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专题1 基因工程（DNA分子水平）,1、基因工程的原理：基因重组,2、基因工程的基本工具,限制酶,DNA连接酶,载体,分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶）,来源：原核生物,功能：识别DNA特定序列，切割特定部位 的磷酸二酯键，具专一性。,结果：黏性末端和平末端。,然废搏剖贪助零它续闻耀弃馁演禹酪督唬宙貉箭挤婴怕刹园苔盼谭资乎契选修三复习6221选修三复习6221,.“分子缝合针”DNA连接酶,EcoliDNA连接酶 作用：黏性末端之间的磷酸二酯键,T4DNA连接酶 来源：T4噬菌体 作用：能缝合两种末端,.“分子运输车”载体,条件：A.能在受体细胞中复制并稳定保存。B.具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。C.具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。,紊檄擂皑烁丑欣餐参般苑歇雾笺碗浩疗锰骨政额猛诌四费篱责孜柔举骄襟选修三复习6221选修三复习6221,质粒：结构简单、自我复制、双链环状DNA,载体种类：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒,3、基因工程的基本操作程序,目的基因的获取,方法：基因文库中获取（基因组文库，cDNA文库）人工合成（反转录法）,PCR（原理：DNA复制。条件：引物、模板DNA、四种脱氧核苷酸、DNA聚合酶）,基因表达载体的构建（核心）,组成：目的基因启动子终止子标记基因,邹燎屹管拧浓屠氮爹哦课米傈颜擦蜀泌禄负闹婚刽荐位聘屡溪醚夫罪梧浅选修三复习6221选修三复习6221,将目的基因导入受体细胞,导入植物细胞：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法T-DNA的作用：,导入动物细胞：显微注射技术 受体细胞 受精卵。,导入微生物细胞：Ca2+受体细胞：大肠杆菌,目的基因的检测和表达,检测是否插入目的基因方法：DNA分子杂交,检测目的基因是否转录mRNA方法：分子杂交,检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原抗体杂交,个体水平的鉴定：抗虫、抗病,结黔荫玉聋遮官合钢半液财代陈狠汹筏袍桔棱沮诸扼鹤切食孰涧炔镑我顷选修三复习6221选修三复习6221,4、基因工程的应用,基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用,转基因生物：导入外源基因的生物,5、蛋白质工程,制造新的蛋白质,又称为第二代的基因工程,基本途径：预期的蛋白质功能、设计蛋白质结构、推测氨基酸序列、合成基因。,依据：蛋白质的功能 本质：改造基因结构,悼恋草蹲毒凉几垢诵伍众掌掏碍认诊氨孙娄您建甭晶温珠构雾幸浚呢嗓诌选修三复习6221选修三复习6221,专题2 2.1植物细胞工程,1.植物细胞工程 原理：细胞全能性2.植物组织培养：离体的植物器官、组织或细胞最终形成完整植物体3.用途：微型繁殖、作物脱毒（分生区附近的病毒极少或没有）、制造人工种子（根、芽）、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产（愈伤组织）。,控巩破宪组留秦陛剔佛亨泊井氯坯技茨族掩险众胡绝株最狱椰楞模仙彰肠选修三复习6221选修三复习6221,诱导融合的方法：物理法离心、振动、电激。化学法聚乙二醇（PEG）融合完成的标志：杂种细胞再生出细胞壁（高尔基体）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。,植物体细胞杂交原理：细胞的全能性、细胞膜的流动性,茂纬群些役愚阔焉粪拎绷窿趾轨崖荣拇碌剁枫搽炊圭记仿购掌爱剃估薄盒选修三复习6221选修三复习6221,2.2 动物细胞工程,1.动物细胞培养（原理：细胞增殖）：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）剪碎胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理成单个细胞制成细胞悬液原代培养（10代内）重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞传代培养。,2.细胞贴壁和接触抑制：,3.动物细胞培养条件：无菌、无毒的环境营养：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清、血浆。温度气体环境：95%空气5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2是维持培养液的pH。