载的核桃品种、实生农家类型、优良无性系、优良单株和特异种质资源就有223个，泡核桃的47个（裴东和鲁新政,2022）o1.1.3 核桃的分布据相关资料显示，目前核桃的分布和栽培遍及世界五大洲中40多个我国及地区，栽培总面积达到200万公顷以上（毅萍，2001）,我们我国作为核桃的原产地之一，除了黑龙江省、上海市、广东省、海南省、台湾省等省市外,全国其他省市地区均有栽培种植核桃，主要产区主要有云南、山西、陕西、河北、甘肃、河南、四川、北京、浙江、贵州、山东、新疆和辽宁省。分布于中国西南地区（四川、云南和贵州）的核桃属3个种，不仅对世界核桃属植物的起源、系统进化有着重要作用（路安民，1982）,而且对世界核桃属资源的爱护和可持续采用也具有重要的作用。核桃在四川自然分布极为广泛，遍及全省各地，同时也是该省的主要经济树种之一。1.1.4 核桃的价值核桃是一种养分价值、药用价值、经济价值以及文化价值都很高的珍奇果木。其中部分种的坚果具有极高的食用价值而被广泛栽培和采用，其种仁除含脂肪、蛋白质、碳水化合物外，还含钙、磷、铁、胡萝卜素、硫胺素、核黄素和尼克酸等多种成分（高焕章等,2000）。有关争论报道（郝艳宾等,2022）每IOOg核桃仁中含有蛋白质14.6g-19g,脂肪63g-70g,碳水化合物5.4g-10.7g,钙85mg-108mg,磷28Omg-329mg,铁2.6mg-3.2mg,硫胺素0.32mg,核黄素0.11mg,尼克酸1.0mgo而且所含的脂肪中有着丰富的必需脂肪酸亚油酸，以及对人体健康有益的脂肪酸、褪黑激素、生育酚以及抗氧化剂等化合物，具有很高的养分和药用价值，能够有效减缓和预防心脏病、糖尿病、高血压、肥胖症以及抑郁症等疾病的发生（李敏等，2022）o此外从核桃枝和皮中的提取的化学物质5-羟基-1,4-蔡酉昆又名胡桃酿，争论表明在抗癌、抗菌作用中它起着重要功效的作用。核桃对于大多数消费者来说主要在于食用核桃仁上，不过现今的核桃市场已不单单在食用核桃仁这一项上，近年来有报道（王丰俊等，2022）一种核桃仁榨油后的残渣，即核桃粕，可以用来作为蛋白原料进行核桃督油的生产，且这种核桃酱油的品质好,这使核桃资源得以充分采用，对于核桃的综合采用将来前景大好,而且核桃酱油的开发也对健全和建立健康的中国调味品市场，有着深远的意义。核桃壳（王丰俊等,2022）也一度被作为弃物处理，然而有争论发觉，用处理过的核桃壳颗粒来制造的过滤器，在石油行业中得到了良好的应用，此外核桃壳颗粒还适用于气流冲洗操作的研磨剂，并且将核桃壳颗粒添加在涂料中，能够增加涂料的鲜活立体感，如若在炸药中添加了核桃壳颗粒还能够增加威力，也可应用于化妆品德业,增加清洁效果。1.2 果树种质资源鉴别技术的争论现状1.2.1 我们我国果树种质资源的收集保存现状果树种质资源指的是具有采用价值的果树遗传物质的总体，是植物保存和改良采用的物质基础,包括栽培品种、半栽培品种、野生类型及人工制造的新类型。人们可以直接采用种质资源制造出新品种，也可以将其作为杂交亲本，进一步综合亲本有力基因来改良现有的植物品种，或做砧木材料间接加以采用，或通过诱变等方法来制造新的基因类型。大多数果树种质资源是遗传上高度杂合的多年生木本植物，背景极为简单，很多重要的农艺性状，如产量、品质、抗逆性等，多为微效多基因掌握的数量性状。中国果树资源丰富，是世界上最大的果树原产中心之一，素有“园林之母”的美称，是很多果树种类如海棠果、西府海棠、苹果、沙梨、杜梨、秋子梨、桃、核桃、泡核桃、柿、山楂、枇杷、梆猴桃、甜橙、中国李、杏、板栗、枣、酸枣、荔枝、龙眼、梅等的原产国或起源中心，是果树种质资源最为丰富的我国之一（慕茜等，2022;任国慧等，2022）o此外还有不少尚待驯化的栽培果树的近缘种、野生种和砧木资源，以及从世界各地引种的果树资源。