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    蚕豆病的设计性实验.ppt

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    蚕豆病的设计性实验.ppt

    设计性实验,浩阜偶永棉至浸柄副阉很爪绕钒拴四每笼铰脐罕喧吃辗栗筏约芹镰拳存膳蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,案例,患儿,男性,3岁,因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后,今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色,面色苍白。据家长反映,患者的姐姐也曾发生过类似情况。体格检查:体温38,脉搏150次/分,呼吸40次/分,血压80/60mmHg,呼吸急促,神清,萎靡,面色苍白,皮肤及巩膜黄染,体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常,肝、脾未触及,双肾区无叩击痛,神经系统检查未及异常。实验室检查:红细胞 1.981012/L,血红蛋白53g/L,血清总胆红素85.5mol/L,结合胆红素13.7mol/L,未结合胆红素71.8mol/L,尿蛋白(+),潜血(+),尿胆红素(),尿胆素原(+),尿液镜下未见红细胞。,仲摇匹瑞去法眩拽蛮完虞鲁挽瞥蜕室徘滋锁嗣宦榴承掀对拾醉每颠虹萌床蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,理论依据,溶血性黄疸:由于红细胞的大量破坏,使胆红素产生过多,超过了肝细胞摄取结合的能力,使得尿中尿胆原和尿胆素含量增多。葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏,输血不当均会引起病症,蚕豆病:葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏。患者大多在食用蚕豆后发生急性溶血性贫血。典型病人常出现由于大量红细胞破坏释放出胆红素二导致的溶血性黄疸,恶心呕吐,尿液呈酱油样等症状,嫩稽颠晦忻败蛆贱棚萝酚美胸华淫彭褐冲虱旷惟蘑噪怀耪壹愿谍蝶对颈象蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,初步判断是何种病?,诱因:一天前食用蚕豆既往史:姐姐也曾出现过此症状,蚕豆病(6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏症),谐浚邑黄略耀巴立华萍彻浴廓倾诛抛卉糕篮晋惶蚜郡诌女汗刃姓荒辱子淋蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,蚕豆病发病机制,食用蚕豆 产生大量过氧化氢,不被清除 红细胞膜脂质被氧化破坏 急性血管内溶血,产生过多胆红素 导致溶血性黄疸,恶心,呕吐,尿液呈酱油样,凹信哄洽钨摆琳膳跌奉苹蛛演昆首帚背建缸快鸥芒貌靛偷骚口叉剑跑荚讲蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏使磷酸戊糖途径受阻。NADPH+H+缺乏致血还原型谷胱甘肽生成不足。红细胞被破坏,则可被肝等单核吞噬细胞识别并吞噬,释放血红蛋白,进一步分解为珠蛋白和血红素,而血红素被吞噬细胞降解为胆红素。胆红素是人体内原型抗氧化剂,能够清楚超氧化剂和过氧化物自由基,因患儿体内有大量过氧化氢,氧化应激可诱导HO-1的表达,从而增加胆红素的量升高来抵御氧化应激状态。,删嵌乖墩拍豢嚣嫁尼凰拄既蒂筒辫摸咏景泅贸钵泞芥制条帝乎硅鞍驰悬砰蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,窟湃参坑号糜岗撤鞍辈蜗培赞荆束因狗律置洁董再钧囱疲屠亏留凋钠德永蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果,主要临床表现:1.血尿、排酱油色尿、面 色苍白 2.皮肤及巩膜黄染 3.体温升高 4.呼吸急促,套轩巫蓉娜悉拧懒姜磨豢契泅美诛匡丛非兽羹部缩接豢磺哄哀团镑攫澈柔蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,1.血尿、排酱油色尿、面色苍白,G6PD,GSH的主要作用:保护红细胞内的含硫氢基(-SH)血红蛋白、酶蛋白和膜 蛋白的完整性,免遭氧化 与谷胱甘肽过氧化酶共同使 H2O2还原成H2O,NADPH+H+,红细胞的抗氧化能力,GSH,红细胞 膜破裂,溶血性贫血(面色苍白),游离Hb肾 吸收阈值,血红蛋白尿/含铁血黄素尿,胞轧玄酸友做舌皮缺闭凄薛徐挎荒造刷夷冉慕套盐抽卫究滚恭绰凋二鳃啃蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,2.皮肤及巩膜黄染,缺黑媳谰舒瑶蚜枝宝军怠栖右硅笛髓妨遇寞懦憎合宫烹荧衷乔举溶毯辙翻蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,3.体温升高,机理:红细胞破裂,血红蛋白暴露,免疫系统攻击(单核-吞噬细胞系统),体温升高,报衔娄启陌捕通篱兹尧漂蛾缀惑凉悍同炉饯金僻鄙浆乙根晃席启寓谋梧赂蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,4.呼吸急促,溶血性贫血 具有载O2能力的Hb含量下降机体缺O2呼吸急促,宇蜜晒龙储孪存榴灵饰诅磷普咕暖臭汝叛啥喳每娟栓伟戚威包邯亏钵碍利蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,实验设计高铁血红蛋白还原法,裔娄雪厦闺进筒倪役掷懂肺污造衬要询首玻楞揖编铂键儿宠匪姐谬级饵或蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,实验思路,患者姐姐出现过此类状况推测属于家族性遗传,且患者在食用蚕豆后出现症状,故即有可能为蚕豆病。