输血科AB0血型鉴定：盐水介质凝集试验.docx

输血科ABO/Rh血型鉴定盐水介质凝集试验操作规程1 .目的规范ABO血型鉴定操作，保证临床用血的安全性和有效性。2 .职责输血科工作人员负责ABO/Rh血型鉴定3 .适用范围适用于输血科ABO/Rh血型鉴定标本4 .实验原理根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及0型4种。利用红细胞凝集反应，通过正反定型准确鉴定ABo血型。正定型：是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应A抗原或/和B抗原；反定型：是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或和抗Bo5 .所需材料与设备5.1 材料抗-A、抗-B、抗-D试剂：A、B、O型反定型红细胞；生理盐水；试管；5.2 标本EDTA-K2抗凝血3ml5.3 设备普通离心机；显微镜；6 .操作步骤6.1 将标本离心，分离血浆与红细胞，吸取红细胞制成3%悬液。6.2 正定型：取试管3支，分别标注抗-A、抗B、抗-D,用滴管分别加抗A、抗-B、抗-D试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入3%红细胞悬液于3支试管中，混匀。6.3 反定型：另取试管3支，分别标注A、B、O细胞，用滴管分别加受检者血清各2滴于试管底部，再以滴管分别加入A、B、O型反定型红细胞，于3支试管中，混匀。6.4 离心1500g*15s6.5 轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞悬浮起来，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象，如肉眼观察未见凝集现象，将反应物倒于玻片上，用显微镜观察。6.6 ABo血型结果判定：见表一6.7 Rh血型结果判定：红细胞与抗-D试剂凝集为抗-D阳性；无凝集为抗-D阴性。6.8 凝集强度判定：4÷:红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+：红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；2+：红细胞凝集分散成许多小块，背景可见游离红细胞；1 +：肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；±:镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有许多游离红细胞；镜下未见凝集，红细胞均匀分布；混合外观凝集：指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍然分散分布。表一、ABO血型结果判定受检者红细胞+标准血清（正定）受检者血清+标准红细f包（反定）受检者血型抗A抗B抗A+BAcBcOc+A一+B一一O+AB7 .注意事项7.1 单克隆抗体试剂和试剂红细胞（谱细胞除外）每天使用前必须与相应的红细胞和血清做阳性阴性对照，以检测其活性。7.2 观察结果时既要看有无凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，有助于A、B亚型、类B、Cis（顺式）AB的发现。7.3 ABO定型的正定型、反定型，其两种定型结果可互相验证和补充，使血型鉴定结果更为准确。7.4 在正反定型结果出现不一致时，需进一步鉴定。7.5 正反定型不一致的原因：7.5.1 标准血清效价太低、亲和力不强。容易将A、B、型误定为0型，AB型误定为A或B型。7.5.2 RBC悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。7.5.3 受检红细胞上抗原位点过少，如亚型；或抗原性减弱，见于白血病或恶性肿瘤,以及类B或CiSAB等7.5.4 受检血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验室温度过高，引起RBC呈缗钱状排列。7.5.5 受检者血清中缺乏应有的抗A及/或抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。7.5.6 各种原因引起的RBC溶解，误判为不凝集。部分溶血时可溶性血型物质中和了相应的抗体。7.5.7 由细菌污染或遗传因素引起多凝聚或全凝聚，往往是正反定型不符的原因。7.5.8 血清中有ABO血型以外的抗体，如自身抗体，常引起干扰。7.5.9 老年人血清中抗体水平大幅度下降。7.5.10 新生儿尚未形成ABO同种抗体，故三个月内的新生儿只做正定型。7.5.11 获得性类B由于G-杆菌的作用，红细胞可获得类B活性7.5.12 近期曾输过异型血，使患者血标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝集”。7.5.13 嵌合体血型体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集二7.5.14 药物等因素药物、右旋糖酊及静脉注射某些造影剂凝集而类似凝集。7.6 如无法找到正反定型不一致的原因，患者又需要紧急输血，则应该给患者输注Rh(D)同型的0型红细胞，同时请市血液中心协助鉴定。7.7 如含有冷凝集素的患者血清，可采用37C生理盐水洗涤3次，如果仍旧2弱凝集，再用42C或45生理盐水洗涤1次,再进行血型鉴定。7.8 自身免疫性温抗体产生的非特异性凝集者，采用递进温度22C-37C-45C的生理盐水洗涤红细胞后做定型试验,或采用放散的方法将红细胞上吸附的抗体释放后再进行血型鉴定。