引种的果树资源经过长期的栽培选择，形成了很多适应本地自然和栽培条件的生态类型和地方品种。中国的果树资源也为世界果树生产进展和品种改良作出了贡献。如桃、柑橘、杏、梨、甜橙等已经在世界各地栽培，温州蜜柑和中华梆猴桃也已分别在日本和新西兰广泛栽培。板栗、梨、山樱桃、毛桃、核桃楸等供应了抗病、抗寒育种的材料。我们我国果树种质资源工作者经过多年艰苦奋斗，在果树种质资源的评价、采用等方面作出了卓越的成就。上世纪60年月到80年月的开展了全国性果树资源普查，自1980年开头依据自然区划、树种分布，先后建立了17个我国种质资源圃，包括苹果、梨、葡萄、桃、柿、核桃、草莓、龙眼等重要果树的种质圃，以及特地保存宝贵少有果树类型的公主岭寒地果树圃和新疆名特果树圃等，截止2022年底，17个我国种质资源圃共保存种质14720份，其中郑州葡萄、桃圃保存1777份，保存份数最多；泰安核桃、板栗圃保存种质741份（王力荣，2022）,到2022年底，泰安核桃、板栗圃已保存来自全国各地以及日本、美国等我国核桃属种质资源10个种的375份种质资源（刘庆忠和陈新,2022）。随着经济的进展，又不断的选择和制造出很多果树新品种。它们不仅是果树生产和科研的物质基础,还是果树产业可持续进展的前提和保障。为了爱护我们我国名、优、特种质及育种者的学问产权，加强和法律规范果树苗木市场管理，更好的采用已有资源,建立有效种质鉴别和品种鉴定评价体系特别必要。从直观的形态学观看到细胞学和分子水平的检测，很多方法被胜利应用于果树种质资源的起源、演化、分类和品种鉴定中。1.2.2 果树种质资源的传统鉴定方法形态学性状是植物最直观的可以进行描述的外部特征，通过比较植物学形态特征的差异来达到种质鉴定的目的。由于方法操作简洁，依据所争论树种的最显著的形态特征如叶、花、果等进行区分、分类和命名，我们我国果树种质资源的评价主要停留在表型性状上。形态性状特殊是养分器官简洁受到环境变化的影响,而且由于受育种亲本的限制，很多新品种形态上愈加相像，无法用形态学方法对品种进行鉴定，也就不能进行品种纯度的检测。依据果实特征差异的品种鉴定要等到果树结果之后，周期较长，所以形态学标记已经难以满意对越来越多自然选育和人工培育的果树品种进行鉴定的要求（王国荣和吴府胜,2007）。细胞学鉴定采用染色体核型分析，试验条件相对简洁，尤其是结合分带技术可以揭示出大量染色体结构的变异，但是由于染色体制片技术和辨别率的限制，核型分析在种的分类中应用较多，穆英林和都荣庭（1988）依据核型特点，将供试的核桃属7个种分为三组，并争论了组间及组内进化的亲缘演化关系。但将核型分析应用于品种鉴定还有肯定的难度，尤其对于大多数具有小染色体和结构差异较小的果树来说，染色体核型分析还不足以达到进行品种鉴定的目的（宋婉，2000）o抱粉学鉴定主要依据植物花粉的外形、花粉的长宽比、花粉孔的大小和数量、花粉壁外形、花粉壁厚等对果树种、品种分类鉴定的方法。花粉的形态特征由于受植物基因型掌握不被外界条件影响，结果比较稳定。该方法已胜采用于桃（汪祖华和周建涛，1990）、板栗（谢治芳等，2006）、核桃（任列花等，2005）等果树的分类和品种鉴定中。但是试验条件和花粉制备方法不同会对鉴定的结果有影响，造成同一品种的花粉粒之间会存在个体差异，还会由于败育等影响造成花粉粒干瘪,所以以个别花粉外形的差异，作为鉴定依据，有时并不行靠，必需结合其它指标进行评定。等位酶进行果树资源鉴定曾受到广泛的关注，其争论几乎涉及全部种类的树种，取得的结果也较为抱负。