血管调控因子VEGF、TLR4联合循环肿瘤细胞在肺癌、乳腺癌和前列腺癌骨转移治疗中的研究.docx

血管调控因子VEGF、TLR4联合循环肿瘤细胞在肺癌、乳腺癌和前列腺癌骨转移治疗中的研究宁尚福，杨勇，凌振雄，林才华吴川市人民医院肿瘤科,广东湛江524500基金项目:湛江市科技计划项目(2020B1325)摘要目的探讨血管调控因子血管内皮生长因子(VEGF),Toll样受体4(TLR4)联合循环肿瘤细胞(CTCS)在肺癌、乳腺癌和前列腺癌骨转移治疗中作用。方法回顾性分析本院2019年1月2019年12月收治的I(M)例初诊肺癌、乳腺癌及前列腺癌骨转移患者的临床资料，观察不同骨转移灶数目、临床疗效及有无骨相关发生事件发生患者VEGF、TLR4、CTCs表达情况；另选同期本院收治的94例初诊肺癌、乳腺癌及前列腺癌无骨转移患者纳入对照组，对比骨转移组与对照组患者VEGF、TLR4、CTCS的表达情况C结果骨转移组VEGF.TLR4、CTCs阳性率分别为(341.85±40.68)pg/mL、(14.19÷1.37)、67.00%,均高于对照组的(236.97±28.75%8/0、(10.15±1.12)、14.89%,差异有统计学意义(<0.05)；骨转移灶数目23处组VEGF、TLR4、CTCs阳性率分别为(355.09±43.29)pgmL.(15.03±1.48)、82.35%,均高于骨转移灶数目<3处组的(313.72÷35.I3)pgmL.(12.41±1.14)、34.38%,差异有统计学意义(PVO.05)；有效组VEGF、TLR4、CTCS阳性率分别为(371.14士44.27)pg/mL、(16.28±1.53)、85.71%,均高于无效组的(334.06±39.73)pg/mL、(13.63±1.33)、62.03%,差异有统计学意义(PVO.05)；有骨相关事件发生组VEGF、TLR4>CTCs阳性率分别为(363.03÷42.26)pg/mL、(15.79±1.41)、79.49%,均高于无骨相关事件发生组的(328.31±39.67)pg/mL、(13.17±1.34)、59.02%,差异有统计学意义(P<0.05)0结论血管调控因子VEGF、TLR4及CTCs可用于肺癌、乳腺癌及前列腺癌骨转移的诊断、疗效和骨相关事件的评估。关键词1恶性肿瘤；骨转移；血管内皮生长因子；ToH样受体4；循环肿瘤细胞TheresearchofvascularregulatoryfactorsVEGFandTLR4combinedwithcirculatingtumorcellsinthetreatmentofbonemetastasisoflungcancer,breastcancerandprostatecancerNingShangfu,YangYong,LingZhenxiong,LinCaicaiDepartmentofoncology,Wuchuanpeople'sHospital,Zhanjiang,Guangdong,524500AbstractObjectiveTbexploretheroleofvascularregulatoryfactorsvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)andtoll-likereceptor4(TLR4)combinedwithcirculatingtumorcells(CTCs)inthetreatmentofbonemetastasisoflungcancer,breastcancerandprostatecancer.MethodsTheclinicaldataof100newlydiagnosedpatientswithbonemetastasesfromlungcancer,breastcancerandprostatecancerfromJanuary2019toDecember2019wereanalyzedretrospectively,andtheexpressionofVEGF,TLR4andCTCsinpatientswithdifferentbonemetastases,clinicalefficacyandbone-relatedeventswereobserved;inthesameperiod,94newlydiagnosedpatientswithlungcancer,breastcancerandprostatecancerwithoutbonemetastasiswereselectedandincludedinthecontrolgroup,theexpressionsofVEGF,TLR4andCTCswerecomparedbetweenthebonemetastasisgroupandthecontrolgroup.ResultsTheVEGETLR4andthepositiveratesofCTCsinbonemetastasisgroupwere(341.85±40.68)pgmL,(14.19±1.37)and67.00%,whichwerehigherthanthoseincontrolgroup(236.97±28.75)pgmL,(10.15±1.12)and14.89%,thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05);theVEGETLR4andthepositiveratesofCTCsinthenumberofbonemetastaseswas23were(355.09±43.29)pgmL,(15.03±1.48)and82.35%,whichwerehigherthanthoseof(313.72±35.13)pgmL,(12.41±1.14),and34.38%inthegroupwith<3bonemetastases,thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05);theVEGF,TLR4andthepositiveratesofCTCsintheeffectivegroupwere(371.l4±44.27)pgmL,(16.28±1.53)and85.71%,whichwerehigherthanthoseintheineffectivegroup(334.06±39.73)pgmL,(13.63±1.33)and62.03%,thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05);theVEGF,TLR4andthepositiveratesofCTCsinpatientswithbone-relatedeventswere(363.03±42.26)pgmL,(15.79±1.41)and79.49%,whichwerehigherthanthoseinpatientswithoutbone-relatedevents(328.31±39.67)pgmL,(13.17±1.34),59.02%,thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).ConclusionVascularregulatoryfactorsVEGF,TLR4andCTCscanbeusedforthediagnosisofbonemetastasisoflungcancer,breastcancerandprostatecancer,andtheevaluationofcurativeeffectandbone-relatedevents.KeywordsMalignanttumor;Bonemetastasis;Vascularendothelialgrowthfactor;TolMikereceptor4;Circulatingtumorcells骨转移为恶性肿瘤的常见并发症,骨转移易引发高钙、疼痛、病理性骨折等骨相关事件，严重影响患者生活质量。流行资料报道，多数肺癌、乳腺癌及前列腺癌患者可发生骨转移。目前骨转移的治疗缺乏根治性手段，抗骨转移治疗仅可延缓骨转移的进展，骨转移的早期诊疗对恶性肿瘤患者预后改善有重要作用。骨活检是诊断骨转移的金标准,但其创伤较大,难以用于骨转移治疗期间的动态监测。最新研究发现网，多种实验指标和恶性肿瘤骨转移有良好相关性。血管内皮生长因子(VEGF)能够为肿瘤细胞的生长提供有利条件，能够反映肿瘤恶性程度，临床研究报道，VEGF在多种恶性肿瘤骨转移患者中呈过表达。