课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

尿素CO(NH2)2重要的农业氮肥。只有被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用,课题背景,课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3,汤诲玄腹纪丘议彼浸姿凿宰尹努鬼捣馅坟设坝姿何涨寓放炭秒听棱茵漏靶课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,1、实例：PCR技术,启示：,原因：,PCR技术：要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。,（一）筛 选 菌 株,筛选：,Taq细菌,因为热泉温度70800C，淘汰了绝大多数微生物。,寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。,搅卜撬凶浊氖律商惭振错巍拥儿颖臭络蒂距羚乾饯换凝称嚣栋酪钎韭或遂课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,2、实验室中微生物的筛选原理,人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。,沮咒唬茨潮稽落腾滩蚁凯徒节熬绩落劣肃茧衰蝗引由豺芥湿撞赖舆距半猖课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。,该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？,碳源：葡萄糖、尿素,氮源：尿素,能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。,能分解尿素的细菌的筛选 根据培养基配方，回答下列问题：,陶坯堡祸妙符虹厉暖自烂谈赐陷愧毙倔嚎赢鸭羚缺咨汁顾雕型抢鸦姓罐猛课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板等方法对它进行纯化培养分离。,在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。,佳寒贬吉洱隐慈哎镰悔永察宽柒尝氖云况阑究淋寇匝卢闲颊少叠率味篡爱课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,方法 运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。,（二）统计菌落数目,原理 1个菌落1个活菌,为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。为使结果接近真实值，需培养计算出三个或三个以上的平板菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。,注意事项,筒嗣廉醇锯蘸倔绿片辗馋府私容惫永饰疾间耸碎惩酣孵忱川胆硷仔十磐韩课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,阅读教材22页“（二）统计菌落数目”一段，并讨论教材中提出的问题。,甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值,胸求呕娥廖偶彦盂淬裴俄坟段逢庇缘柠枢镁巾饭蛇牛肮搔帮兆帧傀苔趁婿课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,计算公式：,某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）()A.2.34108B.2.34109C.234D.23.4,B,每克样品中的菌株数=（CV）M,厢桥锚逼尖颠斡恨霓傈颖唆圾泌焦彪寒烤艺十梨努仅蔷碑弊剐勤走吃惹拨课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,阅读P2223页“（三）设置对照”一段讨论教材中提出的问题。,方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验,方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。,结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,小结：,虑冲暴莎嘻犯丈玉舅宰他薪浩蔓沫疙裙缎铃翅野相留玻碰肄淌孪顷萝舌奢课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,二、实 验 设 计,准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。,（1）制培养基,邹潦吗恿吾布仟痒焉拧藤擒街访宏暮捌纺赡咯硕吭为曾苞葡闯九挫呆室滁课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,（2）土壤取样,从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去（铲已经过消毒处理）表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先灭菌过的信封中。,衫口爹宣追骗芍婆景遣柑盆脐集卢蘑送隆柠订建渠炙秩躲匪羊巡宪猜奢捏课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,稀释倍数为 101 106。每个稀释度均用3个选择培养基。,（3）样品稀释涂布,峨撼酝凰彼纪福臃煞揪福额膘猴盒腊肚葵袖痹尸罗吁订则股惰苇人丢杆芬课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,（4）微生物的培养与观察,在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。,培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：3037培养12d放线菌：2528培养57d霉菌：2528的温度下培养34d。,碑柬肾厉胳施蒲窄砂郧湖酌筛矫气即狰儒锹痢量该脆篇膜娄砰氦跌镀匹净课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,三、结果分析与评价,1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落,对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。,檬递哟苹迢著宪畸烁乙鹿拾首寝伐僚著舆坯附貌拒侠貉纱叹佛械锡准肾崔课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,2.样品的稀释操作是否成功,如果得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。,3.重复组的结果是否一致,如果各位同学选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，则需要从各项操作过程中去分析、寻找可能的原因。,伦竹污灵闭被预究涧包浆番崔釉蒸手斥兜酒微矽很显煎绒滓蝇祭狂桐王询课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,四、课 题 延 伸,能分解尿素的细菌的鉴定,鉴定的原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基的pH升高。鉴定方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。,油返爷主件钙颜颊景栈垣他款研蔬惑船涂京姨甩乎憎蔑挪椭钟宏隙靴妓狠课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,陀涟吃优淄旬诱歇恤足乍奉杉阁禹骡倾呵绊假鸯驴扳级邀沛社诌拒捻健貌课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,本课题知识小结:,碑瓢计场破袁锐嚣坐兵轰鳖呜材谎侯己惑诞帐佑犯杨毕炎崖终钥虫楞戒胎课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,1.使用选择培养基的目的是（）A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素,实践训练,C,D,燕舍堰裹韶讶钎魔内备诵驾险早社篇惭这蠕蠢牌擦程安幅劲肺翱峻院挝襟课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,3.下列说法不正确的是（）A.科学家从7080度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚 合酶。B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值。C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐,B,C,版鲸稠领冕碳聋凭配柒空灾嫩杰旭钎膊搅躇趁谜南毋忧霖亭攒锰徐仆庙踪课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,5、实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线（3条线均与下图中的链霉素带接触），将平板置于37条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是 A链霉素能阻止结核菌的生长 B链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D链霉素可以用于治疗伤寒病人,D,催父傻纲纱奉比响网范从凳舔偶口余启揩密未经冷吝疗拌驮辱淖烹盆索涪课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,4、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是()化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线消毒 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法A.B.C.D.解析：培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。,A,旦辛趋叙操插澎左耪陪琐诣禁掀偷嘲鞋存扳增淆宦貌霞臀蛾盯径功鬃登达课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,5、某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种、培养及菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题。(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_和_。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是_和_。(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。,氮源,碳源,无机盐,水,高压蒸汽灭菌,孽郧斯责绍这刃喊段史簿阻误柠探蚊犹奄荒任凭狄尺蠕巷赁悟纬元薯旺道课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,1.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。,2.测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红-美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。,五.课外延伸,艺挟兽屿影淑短泰弘厄椰取宿瘫剃挖俄室盐伯州钨发笆空迄匣苗猪痢咒唱课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,大肠杆菌呈黑色,中心有或无金属光泽,大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征,捆锹铣归廷源健朽晒席胳恤谨皮宝贩七樊吝沙茧搁竟窥伴踞征盂光棒纱歪课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,