但等位前活性会受时空影响，在植物的生殖、发育的不同阶段会有差异，而且在非正常生长环境或逆境的条件下，可以诱导植物合成新的特异性蛋白，导致酶谱的转变，用于果树种质资源鉴定中，明显是有缺陷的。除此之外，由于果树的生长周期较长，并且长期通过嫁接等无性方式繁殖，加上不同地域间的相互引种，造成果树中同名异物和同物异名现象特别普遍，这更为果树品种的鉴定和分类增加了难度。因此，DNA分子标记一经发觉，由于反映核苜酸水平的差异，不受发育阶段、组织差异以及环境条件影响，且变异丰富等众多优势，很快的应用于果树种质研究的方方面面。1.2.3 分子标记在果树种质资源鉴定中的应用RFLP标记在品种鉴定中的应用最早，但RFLP操作相对麻烦，因止匕RAPD一诞生，由于简便快速、不受种属限制、有众多的随机引物可供筛选使用，很快成为品种鉴定的常用手段。RAPD标记已胜利地应用于桃、杏、李、樱桃、梅、草莓、狒猴桃、苹果、香蕉、橄榄、梨、葡萄、番木瓜、芒果、无花果等多种果树上(薛淮等,2003)。而于华公平(2022)对RAPD技术在鉴定果树品种中的科学性进行了技术上的验证与分析得出，不同果树中RAPD引物体现出谱带清晰度以及数量等方面的特点不同：碱基数为9、10与11的引物在杏、桃、李和梅上的多态性较高且谱带清晰，苹果、梨和葡萄更适合应用11个碱基的引物。在目前已有的分子标记中，SSR因其高度的多态性和可重复性高，被越来越多的用于果树的种质资源鉴定中。Kimura等(2002)用9个SSR标记区分了6个梨属的60个基因型,Galli等(2005)用6个SSR标记区分了66个苹果品种,Cheng和HUang(2022)用7个SSR标记区分了中国32个桃品种，每个品种都有独一无二的SSR指纹，可见SSR技术在用于果树品种鉴定中的有效性。为了快速并牢靠的进行品种鉴定，AranZana等(2001)采用AFLP和SSR两种多态性标记，对100个桃品种进行鉴定，其中9个引物组合的40个AFLP标记可区分97个基因型，7个SSR标记的32个等位基因可以鉴别78个基因型，假如将两种标记结合则可以鉴定99个基因型。由此可见，DNA分子标记无疑为果树种质鉴定供应了一种强有力的技术。除此之外，它们在遗传争论和果树生产中也有特别广泛的实际应用。UPOV已将DNA分子标记鉴定纳入农作物品种DUS测试内容，并在分子生物学技术(BMT)测试指南草案中，将构建DNA指纹数据库所使用的标记方法确定为SSR和SNP。其中，SSR标记因具有多态性高、重复性好、共显性优点，被UPOV生物化学和分子技术工作组验证为植物新品种爱护最广泛应用的标记体系(张靖国等，2022)o但值得留意的是，由于不同的育种机构保存、繁殖和选育标准的差别，有些同名品种间，无论在形态上还是在DNA指纹上，都存在肯定的差异，这给用DNA指纹鉴定的全都性也造成了困难(滕海涛等,2022)。近5年，研究者综合不同标记系统，主要将形态学标记和生化标记、分子标记结合起来使用，综合的评判种质资源的多样性以及品种的分类。特殊是形态学同DNA分子标记技术的结合，为种质资源供应了更为客观的评价。MaIVolti等(2022)结合ISSR标记、种子形态特征(果形指数和单果重)和果实成分(总油、脂肪酸和维生素E)分析意大利十个不同地区的核桃种质，用基因分型的结果与形态学和果实生化分析的结果相互印证，认为坎帕尼亚的丘陵地区和阿布鲁佐的山区的基因型具有不同的遗传、形态和生化特征，是优异的育种的资源。Ebrahimi等(2022)用形态学指标和SSR标记分析了35个核桃基因型，认为伊朗的基因型SSR位点和形态学特征都具有很高的多样性。