橡胶草组织培养育苗技术规程.docx

橡胶草组织培养育苗技术规程1范围本标准规定了橡胶草(TaraXaeUInkOk-SaghyZRodin.)组织培养育苗技术的环境与设备消毒、培养基制备、外植体诱导、继代增殖、生根培养、炼苗移栽、生产档案。本标准适用于橡胶草组织培养育苗。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6001育苗技术规程1.Y/T1882林木组织培养育苗技术规程NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程3环境与设备消毒3.1 接种室消毒接种室消毒按YY/T2306-2013中8.6进行。3.2 超净工作台消毒超净工作台消毒按NY/T2306-2013中8.5、8.6进行。3.3 培养室消毒培养室消毒按NY/T2306-2013中8.7进行。3.4 接种器具消毒接种器具按NY/T2306-2013中8.4进行。4培养基制备4.1 母液配制培养基母液配制按LY/T1882-2010中4.1进行。4.2 培养基配制4.3 2.1培养基配方培养基配制成分如下：a) 诱导培养基：MS+6-BA2.0mgL+2,4-DLonlgL+蔗糖30gL+X脂粉5.5gL,PH值5.8；b) 继代增殖培养基：MS+6-BA2.OmgL+NA0.lmgL+蔗糖30gL+X脂粉5.5gL,PH值5.8：c) 生根培养基：12MS+NA0.2mgL+蔗糖30gL+X脂粉5.5gL,PH值5.8。4.2.2培养基配制方法培养基配制方法按LY/T1882-2010中4.2.1进行。4.3培养基灭菌培养基灭菌按LY/T1882-2010中4.2.2进行。4.4培养基保存培养基保存按LY/T1882-2010中4.2.3进行。5外植体诱导5.1 外植体的选择从生长健壮无病虫害的母株上选取5cm6cm长的幼嫩叶片作为外植体。5.2 外植体消毒处理将外植体置于烧杯中，用洗洁精溶液洗涤，然后用自来水冲2h4h,在超净工作台上用75%酒精浸泡消毒30s,倒掉酒精，用无菌水冲洗3次4次；再用0.1%氯化汞溶液浸泡6min,期间不断摇动，倒净氯化汞溶液，用无菌水冲洗6次7次，放在接种盘内用无菌滤纸吸干表面水分。5.3 外植体接种与诱导培养将消毒处理后的外植体切成长ICrn2cm,接种在诱导培养基上进行初代诱导培养。操作时，先将培养瓶的瓶盖取下，再将培养瓶的瓶口倾斜靠近酒精灯火焰，用镒子将外植体接种到诱导培养基上，将培养瓶瓶口在酒精灯外焰上旋转灼烧后封好瓶口。接种完成后，在培养瓶上标注接种物名称和日期，培养20d25丸6继代增殖外植体经诱导培养生成愈伤组织后，分化产生不定芽，将不定芽不断转接到增殖培养基中进行培养，20d25d为1代，进行多次继代。7生根培养将继代后的组培苗接种在生根培养基中诱导生根，培养25d30d,当组培苗基部长出健壮的不定根3条5条，根长为2cm3cm时，即可出瓶移栽。8培养条件培养室白天的温度控制在25±2C,夜间不低于15C,相对空气湿度控制在70%80%,光照强度为2000LUX3000Lux,光照时间为12hd-14hdo9炼苗移栽9.1炼苗将培养瓶转移到过渡培养室中，自然光照下炼苗2d3d,然后打开瓶盖，再炼苗2d3d,温度控制在2225。9.2 移栽从培养瓶中取出生根的小苗，用清水洗净根部的培养基，清洗培养基时动作要轻，避免伤根，将洗净的生根苗移栽至装有珍珠岩的穴盘中，每穴1株，移栽后要把苗周围的基质压实，然后浇透水。9.3 苗期管理将移栽后的组培苗放到温室中，保证幼苗水分供需平衡，育苗水分管理按照GB/T6001进行。移栽初期应进行遮阴，5d7d后发现幼苗有生长趋势，可以逐渐降低湿度，加强光照。温室环境应保持清洁，温度控制在2225C,空气湿度保持在70%80船光照强度为2000LUX2500Luxo10生产档案建立橡胶草组织培养育苗技术档案，包括环境和设备消毒、培养基制备、外植体诱导、继代增殖、生根培养、炼苗移栽等。