羟脯氨酸检测试剂盒说明书.docx

货号：QS1907规格：50管/48样羟脯氨酸(Hydroxyproliiie,HYP)试剂盒说明书可见分光光度法留意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做猜测定。测定意义HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。测定原理样品经酸水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物，在560rnn处有特征汲取峰。通过测定样品水解液56Onnl吸光值，可计算HYP含量。自备试验用品及仪器天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、6molL盐酸、高氯酸和蒸储水。试剂组成和配制组织提取液：6molL盐酸，自备。浓盐酸：H2O(V/V)=1:1,室温保存。细胞提取液：液体100mLXI瓶，4保存。试剂一：液体IomLXl瓶，4避光保存。试剂二：液体IOmLXI瓶，4避光保存。羟脯氨酸提取1 .组织：称取约0.5g样品于玻璃管，加入5mL的组织提取液，置于110烘箱，水解6至12小时，12000g,25,离心20min,用提取液定容至5mL,取上清待测。2 .细胞：取500万个细胞，加入2mL的细胞提取液，于高压消毒器中15磅保持30min,自然降压后待测。3 .血清等液体：直接测定。测定操作表空白管测定管样本(叱)200试剂一(IXL)200200混匀，室温静置20min试剂二(L)200200H2O(L)600400混匀，60,20min,取出后25静置15min,空白管调零，ImL玻璃比色皿，测定Aseoo羟脯氨酸含量计算公式标准曲线:y=64.875x+0.0251,R2=O.9991(1)按组织计算HYP含量(mgg鲜重)=(A560-O.0251)÷64.875XV反总÷(V样÷V样总XW)=0.385×(A560-O.0251)÷W(2)按细胞计算HYP含量(mg10,cell)=(A560-O.0251)÷64.875XV反总÷V样XV样总÷细胞数量(万个)=0.154×(A560-O.0251)÷细胞数量(万个)(3)按液体体积计算HYP含量(mgmL)=(A560-O,0251)÷64.875XV反总÷V样=0.077×(A560-O.0251)V反总：反应总体积，1mL；V样：反应中样品体积，0.2mL；V样总：加入提取液体积，mL；W：样品质量，g留意事项1、'OD值大于0.8,样品适当稀释再测定，留意计算公式里乘以稀释倍数。2、试剂有肯定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。3、最低检出限为3.8mgL°