Trujillo等(2022)用33个SSR标记和11个内果皮特征对世界油橄榄资源库中的499份材料进行的区分，结果显示在鉴定的332个品种中验证了200个，它们有独一无二的SSR基因分型和内果皮特征。Fendri等(2022)也用SSR标记结合内果皮特征对突尼斯油橄揽资源圃的种质资源进行了区分。类似的研究在其它果树也被开展(GanOPoUIoSetal.,2022)。分子标记具有众多的优越性，但它们不能猜测是否不同基因型之间存在形态学或农业性状的差异。因此，分子标记只能作为形态学的重要补充，在植物新品种DUS测试中应用(GUnjaCaetal.i2022),这充分说明将不同标记系统结合来评价种质资源是顺应科学进展的新思路。1.2.4 果树核心种质的鉴定与评价果树种质资源在长期自然选择和人工引种栽培过程中，形成了丰富的种质资源。随着生产技术水平的提高，人们越来越留意种质资源的收集和保存，急迫的想要爱护因垦荒造地、丘陵山坡开荒等，导致流失甚至濒临灭亡的资源。加之各国各地资源不断积累交换，种质资源数量也急剧增加。大量的种质资源在为果树品种选育供应丰富的遗传基础的同时，也在肯定程度上给种质资源的收集、评价、争论和采用带来了困难。如何对其保存、更新和鉴定,从丰富的种质资源中快速、精确地鉴定出育种上迫切需要的优异基因，对其进行创新和有效采用。BrOWn(1989)提出的核心种质的概念，为种质的保存、评价和采用供应便利。它用肯定的方法选择种质总保存资源中最小的资源数量和遗传重复性，最大程度地代表整个遗传资源的多样性(BroWn,1989)。目前，在很多果树上已开展了核心种质构建工作，并取得了肯定进展。比如在苹果(刘遵春等,2022;2022)、桃(沈志军等,2022)、核桃(王红霞等,2022)、橄榄(BeIajerH2022)等树种中都己建立了核心种质。但其中大多数都停留在初期核心种质阶段，且多是用DNA分子标记统计分析并抽样,没有专用的果树核心种质的基地。只有少数树种运用了多种评价、鉴定方法相结合的方式进入了更高的层次的核心种质，如苹果(刘遵春等，2022)整合农艺性状和分子标记数据构建核心种质，所得的结果可能更具有采用价值。1.3 核桃种质资源争论1.3.1 我们我国核桃属植物资源多样性我们我国是世界上核桃属遗传多样性最为丰富的我国之一，隐藏着众多优良基因源，如抗病、抗虫、抗逆、高产、优质等(郡荣庭和张毅萍，1992)0特殊是新疆、西藏产区，核桃种质资源特别丰富，存在大量的野生种及栽培种类型，且栽培地域特别广泛。严兆福和尚新业(1987)早期对新疆核桃进行分类时发觉，新疆核桃种内类型多样，包括薄壳、厚壳、早熟、晚熟、早实、晚实、麻面、小果等多样类型；种群内核壳厚薄、熟期早晚以及童期长短都包括多种类型；在早实核桃类群中，喀什、和田两地区的早实株数占该区总株数5%左右，阿克苏地区的占该区总株数15%左右，乌什县稍多。郝艳宾(2022)用53个表型数据对核桃资源的起源、植物学特征、生物学特性等性状进行描述，构建了50份核桃资源的种质资源库；依据资源有用性、代表性、多样性等原则，筛选出，薄壳香、香玲、辽宁5号，和，北京746,4份优异核桃资源。曾斌等(2022)采用SSR评价,认为新疆核桃的遗传多样性水平较高，并揭示了新疆核桃属植物的遗传变异、群体集中及其地理系统发育进化等方面的规律，认为在进行遗传多样性爱护和种质资源的保存时，应充分重视群体内不同类型个体的保存，同时也要在分布区不同区域内保存不同的群体。