肌酸激酶同工酶（CK-MB）测定标准操作规程.docx

肌酸激酶同工酶(CK-MB)测定标准操作规程1.检验原理：(免疫抑制法)用抗人CK-M抗体与病人血清共同温育，血清中的CK-M亚单位全部被抑制，再用测定空白扣除血清中残余的腺首激酶(AK),测定剩余的非MYK活力，即代表C-BB和CK-MB中的B-亚基活力。由于健康人和心脏、肌肉疾患病人血清中CK-BB的含量极低，一般忽略不计，此等病人的非MYK活力实际上代表CK-MB中的B亚基活力。非M-CK活力测定方法如下：在抑制CK-M亚单位后，磷酸肌酸和腺苜-5-二磷酸二钠(ADP.Na?)在肌酸激酶作用下，生成肌酸和腺甘-5-三磷酸二钠(ATP.TVa2)。ATP和葡萄糖在己糖激酶(HK)催化下，生成6-磷酸葡萄糖(G6P).G6P在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下脱氢，同时使氧化型辅酶I(MLD+)还原成还原型辅酶I(NADH),后者引起34Onm吸光度的增高。在34Onm监测NADH的生成量，即可计算出非MYK的活力。CK-M亚单位+抗人CK-M抗体>抗体-抗原复合物磷酸肌酸+ADP'K>肌酸+ATPATP+葡萄糖一叫%>ADP+6-磷酸葡萄糖6-磷酸葡萄糖+¼ZT>6-磷酸葡萄糖酸+NADH+2 .试剂主要组成成分组成成分浓度Rl咪嘤缓冲液(PH6.0)1OOmmo1/L醋酸镁12.5mmolLN-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)20mmolL氧化型辅酶I2.5mmolL腺昔-5-单磷酸二钠(AMP.Na2)6.5mmolL腺昔-5-二磷酸二钠(ADP.Na2)2unolL葡萄糖1OOmmo1/L己糖激酶(HK)20kULR2磷酸肌酸二钠(CP.Na2)50mmolL抗人CK-M多克隆抗体>5000UL3.样本要求：静脉采血后立即分离血清。新鲜无溶血血清。在2225保存8小时，28保48小时，-20°C可保存1年。样本不可反复冻融!4.检验方法；仪器法(详见DF-603DI-600标准操作规程)5参考范围：样本参考范围(U/L)血清246 .检验结果的解释：6.1 样本含量超出线性范围时，建议用0.9%(WV)的氯化钠溶液稀释样本。建议最大稀释不超过10倍6. 2.单位换算：ukatL=UL×16.67×1037.检验结果的局限性7.1 结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。7. 2若试剂浑浊，或以水空白在340nm处吸光度大于0.600时不能使用。7. 3检验结果仅供参考，不作为临床诊断唯一依据。8.产品性能指标8.1 空白吸光度：在34Onnl处，光径ICm时，空白吸光度AW0.600。8. 2空白吸光度变化率：在34Onm处，光径ICm时，ZAmin<0.005.8. 3分析灵敏度：在34Onm处，光径ICm时，测定1U/L的样本，吸光度值AULminl×105o8. 4准确性：使用校准品校准生化分析仪和试剂后，测定质控品，相对偏差应不大于10%o8. 5精密度8. 5.1重复性：CV5%8. 5.2批间差：R10%8.6线性区间：试剂的线性范围为10TOOOUL,在此线性区间内：a)线性相关系数r应不小于0.9900；b)10-50UL区间内，线性绝对偏差不超过土5ULo50T000UL区间内，线性相对偏差不超过±10%。8.7干扰试验干扰物浓度(gL)是否有干扰抗坏血酸0.3无明显干扰脂血2.5无明显干扰胆红素0.4无明显干扰无明显干扰：添加干扰物后的测定值与初始测定值的相对偏差处于±10%以内。9.临床意义：CK-MB测定对于心肌缺血如急性心肌梗死或心肌炎的诊断中是一个重要指标。CK-MB在心脏病症状发生大约38小时，血中即可检出并能在较长时间内被检测出。CK-MB也能在其他临床情况出现如风湿性心肌炎和中风。在实验诊断的范围内总CK,肌球蛋白和肌钙蛋白T同时测定能提供鉴别诊断依据。CK-MB测定的灵敏度取决于标本采集时间，跟踪追查至关重要。