浦北陈皮中毒死蜱和克百威快速检测胶体金免疫层析法.docx

ICS 65.100CCS G 23团 体 标 准T/CAI lxx-2023浦北陈皮中毒死婢和克百威快速检测胶体金免疫层析法（征求意见稿）2023-XX-XX 实施2023-XX-XX 发布中国农业国际合作促进会发布前言I1范围12规范性引用文件13原理14试剂与材料15仪器与设备26分析步骤27结果判定28结果确认39性能指标3IO其他4附录A （规范性附录）快速检测方法性能指标计算 5,ll.l.1刖百本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规 定起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件版权归中国农业国际合作促进会所有。未经事先书面许可，本标准的任何部分不得以任 何形式或任何手段进行复制、发行、改编、翻译、汇编或将木文件用于其他任何商业目的。本文件由钦州市检验检测中心提出.本文件由中国农业国际合作促进会归口。本文件起草单位：钦州市检验检测中心、本文件主要起草人：浦北陈皮中毒死婢和克百威快速检测胶体金免疫层析法1 范围本文件规定了浦北陈皮中毒死螂和克百威快速检测胶体金免疫层析法的原理、试剂与材料、仪 器与设备、分析步骤、结果判定、性能指标等。本文件适用于浦北陈皮及其原材料中克百威和毒死蟀的快速测定。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改 单）适用于本文件。GB 2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法食药监办科201743号食品快速检测方法评价技术规范3 术语和定义以下列术语和定义适用于本文件。3 . 1浦北陈皮pubei Chenpi在钦州市浦北县行政区域内栽培的茶枝柑（CitrUS reticulata iChachi,）的果皮经晒干或烘 干，并在区域范围内贮存陈化三年以上的果皮产品。按采收加工时间可分为：柑青皮（青 皮）、微红皮（二红皮）和大红皮（红皮）。4 原理本产品检测过程中方法应用了竞争法免疫层析原理，在层析过程待测液中的待测物与金标 抗体结合，抑制了金标抗体与硝酸纤维素膜上的竞争抗原（T线）的结合，从而影响T线显 色。5 试剂与材料5.1 试剂除另有说明外，所有试剂均应为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682中二级水的要求。5.2 材料5.2.1 检测卡克百威快速检测卡。5. 2.2样品稀释液应由胶体金免疫层析试纸条配套提供，或按照其说明书配制。6. 2.3参考物质克百威和毒死婢参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表 1,纯度98%°表1克百威参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量克百威Carbofuran1563-66-2C12H15NO3221.252毒死婢ChlorpyrifbS2921-88-2C9HhCi3NO 3PS350.5865. 3标准溶液配制7. 3. 1标准储备液（IOoO mgL）应准确称取毒死婢、克百威标准品各约IOmg （精确至0.1 mg）,用甲醇溶解，定容至IOmL, 避光-18 及以下条件保存，有效期12个月。8. 3.2标准中间液（IOmg/L）应准确吸取0.1 mL标准储备溶液（5.3.1）,用甲醇稀释，定容至IOmL,避光-18 °C及以下条 件保存，有效期1个月。9. 3. 3标准工作液（1 mgL）应准确吸取0.1mL标准中间液（5.3.2）,用甲醇稀释，定容至IomL, （TC5C冷藏避光保 存，有效期23周。10. 仪器与设备所需设备仪器应如下：a）电子天平：感量为0.01 g；b）移液器：20L200L 100 L-1000 L;c）涡旋仪。11. 分析步骤11.1 样制备陈皮样品取样部位应按GB 2763的规定执行，选取一定量的有代表性样本，剪成约ICmXlCm 的碎片，备用。11.2 样提取应称取l±0.1 g样本于50 mL离心管中；加入3 mL样品稀释液，剧烈振荡3 min：离心管内混合 液即为待测液。注：若混合液不易吸取，应置于离心机中离心Imin。7. 3测定步骤将待测液OOL （胶头滴管约3滴）加入检测卡的加样孔中，加样同时开始计时；在室温 （2025）反应5min后判读结果。注1：测定步骤建议按照试纸条说明书。注2：结果判定建议使用读数仪，读数仪的具体使用参照仪器使用说明书。1. 4质控试验7. 4. 1试验方式每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。8. 4.2空白试验应称取空白试样，按照7.2和7.3步骤与样品同法操作。9. 4.3加标质控试验应准确称取空白试样2 g （精确至0.05 g）放入离心管中，加入40 L克百威和毒死婢标准工作液 （4.2.3）,使试样中克百威和毒死蛛浓度为0.02 mgkg,按照6.2和6.3步骤与样品同法操作。8 结果判定8.1 读数仪测定将待判读检测卡插入仪器，选择对应项目和批号进行检测，根据仪器显示结果进行判读。仪器 使用方法详见仪器使用说明书。8.2 目视判定应通过对比质控线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。目视判定示意图见图Io8. 3判定方式8. 3.1阴性结果T线显色比C线显色深或一样深，表示样品中待检测物质浓度低于检测限，或不含待检测物 质。8. 3. 2阳性结果T线显色比C线显色浅，或T线无显色，则表示样品中待检测物质浓度高于检测限。10. 3.3无效质控C线未显色，表明操作过程不正确或检测卡已失效，检测结果无效。sCT(二二)s无效阴性阳性图1目视判定示意图8.4质控试验要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。11. 结果确认当检测结果为阳性时，应按照GB 2763指定方法标准进行确证.10性能指标12. 1检出限：0.02 mg/kgo12.1 灵敏度：95%O12.2 特异性：90%°12.3 假阴性率：5%o12.4 假阳性率：10%注：性能指标计算方法见附录A。11其他木方法所述试剂、试纸条信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限 定。方法使用者应使用经过验证的满足本方法规定的各项性能指标的试剂、试纸条。附录A（规范性）快速检测方法性能指标计算A.1快速检测方法各个性能指标计算见表A.1。表A.1快速检测方法性能指标计算表样品情况,检测结果b总数阳性阴性阳性NIlN12Nl=Nl 1+N12阴性N21N22N2=N21+N22总数N.1=N11+N2IN.2=NI2+N22N=NI.+N2.或 N.1+N.2显著性差异（X2）X2=(N12-N21 I -I)2/ (N12+N21), 自由度(df) =1灵敏度（p+, %）p+=NllNl.特异性（p-, %）p-=N22N2.假阴性率（Pj %）Pf-=NI2N1.= 1OO-灵敏度假阳性率（pf+, %）pf+=N21/N2.= 100-特异性相对准确度，%c(N11+N22)(N1.+N2.)U山参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果：b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。N：任何特定单元的结果数，第一个 卜.标指行，第二个下标指列。例如：NII表示第一行，第一列，Nl.表示所有的第一行，N.2表示所有的 第二列：N12表示第一行，第二列。C为方法的检测结果相时准确性的结果，与致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。