由于我们我国核桃分布地域宽阔，品种类型繁多，很多特异的种质资源在逐步的争论中被发掘出来，比如分布于我们我国陕西省的串子核桃,耐寒、抗晚霜、青果以串状着生；红瓢核桃因其坚果核仁皮色为鲜红而得名；三棱核桃有3条缝合线；五蕾核桃青果聚集成簇状着生；乌米核桃仁皮为黑褐色；橡子核桃坚果特小、似橡子。还有一些如鸡蛋皮核桃、尖尖核桃、尖尾巴核桃、尖嘴核桃、露仁核桃、圆核桃、纸皮核桃等极为形象的描述了其坚果的特点。这些简单的名称,形象的反映了我们我国核桃品种类型的多样性，以及丰富的种质资源。但是以植物特征进行的命名，造成很多种质同名异物或同物异名，这给核桃种质资源的收集、保存和评价都带来肯定的困难。因此，建立简洁有效的核桃种质资源的分类和鉴定方法，对核桃资源的采用和新品种选育特别必要。1.3.2 核桃种质创新核桃主要育种途径有实生选种、引种和杂交育种。引种主要受品种本身适应力量，特殊是生态环境条件的影响，但成本低操作简洁；而杂交育种则由于核桃树树体大，不易操作，需要很大的人力、物力，而且周期长，见效慢，但杂交育种可把双亲的优良特性综合在一起，可以针对特定的性状进行育种，因此仍旧是核桃品种改良的重要手段。以美国的核桃育种为例，加州高校戴维斯分校从1948年开头进行核桃育种，实生选育了，AShIey，、，ChiCo，、，ChandleF、'Howard，、8unland，HartIey，等早实、丰产品种。近年来，通过人工掌握授粉，又培育了产量高、抗病性强、仁色浅、熟期早的三个品种'Sexton'、，GiHet'、Torde,并应用杂交和回交的方式培育抗病及抗线虫品种(MCGranahan&Leslie,2004)o特殊有成效的是种间杂交种，奇异核桃，的培育，它以北加州黑核桃为母本，以核桃为父本通过自然杂交获得种子后而得到的，到目前为止，在很多试验表明奇异核桃的杂种生长势强于纯种，并对核桃黑线病有明显的抗性，不但是优良的砧木类型,还是优秀的用材用品种。波兰、捷克、保加利亚等我国也主要是通过实生选种培育新品种，他们首先进行资源调查，然后从中选出优株、优系，鉴定后予以推广(郁荣庭和张毅萍，1992)。西欧我国如西班牙、法国等国主要是对美国选育出的品种进行引进、试验并进行推广，比如西班牙通过对核桃品种3e，的实生后代进行筛选，选育出了抗根癌农杆菌的砧木类型(FnltOSetal.y2004)o在我们我国，从1959年新疆早实核桃被引入北京地区后，全国很多省份开头引种新疆核桃，并在其实生后代中选育早实丰产的核桃良种。中国林业科学争论院、辽宁经济林争论所、山东省农科院果树所等单位还先后将新疆核桃与当地核桃杂交育种，培育出了中林1号'、，中林5号，、，辽宁1号，、香玲，、鲁光，等良种。林业部1989年鉴定的我们我国北方地区16个早实核桃新品种中，约80%与新疆核桃有渊源，其中有3个品种是新疆直接选送的，另有10个品种是其他省份从新疆核桃的实生后代中选育或采用新疆核桃为亲本或亲本之一与当地核桃杂交培育的。方文亮等(1991)在国内领先开展种间杂交，用泡核桃与新疆早实核桃进行种间杂交，获得了早实、丰产、优质和抗病的云新系列新品种5个。这些新品种的培育为推动我们我国核桃良种化奠定了坚实的基础。近年来，随着核桃产业的快速进展，不同省份间的种质资源沟通也更加频繁。此外，通过基因工程技术改良进行核桃遗传改良也是一条有效的途径。汤浩茹等(2001)通过根癌农杆菌C58CIATHVRifR介导法，将哈兹木霉几丁质酶7E"42基因导入核桃体细胞胚，获得了遗传转化的核桃植株。方宏筠和王关林(2000)以黑核桃幼胚和幼叶为外植体诱导出体细胞胚状体，并通过根癌农杆菌介导将秋川和基因转入体细胞胚，建立了黑核桃体细胞胚基因转化体系。这些争论为我们我国核桃种质创新奠定了基础。