TLR4是介导炎症反应的重要因子，有研究认为，Toll样受体4(TLR4)的表达和恶性肿瘤的侵袭、转移能力有直接关系。循环肿瘤细胞(CTCS)对于恶性肿瘤预后评价有重要作用，既往研究表明,外周血CTCs浓度越高提示患者预后越差。本研究主要探讨血管调控因子VEGF.TLR4联合循环肿瘤细胞在肺癌、乳腺癌和前列腺癌骨转移治疗中的作用。1资料与方法1.1 一般资料回顾性分析本院2019年1月2019年12月收治的100例初诊肺癌、乳腺癌及前列腺癌骨转移患者的临床资料，入选标准：均符合肺癌、乳腺癌及前列腺癌的诊断标准，并通过穿刺活检病理确诊及手术切除术病理检查确诊;近期ECT骨扫描和MRl均明确诊断骨转移；预计生存期大于3个月；均有骨痛症状；均予以相关标准抗肿瘤治疗，并接受骨转移治疗。排除标准：既往有陈旧性骨折、骨退行性病变、骨慢性感染和其他肿瘤；肝功能损伤；既往因骨转移接受过相关治疗；其他肿痛转移；重度恶液质状态的癌症患者。100例患者中年龄2572岁，平均(53.97±5.42)岁；女43例，男57例；肺癌47例，乳腺癌23例，前列腺癌30例；骨转移灶<3处32例，23处68例。选择同期本院收治的94例初诊肺癌、乳腺癌及前列腺癌无骨转移患者纳入对照组，均无相关肿瘤转移，94例患者中年龄2670岁，平均(52.86±5.6l)岁；女38例，男51例；肺癌47例，乳腺癌17例，前列腺癌26例。两组患者基础资料比较无统计学意义(P>0.05)。1.2 治疗方法所有患者均依据自身情况和个体疾病分期接受相关标准抗肿瘤治疗,骨转移患者并接受对应的骨转移治疗。治疗结束时评价疗效，患者治疗后骨痛症状显著减轻或者消失，可正常生活纳入有效；疼痛有所改善或者无变化，对生活有明显影响纳入无效。骨转移患者均接受12个月随访，将随访期间发生骨转移疼痛加重或重新出现、骨转移灶增加、病理性骨折、脊髓压迫均纳入发生骨相关事件。1.3 观察指标收集所有患者清晨空腹外周静脉血，用酶联免疫分析法测定血浆中VEGF水平。用westernblot法检测患者血浆中TLR4mRNA表达情况。用Cellsearch检测系统测定外周血CTCs,将7.5ml外周血中CTCs检出个数25个纳为阳性。1.4 统计学分析数据处理选用SPSS20.0软件包，计量资料用（元±$）表示，选用，检验，计数资料用例（%）表示，用2检验比较，尸<0.05表示差异有统计学意义。2结果2.1骨转移及对照组患者VEGF、TLR4、CTCS对比骨转移组VEGF、TLR4、CTCS阳性率高于对照组，差异有统计学意义（PVO.05）,见表1。表1骨转移及对照组患者VEGF、TLR4、CTCS对比（了±$）,（例，%）组别例数VEGF(pgmL)TLR4CTCs阳性率骨转移组100341.85±40.6814.19±1.3767(67.00)对照组94236.97±28.7510.15±1.1214(14.89)/2值20.61922.40554.094P值<0.001<0.001<0.0012.2不同骨转移病灶者VEGF、TLR4>CTCS对比骨转移灶数目力3处组VEGF.TLR4、CTCs阳性率高于骨转移灶数目<3处，差异有统计学意义（P学.05）,见表2。表2不同骨转移病灶者VEGF、TLR4、CTCS对比（1±§）,（例，%）组别例数VEGF(pgmL)TLR4CTCs阳性率骨转移灶数目23处68355.09±43.2915.03±1.4856(82.35)骨转移灶数目<3处32313.72±35.1312.41±1.1411(34.38)f2值4.7208.84722.654尸值<0.001<0.001<0.0012.3不同骨转移疗效者VEGF、TLR4、CTCS对比有效组VEGF、TLR4、CTCS阳性率高于无效组（P<0.05）,见表3。