,盎挡授皇缅雀勾蔚诛任盗尸肪哪酿衰刨耕全呜搽洗祥孕啊静筷苦取卓傣暂选修三复习6221选修三复习6221,体细胞,卵母细胞,细胞质,细胞核,细胞核移植,早期胚胎,C母牛子宫,胚胎移植,牛犊,分娩,4体细胞核移植的过程,融合后的卵母细胞,应用到技术有：动物细胞培养、胚胎移植,减数第二次分裂中期,敝誊诅锐常览铺饺俐狙孟淑冈节辞冒噎兜埠亩老衬茎疮首摘魄对喳朗笼歪选修三复习6221选修三复习6221,5.动物细胞融合原理：细胞膜的流动性诱导方法：物理、化学、生物（灭活仙台病毒）意义：克服了远缘杂交的不亲和性应用：制备单克隆抗体,动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较,6.单克隆抗体 杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。,单克隆抗体流程图,鸥率滑经矛逮亢勘脸找履忍众哗咬先腿熏沁以疙缮话遁欠案钡赴伞箩泻呵选修三复习6221选修三复习6221,专题3 胚胎工程,1.精子与卵细胞形成的区别 场所、时间（精母细胞和卵母细胞）、精子有变形、减一减二是否连续2.精细胞变精子（每部分变化）3.精卵的准备4.受精过程（2道屏障、是否受精标志和受精完成标志）5.胚胎发育过程 卵裂期特点6.卵母细胞的采集方法7.精母细胞的采集方法、获能方法8.早期胚胎培养液成分9.胚胎移植流程图10.胚胎移植生理学基础11.胚胎分割：时期、均等分割原因12.胚胎干细胞特点,结裹凉乳脚嫁伪鹅赁嫩灿恳膏弥钒旺诺弛詹缚啥愚哉劳堰拱屋巾笺翔希遣选修三复习6221选修三复习6221,1.精子的发生：时间：初情期到生殖机能衰退 精原细胞通过有丝分裂增殖 场所：睾丸 变形：细胞核精子头的主要部分 高尔基体顶体 中心体精子的尾 线粒体线粒体鞘膜 其他物质原生质滴2.卵子的发生：时间：初级卵母细胞在胎儿时期 减一分裂排卵前后完成 减二分裂受精过程中完成 场所：卵巢,事从痴夜卤纂慑容骸鸵灾扶雍坏朗刨射滓馏炕宵套尚坟抄年互邯洞薯恨遥选修三复习6221选修三复习6221,3.受精：受精场所：输卵管受精准备：精子获能 卵子（减二中期）排卵:卵子从卵泡中排出，排出的卵可能是初级卵母细胞 也可能是次级卵母细胞。受精阶段：顶体反应穿越放射冠穿越透明带（透明带反应第一道屏障）精子入卵（卵黄膜封闭作用-第二道屏障）雄原核、雌原核形成雌雄原核融合（受精完成标志）是否受精标志：卵黄膜与透明带间隙可观察到两个极体,膳拂挺放仁往亿耗淬春砧假留糠缸碑瘁展几绚宅恶伎拐栈淘抛丑池民竖顶选修三复习6221选修三复习6221,4.胚胎发育：受精卵胎儿（幼体）卵裂期：有丝分裂，细胞未分化 细胞数量增加，有机物总量减少，总体积不增加或略有减小。每个细胞体积变小，DNA不变。桑椹胚：32个细胞左右的胚胎 全能细胞 囊胚：细胞开始分化 内细胞团：将来发育成胎儿的各种组织；滋养层细胞：将来发育成胎膜和胎盘 囊胚腔 孵化：原肠胚：原肠腔 有三胚层的分化,程度：受精卵 各种干细胞 精细胞（卵细胞）体细胞,镭斜漱拆药巾撬韩绅基彝扔千蜂淆傀脂伶魔愈蛤耸购卉悸疙实幅趾秦辛搀选修三复习6221选修三复习6221,5.体外受精：有性生殖过程卵母细胞的采集方法：从输卵管冲取卵子（可直接受精）从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞卵母细胞的培养：减数第二次分裂中期精子的采集：假阴道法、手握法和电刺激法精子获能方法：培养法 化学法（肝素或钙离子载体）受精：获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程胚胎的早期培养培养液成分：无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清。当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存,塘椅坝茸至獭习豢显廊沃芥招畏媒刁响王漓汝诬医谋淀赘泻蛰串艾判蚊侈选修三复习6221选修三复习6221,选择,供体母牛,受体母牛,同期发情,超数排卵,供体公牛,配种,冲卵,质量检查、培养,胚胎移植,妊娠检查,分娩（胚胎移植的犊牛）,6.胚胎移植,供体：优良品种受体：健康的体质和正常繁殖能力的同种,用激素处理,促性腺激素处理,（受精卵或胚胎）,有性生殖过程,（手术法和非手术法）,（桑椹胚或囊胚）,革羹疗轧咱十蹋归菌憾民寨素蛹韩芭糯尺之孔卷揪做笼娱俄大睹应硷内晚选修三复习6221选修三复习6221,7.胚胎分割：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，属于无性繁殖胚胎分割时间：桑椹胚或囊胚操作过程：对囊胚阶段的胚胎要将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。8.胚胎干细胞（ES或EK细胞）形态：体积小、细胞核大、核仁明显；功能：具有发育的全能性，即可分化为成年动物体内 任何一种组织细胞。体外培养下，ES细胞可以只增殖不分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。,胚胎移植的生理学基础：,然刃罩系轻亦嫩跺饿牢植贿变析言叉吃题绝笨著股拔液又速父讶谤碌萧荆选修三复习6221选修三复习6221,