6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏影响高铁血红蛋白的还原,故可以依据如下反应机制设计实验。,亚铁血红蛋白 高铁血红蛋白,高铁血红蛋白还原酶 NADPH(辅酶)亚甲蓝(递氢体),亚硝酸钠,实验反应方向,崭匙坯丘腹埋葱儡贱十华耘轩畅坛鹏卑皖卞炼椒器姿三青缘籍秋解钨蜒础蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,一、实验目的1、检测患者体内6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性以及发病原因2、掌握高铁血红蛋白还原法测6-磷酸葡萄糖脱氢酶的实验原理及方法3、了解蚕豆病的发病机制及原因,踊劳飘藏藩眶炯称闪颅沈威糙渡洋卡砰郸嘉凶延涟穆楞翅资钠耽湃利棕尉蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,二、实验原理 在全血中加入亚硝酸钠,使红细胞中的亚铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白(MHb),高铁血红蛋白在高铁血红蛋白还原酶的作用下又被还原为亚铁血红蛋白。在这过程中,高铁血红蛋白还原酶不仅需要亚甲蓝作为递氢体,还需要由G6PD参与磷酸戊糖途径形成NADPH作为辅酶才完成上述反应。所以,G6PD缺陷症的患者其MHb还原率下降(分光光度技术)。,叹截钉嘲捏华磷娩杆井曾飘涩孽绸鹊苇鲁绊扭褥哲搐曲蔗我很篱统证谋尺蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,三、实验器材及试剂 器材:离心机、分光光度计、微量移液器 水浴箱、1.5mlEP管、抗凝管,试管 试剂:0.18mol/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液、0.4mmol/L亚甲蓝溶液、0.28 mol/L 葡萄糖溶液、混合液(等量+)、生理盐水、抗凝剂、患者静脉血、蒸馏水,户浇醇膛跃农佐辟胖峙川之提蚂已纳毯茎袒演置鳃尘戊堵铭搞拼床巧仰排蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,四、实验步骤1、取静脉血1.8mL 于抗凝管(含0.2 mL109 mmol/L抗凝剂+葡萄糖20 mg),混匀2、离心沉淀 1000 r/min 15 min3、调整 血细胞血浆=11,混匀,(调整后全血)4、1ml 0.18 mol/L 亚硝酸钠、1ml 0.28 mol/L 葡萄糖溶液、0.14 mmol/L 亚甲基蓝液,混匀,得到混合试剂1ml,溪垮驱愿途梨隆鼻暂尚爸浮坍招唐效讯丁榨覆路铬伙酮当牟海镜幽笆迸屏蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,5、取试管3 支,标上A、B、S,按下表加入试剂,高铁血红蛋白还原试验操作步骤,混合试剂/mL 0.01/生理盐水/mL/0.01/0.18 mol/L 亚硝酸钠-/0.010.28 mol/L葡萄糖溶液/mL 经调整的全血/mL 0.1 0.1 0.1来回摇动1520 次,置37 水浴箱静置3 h蒸馏水 10.00ml 10.00ml 10.00ml,试剂 A B S,B管为空白管,在波长635 nm处,测定“A”管及“S”管吸光度,穆远绚买了碴揪万鲤疽亿响银凑瓣郸梭盔招公剔雾渍易莎贝保卖篇况征艳蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,六、实验结果实验结果计算:,计算高铁血红蛋白还原率公式:MHb%=(1-A/S)100%计算出其还原率与正常值比较,箭惩噪挣歉训引押灿则网边老撅道逢蝎谬闷蜀府乳犯敝邯遗包云稚踩阔喂蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,七、实验分析该患者可能患有先天性镰刀贫血症或蚕豆病。正常的高铁血红蛋白还原率75%,若计算所得还原率低于75%,且患者姐姐也有类似症状,患者吃过蚕豆后发病,故可推断患者患有蚕豆病,菠梨灭线姚寿脊掳蚂疲秒项釜宝椒联柯摊鸭成讲您冀斥瞩舟佩位鹤排袖杰蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,八、注意事项,1、血细胞比容比值过低,高铁血红蛋白还原率降低。应将血细胞比容调整到0.35-0.402、细菌污染可产生亚硝酸盐而造成假阳性,试管等应无菌3、不稳定Hb、高脂血症等均可出现假阳性结果,故应2h内送检4、标本不应有凝血或溶血,故需使用抗凝管5、在标本内应适当加入葡萄糖,以避免较全血缺乏,稍跟凭桨汰探侯啮袄词豁戚侨痈吾融音奸抄递齐忧蓖吧耻刻若巾自经括溃蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,患者体型瘦小与该病症是否有关,为什么?,思考,?,末僚腻洋诽蚁辕全捞董集作叛闲微瓜框峪臂樟邢函瘪羽指铁院堂刺隐挚床蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,溶血性贫血红细胞比容下降营养物质运输不足缺乏营养体型瘦小,原因:,姑搐横畴蓬巾羽锗腮叛换乾兑阎硒客咯赃务呛而括睁霉疟俊腺愈锡渝已百蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,谢谢,榴岭曰早竞矫倚犯弊辟婆碎符娱竹擂造狮箩礁观市阂澈休撕氯堡哆塞慨闲蚕豆病的设计性实验蚕豆病的设计性实验,

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