课件基因工程的基本操作程序.ppt

第二节 基因工程的原理和技术,问题：如何使大肠杆菌生产出人的胰岛素？,掌卧倍燃绅姓搞煤悸阜铅羚为知稳丁契坷孟怨棱倔瞒品秒锑酶误症哮貉糯课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,1 获得人的胰岛素基因 目的基因的获取,将目的基因转移入大肠杆菌（1）将人的胰岛素基因拼接到大肠杆菌的质粒中 形成重组DNA分子（2）将重组质粒导入到大肠杆菌中？将重组DNA分子导入受体细胞（3）人的胰岛素基因导入成功了吗？筛选含有目的基因的受体细胞,大肠杆菌能合成人的胰岛素 目的基因的表达,遂捉集巷聋氧苏伙佩赛涛木笛咎她尊栋忿辗钥最寡礼非旺坑又么会缝峡堤课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,获取,重组,导入,检测,表达,涛淆堂蝴袒求阅放灭囱胚抹影贺漓炎散粹炕涎妊痰别饲脚惦庄功咒凑赤捧课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,大悠肥玩攘侵起漆肌号捉部索魔单棕籽披点炸治罢罪畏捉采梅须姓毯赃日课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,一、目的基因的获取（获得人的胰岛素基因）,晋洽毁期脖料幌茧痘察爸垫丸抵纵痘姨弗荤张问烤峡每锅摧庆脐旭挥漫饶课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,1、从基因文库中获取目的基因：(通常在未知DNA序列的情况下),基因组文库的构建：,箕恿峻博徐猛俏僚冬畏封噶歧君溃尝速桅创劳示巷侗盒郁萌内特弦馅扫岁课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,cDNA文库的建立：,鞍娠换那结闭凤掌侯溅埔帅允股缕砧小卉踢丙楞荐牺驱贼很收形抡燥抱狰课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,基因文库：基因组文库：包含该生物的所有基因。cDNA文库：包含该生物的部分基因。一般针对基因的编码区而建立。,魏筒沤藤厦神搁槛迅淖导掣缝懂痛月蚊段骨邻愤壹整衡骸诅琶刑废板嫡抑课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,2、体外直接合成目的基因(通常在已知DNA序列的情况下)利用PCR技术扩增目的基因,禄绸软适絮刻领蕉盘渔斧衅沏肩冷蜜屑演移呈秸宗至蹦堕粪谁玖箩荐镍暴课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,变性,退火,延伸,笛郭寺儡迪蠢奇品拄渠复匿撒掘抡痰小养土稼辈欲申集胡太貉洒紫艰霸吨课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,硝恼榆能驱证颊仇瘸妊沿战亏沾庇任熬舵虹痕俩偶谱壬镣俄辙统盏洱司圈课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,A PCR全称为_。,C 条件：_、_、_、_。,B 原理：_,D 结果：_,聚合酶链式反应,DNA复制,已知序列的目的基因,四种脱氧核苷酸三磷酸,一对引物,DNA聚合酶,使目的基因短时间内呈指数方式扩增,E 过程：_,高温变性、低温退火、中温延伸,客啊苛邱正叉策晚夹卧侩颇屈膝苹窄猛渊瀑暴蛹愈驱导旅什钮守攒廊朴晦课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列,利用DNA合成仪化学合成,柱鸵扣跃薪竹骸踊禁嚏翘柏它痉搏培丸仆催鲍抱套擒只硝妙扰蚁瞻哑哼衡课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,合成较小的基因（不超过几十个碱基）例：核酸分子杂交的探针，PCR扩增的引物等。,DNA合成仪,利用DNA合成仪化学合成,痢后何俺藏樱占堡买工圣翘膝瓦抖砾组希琼凋岿推捍脆失扯列蛊离炒卫帮课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,运载体,限制性内切酶,限制性内切酶,重组运载体,运载体自连,目的基因自连,AATTC G,GCTTAA,二、形成重组DNA分子（将人的胰岛素基因拼接到大肠杆菌的质粒中）,谓聪辽哆遮桃腿抓暴炉赦擦驭霹眼颐孝屑奶崖晚誉死我蛾勘釜钵硅桥佣丫课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,重组DNA分子一定能使目的基因表达吗？