表3不同骨转移疗效者VEGF、TLR4、CTCS对比（元±$）,（例，%）组别例数VEGF(pg/mL)TLR4CTCs阳性率无效组21371.14+44.2716.28÷1.5318(85.71)有效组79334.06÷39.7313.63+1.3349(62.03)“2值3.7117.8604.211P值<0.001<0.0010.0402.4骨转移有无骨相关事件发生者VEGF、TLR4、CTCS对比有骨相关事件发生组VEGF.TLR4、CTCs阳性率高于无骨相关事件发生组（P<0.05）,见表4o表4骨转移有无骨相关事件发生者VEGF、TLR4、CTCS对比，（例，%）组别例数VEGF（PgmL）TLR4CTCS阳性率有骨相关事件发生组39363.03+42.2615.79+1.4131（79.49）无骨相关事件发生组61328.31±39.6713.17±1.3436(59.02)正值4.1629.3444.509P值<0.001<0.0010.0343讨论肺癌、乳腺癌及前列腺癌为临床常见恶性肿瘤，此类肿瘤骨转移的风险较高，骨转移不仅影响原发疾病的治疗，且骨质破坏所致的病理性骨折、疼痛等也明显降低患者生活质量。但部分骨转移早期缺乏相关症状，尽早诊治对患者生存质量改善有重要作用。尽管正电子发射计算机断层扫描、磁共振成像对骨转移检测的特异度及灵敏度高，但其费用高昂，且有一定放射性损伤。近年来有研究发现，实验室指标对恶性肿瘤骨转移有较高的预测价值。肿瘤血管生成在恶性肿瘤发生发展中有重要作用，VEGF为血管调控因子，其可促进血管内皮细胞发生有丝分裂，参与肿瘤血管生成，增加血管通透性。临床研究证实闻，VEGF过表达能够增加实体肿瘤的瘤负荷，增强侵袭、转移能力。既往研究也表明Ul随着恶性肿瘤患者病理分级及临床分期的增加，其VEGF水平相应上升。现有研究指出口2】，VGEG和骨组织的生长有一定关系，VEGF可通过旁分泌、自分泌形式，调控细胞增殖、迁移、分化等反应，参与骨发育、修复和癌症骨转移。本研究结果显示，有骨转移组VEGF水平显著高于无骨转移组，提示VEGF水平和恶性肿瘤骨转移有一定关系，可能与VEGF高表达能够参与病灶微血管形成，增强肿瘤细胞的侵袭转移能力，促进肿瘤病灶的远处播散，从而导致骨转移的发生。同时本研窕发现，骨转移数目>3处患者VEGF水平相对较高，治疗后有效者VEGF水平明显低于无效者，提示通过测定VEGF水平能够一定程度的反映疗效。随访研究发现，发生骨相关事件者VEGF水平明显高于未发生骨相关事件者，进一步表明，VEGF对患者预后有一定预测作用。一项研究证明【，炎症反应能够参与肿瘤的发生发展，TLR4是炎症反应中的重要因子，其可在多种恶性肿瘤中高表达，和肿瘤增殖、侵袭等恶性生物学行为有关联。TLR4可诱导血管生成因子、抗凋亡蛋白的生成，促进肿瘤细胞生存，并引起免疫抑制，提高肿瘤细胞的侵袭能力。临床研究指出1川，TLR4是恶性肿瘤骨转移的危险因素，TLR4水平较高者更易发生骨转移。本研究观察显示,骨转移患者TLR4水平相对较高，随着骨转移灶数目的增加，患者TLR4水平相应上升,表明TLR4水平和恶性肿瘤患者骨转移有一定关系。经治疗发现，骨转移治疗有效者TLR4水平较低，且未发生骨相关事件者TLR4水平更低，提示TLR4水平和骨转移患者疗效和预后有一定关系。CTCs是由肿瘤脱落进入机体外周血的细胞，CTCs为恶性肿瘤扩散的主要表现形式。CTCS和原发肿瘤细胞的遗传特性或抗原相似，但其获取方式较肿瘤组织样本简单，且创伤更小，可重复性高。有关研究显示，CTCS具有侵袭性高、恶性程度高，可逃避机体的免疫监视等特点。血液中检出CTCS为实体瘤发生远处转移的必需条件，CTCS可降低细胞粘附力，减少上皮表达，导致细胞结构改变，增加间质表达，诱导肿瘤细胞迁移及浸润，从而参与恶性肿瘤转移灶的形成。张孝钦等E研究报道，CTCS可反映恶性肿瘤患者肿瘤转移和病情改变特征，对恶性肿痛的疗效和复发预测均有重要作用，可为疾病的诊疗提供参考依据。结合以上报道，提示CTCS在恶性肿瘤骨转移中有一定作用。本研究中，发生骨转移组CTCs阳性率相对较高，且骨转移灶数目>3者CTCs阳性率更高，提示CTCs对恶性肿痛的骨转移有一定预测价值。另外本研究中，骨转移治疗好转者CTCS阳性率更低，且未发生骨相关事件者CTCs阳性率也相对较低，说明CTCs能够一定程度的反映骨转移患者效果和转归情况。临床研究发现【网，TLR4能够促进VEGF的分泌，增强肿瘤细胞的侵袭能力。Banys-PaluchowskiM等研究报道，VEGF的表达下调能够抑制恶性肿瘤转移，减少CTCs计数。以上研究间接表明VEGF、TLR4及CTCS之间可能有一定相关性，但本研究尚未进一步分析三者之间的关系，有待后续研究循证。综上所述，血管调控因子VEGF、TLR4及CTCS的检测有利于肺癌、乳腺癌及前列腺癌骨转移患者病情、疗效和预后的判断。