13.3国内外分子标记运用于核桃争论的动态与比较目前，分子标记技术在我们我国核桃遗传多样性及品种鉴定争论中的应用，主要是运用同功酶(杨自湘等，1989)和RAPD技术对核桃种群进行地理生态型评价(吴燕民等a,2000)、遗传结构和遗传多样性评价(王正加等,2006;王滑等，2007)、种属鉴定(吴燕民等b,2000)以及查找与核桃目标性状连锁的遗传基因(王国安等,2004)。国外分子标记在核桃上的应用主要有品种(基因型)鉴定、系谱分析、遗传多样性评价、分子标记帮助育种等方面，主要包括同功酶(NinOt.,2003),RFLPs(FjelIstrometal.,1994),RAPDs(Conneretal.,2001),ISSRs(Potteretal.,2002),SSRs(Foronietal.,2005)和AFLP(Maetal.,2022)等。Kafkas等(2005)采用AFLP和SAMPL(selectiveamplificationofmicrosatellitepolymorphicloci)分子标记技术对土耳其的21种核桃基因型的遗传关系进行了测定，采纳8个引物，其中，6个用于AFLP,2个用于SAMPL。结果显示，230条扩增带谱呈多态性，占总数的50.4%。同时表明，与AFLP技术相比，SAMPL技术更能有效地区分遗传关系很近的核桃基因型。Dangl等(2005)依据可评性和多态性位点的数量，从147个微卫星标记中筛选出14个对47份核桃种质和1份奇异核桃(ParadoX)种质进行争论，分析了每份种质相互间的遗传距离，运用UPGMA构建了遗传关系的系统树图，揭示了每份种质的家谱和起源。1.4SNP技术的原理、特点及应用SSR由于高多态性、共显性等优点可以传递更多的信息量(MadhOUetal,2022)oWOeSte等(2002)以黑核桃的基因组，建立了一个富含(GA/CT)微卫星重复序列的基因库，选出1500个克隆的侧翼序列设计并最终筛选出了30对多态性高的SSR引物，从今，黑核桃引物又在以后的应用中不断增加。SSR技术应用核桃属植物研究中涉及最多的是遗传结构、遗传多样性和亲缘关系鉴定的争论。Victory等(2006)和Ross-Davis等(2022)分别对美国黑核桃和美国白核桃的遗传结构和遗传多样性进行争论，证明白此方法的可行性。1.4.1 SNP的原理微卫星DNA又名简洁重复序列(SimPIeSequenceRepeat,SSR),是指基因组中由16个核甘酸组成的基本单位重复多次构成的一段DNA,其长度较短，一般在K)ObP以内，广泛分布于基因组的不同位置。SSR符合孟德尔遗传规律，并且在单个微卫星位点可以做共显性分析。SSR标记采用基因组中某一特定微卫星的侧翼序列保守性较强的特点，依据微卫星的侧翼序列人工合成引物进行PCR扩增，从而将单个微卫星位点扩增出来。(邹喻苹等,2001;赵春梅,2022.)。1.4.2 SNP标记的特点微卫星中重复单位的数目存在高度变异，表现为微卫星数目的整倍性变异或消失重复单位中序列的变异，因而造成位点的多态性。由于单个微卫星位点重复单元在数量上的变异，从而产生了DNA片段长度多态性，每一扩增位点就代表了这一位点的一对等位基因。通过对基因组的深化争论发觉，不同生物体的基因组之间存在肯定程度的相像性(GMCordeiro,2001)o微卫星DNA位点在属内种间，甚至在科内属间是保守的。因此，人们可以共享近缘物种SSR引物对的信息。周涵稻等(2002)用5对甘蓝型油菜(B"sicnapusL.)的SSR引物(Bn92A、Bn6A2、Bn72A、Bn83/3、Bn38A)对分属不同物种的12份材料进行扩增。