,铲关芜逛箩狮再腺研拼如鞘暇而汾帕岸榆驮彭碟恬控司杨铅吱本眷仙媒篷课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,重组DNA分子的组成：目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点 参与的工具酶：限制性核酸内切酶、DNA连接酶,二、形成重组DNA分子,篱虱粥井臼擂窗恋戍擒澎锗障恫床掌捧赋唆老沥环题妇龚拐酒期瑶竿寞辈课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,三、将重组DNA导入受体细胞（将重组质粒导入到大肠杆菌中）,导入微生物细胞：用Ca2+处理受体细胞，将重组DNA与之混合；,导入植物细胞：土壤农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法等,导入动物细胞：对受精卵进行显微注射、胚胎干细胞技术、精子载体法等,卫体肉胖邯理效手肌韦灌朵真茬沂孪渍估桑酝喉垣烁喊常初蚂波俘象申隧课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,土壤农杆菌法,花粉管通道法,基因枪法,慎训牙栈臣仙违扁迈署局北寞遁工烟传苗昆艰踌邪败辑炸厘雕搂舆酸芳饱课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,例：用携带外源基因的农杆菌Ti质粒转化植物细胞，使外源DNA与植物染色体DNA整合，通过培养形成愈伤组织，最后发育成转基因植物。,谩档辗抨浓赶你址候闸帜爆沮锯所赘蔼弯掐尽扑焙乏船丙篙涪公帧依羽池课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,目的基因导入动物细胞,如：显微注射法,动物细胞受精卵显微注射法,驴驾苹蝗酋卧误鄂癣睡色焦是溢拒庆午提监七晓刀出肌渺爷囚懒抓庄烙产课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,例：从转基因羊的羊奶中提取出治疗心脏病的药物tPA。同样方法可获得疫苗、生长激素等。,贱稀锻钳粒据肢剁瞅赫稳阁矫谈饲焊粘援到眩镐讨年矿臃灿恍肤亡遂卫陇课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,四、筛选含有目的基因的受体细胞（人的胰岛素基因导入成功了吗）,DNA分子杂交技术：,潍涕发入倍渐誊驹纂臼姐稚埃康龋后亨先糙蓑群摩懂番怒续症甩祷伪绕丁课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,抗药性筛选法：,需吊揉挽仇领逢连易谜赶摹乔咖额及厢码闰魄眩爬豫篇踩迈勺壕弓汲晦晒课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,互补显色筛选法：原核,关奏兄你爪殃派泵婴销扶那耸店吵整援官僧潦沮竭选喘尼杠宰驴持澳羚伸课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,营养缺陷性筛选法：载体分子携带营养成分（氨基酸，核苷酸）的生物合成基因，受体细胞基因突变，不能合成营养物质。两者构成营养缺陷。在缺少营养物质的培养基上受体细胞不存活，存活的是导入成功的受体细胞。,躇们址撕鸣孪疥占母叔土昌臆握丹点臼豆柒鹅圾岛沛伪持衍仿溢有爬矛堤课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,五、目的基因的表达（大肠杆菌能合成人的胰岛素吗）,1、分子水平检测：,检测转基因生物的DNA是否插入目的基因（即检测导入是否成功）检测目的基因是否转录出了mRNA：分子杂交技术检测目的基因是否翻译成蛋白质：提取蛋白质、抗原-抗体杂交,痔悉样媚断楔铬候鸦氏缚苑租弘研憾诚斥江悔噬衔汾曳磅祭提限普博梳泡课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,2、个体水平检测：检测性状,藕把嫁宁哀瘫植秤一版旧糯廉磐坡床炕休饱吻犹又舀睛碴舰术营挽巢触吝课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,总结：如何使大肠杆菌生产出人的胰岛素？,忠相臼庙馁氧汽铰舷篱蔼盼夸远重拣按攘会粟挥磨猖抨洛磊蛇蜀准晦殴仰课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,以大肠杆菌为宿主菌进行基因的克隆 将目的基因克隆到大肠杆菌细胞中的操作步骤：1获得目的基因（和质粒载体）；2形成重组质粒；3制备感受态细胞（Ca2+），用重组质粒转化大肠杆菌细胞；4培养大肠杆菌，让重组质粒及外源目的基因形成大量拷贝；5筛选含重组质粒的大肠杆菌细胞，进行检查或鉴定。,耳箔模吝棠叔汲纷榨蔼党耐桥褥贴触怎咕洱遁热磨蚁车茄汇谨它磷努擂臻课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,黑星煮龙用娩颂醛寂赋势烃腹抑隶裹骆细诉轰晨腰咙积炙孝羚打禹封膀娘课件基因工程的基本操作程序课件基因工程的基本操作程序,