参考文献：口顾恒琼，李慧灵，苏鑫，等.初诊骨转移非小细胞肺癌患者的预后影响因素分析J海南医学，2018,29(14):48-51.2 FornettiJ,WelmAL,StewartSA.UnderstandingtheBoneinCancerMetastasisJ.JBoneMinerRes,2018,33(12):2099-2113.3 HiragaT.Bonemetastasis:InteractionbetweencancercellsandboneInicroenvironmentlJ.JOralBiosci,2019,61(2):95-98.4黄霓，游金辉.VEGF.p53在恶性肿瘤骨转移中相关机制的研究进展J医学综述，2018,24(11):86-90.5杨静，周颖，金咏梅，等.胰腺癌患者循环肿瘤细胞及TLR4、TLR9、myd88的表达水平与其化疗效果及转移、复发的关系J现代生物医学进展,2017,17(28):5524-5527.刘秋阁，刘亚楠，王刚，等.循环肿瘤细胞监测在晚期非小细胞肺癌疗效评价和预后评估中的作用J中国医科大学学报,2020,49(9):50-55+61.刘端祺，吴航宇.解读恶性肿瘤骨转移及骨相关疾病临床诊疗专家共识J.医学与哲学(B),2008,29(3):25-27.8吴国，朱哪鹤，王朝晖.ECT全身骨显像对早期诊断骨转移肿瘤的临床价值J海南医学,2016,27(8):1280-1281.9 SawadaY,KikugawaT,IioH,etal.GPRC5AfacilitatescellproliferationthroughcellcycleregulationandcorrelateswithbonemetastasisinprostatecancerJ.IntJCancer,202(),146(5):1369-1382.10贾晓辉，郝丽丽.血管内皮生长因子与肿瘤负荷相关性研究J中国免疫学杂志，2018,34(6):906-910.11段佳佳，王莹.FAP-与VEGF在乳腺癌中的表达及临床意义J.癌症进展，2019,17(20):2415-2418.12黄霓，游金辉.VEGF.p53在恶性肿瘤骨转移中相关机制的研究进展叫.医学综述，2018,24(11):86-9().13罗晓曦，陈国栋，焦扬，等.TLR4在炎性癌症中的研究现状J.中国免疫学杂志，2017,33(11):1735-1740.14 RajamanickamV,YanT,XuS,etal.SelectivetargetingoftheTLR4co-receptor,MD2,preventscoloncancergrowthandIungmetastasisJ.IntJBiolSci,2020,16(8):1288-1302.15盖希，范凤凤，李占文.循环肿瘤细胞检测在乳腺癌预后评估中的作用及与乳腺癌分子分型的关系J.浙江医学,2018,40(2):202-205.16谢宁，曾化桂，田璨，等.循环肿瘤细胞在40例晚期转移性乳腺癌患者中的检测意义J现代生物医学进展,2017,17(10):1856-1858.17张孝钦，陈玄一，郭盛昌.循环肿瘤细胞在晚期非小细胞肺癌化疗疗效监测及预后预测中的价值研究J中国全科医学,2020,23:183-188.18 TanjaG,RomanaM,JenniferK,etal.TollLikeReceptor2,4,and9SignalingPromotesAutoregulativeTumorCellGrowthandVEGF/PDGFExpressioninHumanPancreaticCancerJ.IntJMolSci,2016,17(12):2()60.19 Banys-PaluchowskiM,WitzelI,RiethdorfS,PantelK,etal.Theclinicalrelevanceofserumvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)incorrelationtocirculatingtumorcellsandotherserumbiomarkersinpatientswithmetastaticbreastcancerJ.BreastCancerResTreat,2018,172(1):93-1()4.