其中包括2个水稻品种、1个棉花品种、2个芥菜品种、1个白菜品种、2个玉米品种、2个甘蓝型油菜品种、1个柑橘品种以及1种十字花科野生植物M"iCh.ki3soPCR扩增结果显示,全部12份材料用5对SSR引物扩增出的主带片段大小全都，说明各物种基因组间存在着很大程度的相像性。因此，SSR分子标记在不同物种之间是具有肯定的通用性的。由于SSR重复数目变化很大，所以SSR标记能揭示比RFLP高得多的多态性，因而成为遗传标记争论的热点。1.4.3 SNP用于品种鉴定在品种鉴定中，该SSR标记也发挥了巨大的作用(Danglet2005)。张锐(2022)采纳EST-SSR分子标记对新疆核桃种质资源遗传多样性进行评估，认为新疆核桃群体内的多态性较低，群体间的多态性水平差异较小，初步推断新疆栽培种的母本起源相同。周贝贝等(2022)还用黑核桃的引物进行了，鲁果2号，的亲子鉴定争论，证明，上宋6号，和，鲁香，为其亲本，而同时用AFLP未能鉴定出亲本。Foroni等(2005)运用SSR标记研讨了意大利几个主要核桃栽培品种与当地实生种3oTent°，的亲缘关系。近年来，越来越多的争论者留意将不同标记系统结合起来，对争论对象进行更加综合的评价。争论者将形态学特征和SSR结合对不同品种的遗传多样性和遗传关系进行评价(Ebrahimietal.,2022;Mahmoodietal.,2022;PoPerH.,2022),结果供应了形态学特征的描述，但由于其可变性不能明确的估量出核桃的遗传关系，结合SSR标记系统，伊朗等地核桃基因型较高的遗传多样性。这些SSR引物已被证明能有效地应用于核桃基因组的扩增，然而，SSR引物在转移应用时多态性往往会降低(Dang1,2005;Karimietal.,2022)。因此,齐建勋等(2022)、Zhang等(2022)、Zhang等(2022)分别以核桃的EST文库为来源，筛选出了多态性较高的SSR引物，证明白EST-SSR的可行性和有效性，并在引物转移应用方面做了很多努力。但很多争论都证明，EST-SSR由于处在基因编码区，相对基因组SSR而言较为保守(文明富等.2022)oWu等(2022)构建的两个BAC文库可为SSR的开发供应数据支持。通过核桃基因组BAC文库的分析，BAC末端序列(BES)总长度31.2Mb,掩盖了核桃基因组的5.1%。通过序列分析表明，BES序列中的SSR比EST中丰富，该文库是目前可采用最大的基因库。1.4.4 BES-SSRSSR分子标记是在物种进化过程中形成的，在种属间重复次数不同，存在于基因组的编码区和非编码区，即来自于转录组区域的SSR,称为EST-SSR和非转录区域的SSR,也称gSSR。并且在非编码区中更加丰富，多态性也更高(LierR.,2004)。由于具有多位点性、遗传共显性、高度变异性、基因掩盖率高、可自动化和和高通量基因分型等特点，己经成为目前植物遗传育种中应用最为广泛的分子标记(ParidaetR.,2022)。目前报道的核桃SSR引物多来源于核桃基因组编码区，通过检索核桃EST序列开发，它们在相关物种间应用具有很高的可转移性，然而，由于EST-SSR来源于表达序列，序列较为保守，多态性比基因组DNA-SSR低，因此在鉴定高相关基因型、进行指纹图谱构建或品种鉴定中没有基因组DNA-SSR效率高(VarShneyetal.y2005)0SSR近年在核桃属植物的遗传分析中的应用，大多数仍使用的WOeSte等(2002)开发的黑核桃SSR引物,核桃BAC文库的构建为非编码区SSR的开发供应丰富的资源。2争论目的与意义、技术路线